Исследование эндогенной и/или экзогенной продукции фенольных метаболитов in vivo с использованием (не)целевой метаболомики (ENDOPHENOL)

Исследование будет состоять из рандомизированного перекрестного исследования, каждая группа продлится 5 дней. Всего для исследования в Парме (ПНР) будет набрано тридцать (30) здоровых добровольцев с использованием объявлений, размещенных в университете, больнице и общественных местах. Чтобы распределить субъектов по каждой группе, список будет создан с использованием рандомизированной схемы блоков с помощью генератора случайных чисел Pro (программное обеспечение Segobit). Этот список будет скрытым для ИП и добровольцев, поскольку он будет составлен коллегой, не участвующим в наборе субъектов, и будет использовать пронумерованную последовательность в запечатанных непрозрачных конвертах.

Добровольцам, добровольно согласившимся участвовать в исследовании, будет предложено письменное информированное согласие. Информация волонтерам будет предоставлена ​​до формы согласия и отдельно от нее. Эти информационные листы и формы информированного согласия были подготовлены в соответствии с Конвенцией Овьедо и учитывают руководство местного комитета по этике. После получения письменного информированного согласия волонтеры пройдут проверочный визит для определения соответствия критериям и сбора личных данных.

Конфиденциальность волонтеров будет обеспечиваться посредством псевдоанонимизации путем присвоения личного буквенно-цифрового кода. Набранные волонтеры также подпишут разрешение на использование личной информации и полученных данных.

После набора субъекты пройдут первый визит, во время которого будут собраны личные данные и измерены состав тела и антропометрические параметры. Затем они получат продукты, добавки и материалы, необходимые для участия в исследовании. Набранным субъектам будет предложено соблюдать диету с низким содержанием (поли)фенолов, которая будет одинаковой для всех добровольцев и будет поддерживаться в течение всего периода интервенционного исследования. Продукты, режим приготовления и время приема пищи будут предоставлены спонсором. Диета будет персонализирована таким образом, чтобы приблизить необходимое количество калорий на основе измеренного уровня основного обмена, умноженного на уровень физической активности, установленный на уровне 1,45, а также будут количественные вариации диеты с низким (поли)фенолом, основанные на ежедневной потребности в энергии: 1500 ккал/день, 1750 ккал/день, 2000 ккал/день, 2250 ккал/день, 2500 ккал/день, 2750 ккал/день или 3000 ккал/день, и все это со сбалансированным количеством белков, жиров и углеводов. Кроме того, участникам будет предложено ограничить физические упражнения на время исследования.

Субъектам будет предложено собирать мочу, произведенную в течение 60 часов до вмешательства, начиная с вечера перед первым днем ​​диеты (с 21:00 ночи, предшествующей первому дню диеты) и каждые 12 часов (60-48 часов, 48-36 часов). , 36-24ч, 24-12ч, 12-0ч), а также заполнить дневник питания для проверки соблюдения диеты. Субъектов просят принести собранную мочу в отдел питания человека Департамента пищевых продуктов и лекарств Университета Пармы.

Утром третьего дня диеты испытуемым будет предложено прибыть в Пармский университет натощак. Перед проведением вмешательства будут взяты образцы мочи и слюны натощак. Затем в соответствии с рандомизацией групп будет предоставлен подслащенный кофе без кофеина (3 дозы по 50 мл каждая и 5 г сахара) или подслащенная вода (150 мл воды и 5 г сахара) вместе со стандартным завтраком, состоящим из не содержащая (поли)фенолов, сбалансированная по питательным веществам твердая пища и вода (ad libitum).

После завтрака субъектам будет предложено самостоятельно собирать мочу в течение следующих 48 часов в определенные моменты времени (0–3 часа; 3–6 часов; 6–9 часов; 9–12 часов; 12–24 часа; 24–36 часов; и 36–48 часов), после та же индивидуальная диета. Наконец, субъекты самостоятельно соберут образец фекалий в течение 6–48 часов после вмешательства.

Утром последнего дня, после последнего сбора мочи, субъекты должны принести собранные образцы мочи и фекалий, а также дневник питания за 5 дней в отдел питания человека Департамента пищевых продуктов и лекарств Университета Пармы.

После первой группы субъекты возобновят свой привычный образ жизни в течение 2 недель подряд, после чего они посетят еще один визит, когда все антропометрические оценки, проведенные во время первого визита, будут повторены, и будет получен еще один набор с продуктами питания и информацией для индивидуальной диеты. быть данным. Поскольку исследование является перекрестным, его протокол будет таким же, как описанный выше (за исключением отбора проб слюны, который будет проводиться только один раз). На третий день диеты субъекты, которые употребляли кофе в предыдущей группе исследования, будут пить воду, и наоборот.

Для этого исследования размер выборки оценивался с учетом средней концентрации полученных из кофе (поли)фенолов и их метаболитов в моче в качестве основного результата, а также доступной литературы по аналогичным подходам и исследованиям в этой области. Число добровольцев в 30 было установлено с учетом принятых параметров клинических исследований (мощность установлена ​​на уровне 0,8 и α установлена ​​на уровне 0,05), возможного выбывания (15% уровень выбывания) и исключения добровольцев для сохранения мощности выборки для статистического анализа. Прежде чем проводить какое-либо сравнение, будет оценена нормальность каждой переменной, чтобы выбрать наиболее подходящий статистический тест. Если данные о метаболитах распределены нормально, данные будут выражены как среднее ± стандартное отклонение и проанализированы с использованием t-теста повторных измерений или ANOVA с апостериорными сравнениями. Если данные не распределены нормально, они будут представлены как медиана и межквартильный размах, и будет выполнен тест Фридмана с апостериорными парными сравнениями. Значение P <0,05 будет считаться статистически значимым.

Неконтролируемый и контролируемый многомерный анализ будет использоваться для идентификации и характеристики различных метаболомических типов мочи в соответствии с процедурами, разработанными нашей исследовательской группой для целевого метаболомического анализа фенольных метаболитов или при использовании нецелевых метаболомических данных. Мы будем использовать различные подходы к кластеризации, чтобы лучше изучить существующую изменчивость. Это послужит для установления количества кластеров (т.е. фенольных метаботипов), количества участников, образующих каждый кластер, и сходства между возможными метаботипами.

Взаимосвязь между моделями LMWP и их предполагаемыми детерминантами (возраст, пол, этническая принадлежность, образ жизни, антропометрия, состав тела, генотип и микробиом кишечника) будет изучена с использованием корреляционных тестов и многомерного анализа. Значение P <0,05 будет считаться статистически значимым. Статистические данные будут проводиться специализированным персоналом Отдела питания человека под руководством ГУ и в сотрудничестве с университетскими группами, отвечающими за микробиологическое профилирование и генотипирование.