Fenolisten aineenvaihduntatuotteiden in vivo endogeenisen ja/tai eksogeenisen tuotannon tutkiminen (ei) kohdennettua aineenvaihduntaa käyttämällä (ENDOPHENOL)

Tutkimus koostuu satunnaistetusta ristikkäistutkimuksesta, ja jokainen haara kestää 5 päivää. Parmaan (PR) tutkimukseen rekrytoidaan yhteensä kolmekymmentä (30) tervettä vapaaehtoista yliopistoon, sairaalaan ja julkisiin paikkoihin sijoitettavien ilmoitusten avulla. Kohteiden jakamiseksi kullekin haaralle luodaan luettelo satunnaistetun lohkorakenteen avulla käyttämällä Random Number Generator Prota (Segobit-ohjelmisto). Tämä luettelo on sokea PI:lle ja vapaaehtoisille, koska sen laatii kollega, joka ei ole mukana koehenkilöiden ilmoittautumisessa, ja käyttää numeroitua sarjaa suljetuissa, läpinäkymättömissä kirjekuorissa.

Vapaaehtoisilta, jotka vapaaehtoisesti suostuvat osallistumaan tutkimukseen, pyydetään kirjallinen tietoinen suostumus. Tietoa vapaaehtoisille toimitetaan ennen suostumuslomaketta ja siitä erikseen. Nämä tiedotteet ja tietoon perustuvat suostumuslomakkeet on laadittu Oviedon yleissopimuksen mukaisesti ja niissä otetaan huomioon paikallisen eettisen toimikunnan ohje. Saatuaan kirjallisen suostumuksensa vapaaehtoiset käyvät seulontakäynnillä kelpoisuuden määrittämiseksi ja henkilötietojen keräämiseksi.

Vapaaehtoisten yksityisyys varmistetaan pseudoanonymisoinnilla antamalla henkilökohtainen aakkosnumeerinen koodi. Rekrytoidut vapaaehtoiset allekirjoittavat myös valtuutuksen henkilötietojen ja haettujen tietojen käyttöön.

Rekrytoinnin jälkeen koehenkilöt osallistuvat ensimmäiselle vierailulle, jolloin kerätään henkilötietoja ja mitataan kehon koostumus ja antropometriset parametrit. Sitten he saavat tutkimuksen seuraamiseen tarvittavat ruoat, lisäravinteet ja materiaalit. Rekrytoituja koehenkilöitä pyydetään noudattamaan vähä(poly)fenolista ruokavaliota, joka on sama kaikille vapaaehtoisille ja jota noudatetaan koko interventiotutkimuksen ajan. Ruoat, valmistustapa ja aterioiden syömisajat huolehtii sponsori. Ruokavalio räätälöidään niin, että se vastaa likimääräisesti tarvittavia kaloreita mitatun perusaineenvaihdunnan perusteella kerrottuna fyysisen aktiivisuuden tasolle 1,45, ja vähä(poly)fenolia sisältävään ruokavalioon tulee määrällisiä vaihteluita päivittäisen energiantarpeen perusteella: 1500 kcal/vrk, 1750 kcal/vrk, 2000 kcal/vrk, 2250 kcal/vrk, 2500 kcal/vrk, 2750 kcal/vrk tai 3000 kcal/vrk, kaikki ravitsemuksellisesti tasapainotetut proteiini-, rasva- ja hiilihydraattipitoisuudet. Lisäksi osallistujia pyydetään rajoittamaan fyysistä harjoittelua tutkimuksen aikana.

Koehenkilöitä pyydetään keräämään virtsa, joka on tuotettu 60 tuntia ennen toimenpidettä, alkaen ensimmäistä ruokavaliopäivää edeltävästä illasta (kello 21.00 ensimmäistä ruokavaliopäivää edeltävänä yönä) ja 12 tunnin välein (60-48h, 48-36h). , 36-24h, 24-12h, 12-0h) ja täyttämään ruokapäiväkirjaa tarkistaaksesi ruokavalion noudattamisen. Tutkittavia pyydetään tuomaan kerätty virtsa Parman yliopiston elintarvike- ja lääkeosaston ravitsemusyksikköön.

Kolmannen ruokavaliopäivän aamuna koehenkilöitä pyydetään saapumaan Parman yliopistoon paasto-olosuhteissa. Ennen interventiota otetaan paastopaikalta virtsa- ja sylkinäytteet. Sitten tarjotaan sokeroitua kofeiinitonta kahvia (3 annosta 50 ml kukin ja 5 g sokeria) tai sokeroitua vettä (150 ml vettä ja 5 g sokeria) käsivarsien satunnaistuksen mukaisesti sekä standardoitu aamiainen, joka koostuu (poly)fenoliton, ravitsemuksellisesti tasapainotettu kiinteä ateria ja vesi (ad libitum).

