Zkoumání endogenní a/nebo exogenní produkce fenolických metabolitů in vivo pomocí (ne)cílené metabolomiky (ENDOPHENOL)

Studie se bude skládat z randomizované zkřížené studie a každé rameno bude trvat 5 dní. Pro studii v Parmě (PR) bude přijato celkem třicet (30) zdravých dobrovolníků pomocí oznámení umístěných na univerzitě, v nemocnici a na veřejných místech. Pro přiřazení subjektů do každé větve bude vygenerován seznam pomocí návrhu náhodných bloků pomocí Random Number Generator Pro (Segobit Software). Tento seznam bude pro PI a dobrovolníky slepý, protože jej vypracuje kolega, který se nepodílí na zápisu subjektů, a bude používat očíslovanou sekvenci v zapečetěných neprůhledných obálkách.

Dobrovolníci, kteří dobrovolně přijmou účast ve studii, budou požádáni o písemný informovaný souhlas. Informace dobrovolníkům budou poskytnuty před a odděleně od formuláře souhlasu. Tyto informační listy a formuláře informovaného souhlasu byly připraveny v souladu s Oviedskou úmluvou a považují se za vodítko místní Etické komise. Po získání písemného informovaného souhlasu se dobrovolníci podrobí screeningové návštěvě za účelem zjištění způsobilosti a sběru osobních údajů.

Soukromí dobrovolníků bude zajištěno prostřednictvím pseudoanonymizace přidělením osobního alfanumerického kódu. Přijatí dobrovolníci také podepíší souhlas s používáním osobních údajů a získaných dat.

Po náboru se subjekty zúčastní první návštěvy, kdy budou shromážděny osobní údaje a změřeny tělesné složení a parametry antropometrie. Poté dostanou potraviny, doplňky a materiály nezbytné pro sledování studie. Rekrutované subjekty budou požádány, aby dodržovaly dietu s nízkým obsahem (poly)fenolů, která bude stejná pro všechny dobrovolníky a bude udržována po celou dobu intervenční studie. Jídlo, způsob přípravy a časy konzumace jídla zajistí sponzor. Dieta bude přizpůsobena tak, aby se přiblížila potřebným kaloriím na základě naměřené bazální rychlosti metabolismu, vynásobené úrovní fyzické aktivity nastavenou na 1,45, a budou existovat kvantitativní variace na dietě s nízkým obsahem (poly)fenolů na základě denní energetické potřeby: 1500 kcal/den, 1750 kcal/den, 2000 kcal/den, 2250 kcal/den, 2500 kcal/den, 2750 kcal/den nebo 3000 kcal/den, vše s nutričně vyváženým množstvím bílkovin, tuků a sacharidů. Kromě toho budou účastníci požádáni, aby během trvání studie omezili fyzické cvičení.

Subjekty budou požádány, aby shromáždily moč vytvořenou během 60 hodin před intervencí, počínaje večerem před prvním dnem diety (od 21:00 noci před prvním dnem diety) a každých 12 hodin (60-48 hodin, 48-36 hodin). , 36-24h, 24-12h, 12-0h) a k vyplnění jídelního deníku ke kontrole dodržování diety. Subjekty jsou požádány, aby přinesly odebranou moč do oddělení lidské výživy oddělení potravin a léčiv Univerzity v Parmě.

Ráno třetího dne diety budou subjekty požádány, aby dorazily na Parmskou univerzitu v podmínkách hladovění. Před přijetím intervence budou odebrány vzorky moči a slin nalačno. Poté bude poskytnuta slazená káva bez kofeinu (3 dávky po 50 ml a 5 g cukru) nebo slazená voda (150 ml vody a 5 g cukru) podle randomizace paží spolu se standardizovanou snídaní skládající se z nutričně vyvážené pevné jídlo a voda bez (poly)fenolů (ad libitum).

Po snídani budou subjekty požádány, aby autonomně sbíraly moč po dobu následujících 48 hodin ve specifikovaných časových bodech (0 - 3 h; 3 - 6 h; 6 - 9 h; 9 - 12 h; 12 - 24 h; 24 - 36 h; a 36 - 48 h). stejnou personalizovanou dietu. Konečně, subjekty autonomně odeberou vzorek stolice během 6 až 48 hodin po intervenci.

Ráno posledního dne, po posledním odběru moči, přinesou subjekty odebrané vzorky moči a stolice a 5denní potravinový deník na Oddělení lidské výživy na oddělení potravin a léčiv Univerzity v Parmě.

Po prvním rameni se subjekty vrátí ke svému obvyklému životnímu stylu po dobu 2 po sobě jdoucích týdnů, následně se zúčastní další návštěvy, kdy budou zopakována všechna antropometrická hodnocení provedená během první návštěvy a bude přidána další sada s potravinami a informacemi pro personalizovanou dietu. být dán. Vzhledem k tomu, že studie je zkřížená, bude dodržovaný protokol stejný jako výše popsaný (kromě odběru vzorků slin, který bude proveden pouze jednou). Třetí den diety budou subjekty, které v předchozím rameni studie požily kávu, přijímat vodu a naopak.

Pro tuto studii byla velikost vzorku odhadnuta s ohledem na průměrnou koncentraci (poly)fenolů získaných z kávy a jejich metabolitů v moči jako primární výsledek a dostupnou literaturu o podobných přístupech a studiích v této oblasti. Počet 30 dobrovolníků byl stanoven s ohledem na akceptované parametry pro klinické studie (výkon nastavený na 0,8 a α nastavený na 0,05), možné předčasné ukončení (15% míra výpadku) a vyloučení dobrovolníků, aby se zachoval výkon vzorku pro statistickou analýzu. Před provedením jakéhokoli srovnání bude vyhodnocena normalita každé proměnné, aby se vybral nejvhodnější statistický test. Pokud jsou data metabolitů normálně distribuována, data budou vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka a analyzována pomocí opakovaného měření t-testu nebo ANOVA s post-hoc srovnáním. Pokud data nejsou normálně distribuována, budou hlášena jako medián a mezikvartilní rozsah a bude proveden Friedmanův test s post hoc párovým porovnáním. P-hodnota < 0,05 bude považována za statisticky významnou.

K identifikaci a charakterizaci různých metabotypů moči bude použita nekontrolovaná a kontrolovaná multivariační analýza, a to podle postupů vyvinutých naší výzkumnou skupinou pro cílenou metabolomickou analýzu fenolických metabolitů nebo při použití necílených metabolomických dat. K lepšímu prozkoumání stávající variability budeme používat různé přístupy shlukování. To bude sloužit ke stanovení počtu shluků (tj. fenolických metabotypů), počtu účastníků tvořících každý shluk a podobností mezi možnými metabotypy.

Vztah mezi vzory LMWP a jejich domnělými determinantami (věk, pohlaví, etnicita, životní styl, antropometrie, tělesné složení, genotyp a střevní mikrobiom) bude zkoumán pomocí korelačních testů a multivariačních analýz. P-hodnota < 0,05 bude považována za statisticky významnou. Statistiku budou provádět specializovaní pracovníci Oddělení lidské výživy pod dohledem PI a ve spolupráci s univerzitními týmy, které mají na starosti mikrobiální profilování a genotypizaci.