Aamiaisen jälkeen koehenkilöitä pyydetään keräämään virtsa itsenäisesti seuraavien 48 tunnin ajan tiettyinä ajankohtina (0 - 3 h; 3 - 6 h; 6 - 9 h; 9 - 12 h; 12 - 24 h; 24 - 36 h ja 36 - 48 h) seuraavina päivinä. sama henkilökohtainen ruokavalio. Lopuksi koehenkilöt ottavat itsenäisesti ulostenäytteen 6–48 tunnin kuluessa interventiosta.

Viimeisen päivän aamuna, viimeisen virtsankeräyksen jälkeen, koehenkilöt tuovat kerätyt virtsa- ja ulostenäytteet sekä 5 päivän ruokapäiväkirjan Parman yliopiston elintarvike- ja lääkeosaston ravitsemusyksikköön.

Ensimmäisen kierroksen jälkeen koehenkilöt jatkavat tavanomaista elämäntapaansa 2 peräkkäisen viikon ajan, jonka jälkeen he osallistuvat uudelle käynnille, jolloin kaikki ensimmäisellä käynnillä tehdyt antropometriset arvioinnit toistetaan ja toinen pakkaus, joka sisältää ruokia ja tietoja henkilökohtaiseen ruokavalioon. annetaan. Kun tutkimus on ristikkäinen, noudatettava protokolla on sama kuin yllä kuvattu (paitsi sylkinäytteenotto, joka suoritetaan vain kerran). Kolmantena ruokavaliopäivänä koehenkilöt, jotka nauttivat kahvia tutkimuksen edellisessä osassa, nielevät vettä ja päinvastoin.

Tässä tutkimuksessa näytekoko arvioitiin ottaen huomioon kahviperäisten (poly)fenolien ja niiden metaboliittien keskimääräinen pitoisuus virtsassa ensisijaisena tuloksena ja saatavilla oleva kirjallisuus samanlaisista lähestymistavoista ja alueen tutkimuksista. 30 vapaaehtoisen määrä määritettiin ottaen huomioon kliinisissä kokeissa hyväksytyt parametrit (teho asetettu arvoon 0,8 ja α asetettu arvoon 0,05), mahdolliset keskeyttämiset (15 %:n keskeyttämisprosentti) ja vapaaehtoisten poissulkeminen otosvoiman säilyttämiseksi tilastollista analyysiä varten. Ennen kuin vertailu suoritetaan, kunkin muuttujan normaalisuus arvioidaan sopivimman tilastollisen testin valitsemiseksi. Jos metaboliittitiedot jakautuvat normaalisti, tiedot ilmaistaan ​​keskiarvona ± standardipoikkeama ja analysoidaan käyttämällä toistettujen mittausten t-testiä tai ANOVAa post-hoc-vertailuilla. Jos tiedot eivät jakaudu normaalisti, ne raportoidaan mediaani- ja kvartiilivälinä ja suoritetaan Friedman-testi post hoc -parivertailuilla. P-arvo < 0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseväksi.

Valvomatonta ja valvottua monimuuttujaanalyysiä käytetään eri virtsan metabotyyppien tunnistamiseen ja karakterisointiin noudattaen tutkimusryhmämme kehittämiä menetelmiä fenolien metaboliittien kohdennettuun metabolomiikkaanalyysiin tai käytettäessä kohdentamatonta metabolomiikkadataa. Käytämme erilaisia ​​klusterointimenetelmiä tutkiaksemme nykyistä vaihtelua paremmin. Tämä auttaa määrittämään klusterien (eli fenolisten metabotyyppien) lukumäärän, kunkin klusterin muodostavien osallistujien määrän ja mahdollisten metabotyyppien yhtäläisyydet.

LMWP-mallien ja niiden oletettujen determinanttien (ikä, sukupuoli, etnisyys, elämäntapa, antropometria, kehon koostumus, genotyyppi ja suoliston mikrobiomi) välistä suhdetta tutkitaan korrelaatiotesteillä ja monimuuttujaanalyyseillä. P-arvo < 0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseväksi. Tilastoinnista vastaa Ihmisravitsemusyksikön erikoishenkilöstö PI:n valvonnassa ja yhteistyössä yliopiston mikrobiprofiloinnista ja genotyypitystä vastaavien tiimien kanssa.