Investigación de la producción endógena y/o exógena in vivo de metabolitos fenólicos utilizando metabolómica (no)dirigida (ENDOPHENOL)

El estudio consistirá en un ensayo cruzado aleatorio y cada grupo tendrá una duración de 5 días. Se reclutará un total de treinta (30) voluntarios sanos para el estudio en Parma (PR), mediante anuncios colocados en la universidad, hospital y lugares públicos. Para asignar sujetos a cada brazo, se generará una lista utilizando un diseño de bloques aleatorios utilizando Random Number Generator Pro (software Segobit). Esta lista será ciega para el IP y los voluntarios, ya que la elaborará un colega que no participará en la inscripción de los sujetos y utilizará una secuencia numerada en sobres opacos sellados.

A los voluntarios que acepten libremente participar en el estudio se les solicitará su consentimiento informado por escrito. La información a los voluntarios se proporcionará antes y por separado del formulario de consentimiento. Estas fichas informativas y los formularios de consentimiento informado han sido elaborados según el Convenio de Oviedo y consideran la guía del Comité Ético local. Después de obtener su consentimiento informado por escrito, los voluntarios se someterán a una visita de selección para determinar la elegibilidad y recopilar datos personales.

La privacidad de los voluntarios estará asegurada mediante pseudoanonimización mediante la atribución de un código alfanumérico personal. Los voluntarios reclutados también firmarán una autorización para el uso de la información personal y los datos recuperados.

Después del reclutamiento, los sujetos asistirán a una primera visita, en la que se recopilarán datos personales y se medirán los parámetros de composición corporal y antropometría. Luego, recibirán los alimentos, suplementos y materiales necesarios para seguir el estudio. A los sujetos reclutados se les pedirá que sigan una dieta baja en (poli)fenoles, que será la misma para todos los voluntarios y se mantendrá durante todo el período del estudio de intervención. Los alimentos, el modo de preparación y los horarios para consumir las comidas serán proporcionados por el patrocinador. La dieta se personalizará para aproximarse a las calorías necesarias en función de la tasa metabólica basal medida, multiplicada por el nivel de actividad física establecido en 1,45, y habrá variaciones cuantitativas en la dieta baja en (poli)fenoles en función del requerimiento energético diario: 1500 kcal/día, 1750 kcal/día, 2000 kcal/día, 2250 kcal/día, 2500 kcal/día, 2750 kcal/día o 3000 kcal/día, todos con cantidades nutricionalmente equilibradas de proteínas, grasas y carbohidratos. Además, se pedirá a los participantes que restrinjan el ejercicio físico durante la duración del estudio.

Se pedirá a los sujetos que recolecten la orina producida durante las 60 h previas a la intervención, comenzando desde la noche anterior al primer día de dieta (desde las 21.00 horas de la noche anterior al primer día de dieta) y cada 12 horas (60-48 h, 48-36 h , 36-24h, 24-12h, 12-0h), y completar el diario alimentario para comprobar el cumplimiento de la dieta. Se pide a los sujetos que lleven la orina recolectada a la Unidad de Nutrición Humana del Departamento de Alimentos y Medicamentos de la Universidad de Parma.

En la mañana del tercer día de dieta, se solicitará a los sujetos que lleguen a la Universidad de Parma en ayunas. Antes de recibir la intervención, se recolectarán muestras de orina y saliva en ayunas. Luego, se proporcionará café descafeinado azucarado (3 dosis de 50 ml cada una y 5 g de azúcar) o agua azucarada (150 ml de agua y 5 g de azúcar) según la aleatorización de los brazos, junto con un desayuno estandarizado que consta de una comida sólida y agua (ad libitum), libre de (poli)fenoles y nutricionalmente equilibrada.

Después del desayuno, se pedirá a los sujetos que recolecten orina de forma autónoma durante las próximas 48 h en momentos específicos (0 - 3 h; 3 - 6 h; 6 - 9 h; 9 - 12 h; 12 - 24 h; 24 - 36 h; y 36 - 48 h), siguiendo la misma dieta personalizada. Por último, los sujetos recolectarán de forma autónoma una muestra fecal dentro de las 6 a 48 horas posteriores a la intervención.

En la mañana del último día, después de la última recolección de orina, los sujetos traerán muestras de orina y heces recolectadas y el diario de alimentación de 5 días a la Unidad de Nutrición Humana del Departamento de Alimentos y Medicamentos de la Universidad de Parma.

Luego del primer brazo, los sujetos retomarán su estilo de vida habitual durante 2 semanas consecutivas, posteriormente asistirán a otra visita, donde se repetirán todas las evaluaciones antropométricas realizadas durante la primera visita y se les entregará otro kit con alimentos e información para la dieta personalizada. ser dado. Al ser el estudio un diseño cruzado, el protocolo seguido será el mismo que el descrito anteriormente (excepto el muestreo de saliva, que solo se realizará una vez). Al tercer día de dieta, los sujetos que ingirieron café en el brazo anterior del estudio ingerirán agua y viceversa.

Para este estudio, el tamaño de la muestra se estimó considerando la concentración media de (poli)fenoles derivados del café y sus metabolitos en la orina como resultado primario y la literatura disponible sobre enfoques y estudios similares en el área. El número de 30 voluntarios se estableció considerando los parámetros aceptados para los ensayos clínicos (poder establecido en 0,8 y α establecido en 0,05), posibles abandonos (tasa de abandono del 15%) y exclusión de voluntarios para mantener el poder de la muestra para el análisis estadístico. Antes de realizar cualquier comparación, se evaluará la normalidad de cada variable para elegir la prueba estadística más adecuada. Si los datos de los metabolitos se distribuyen normalmente, los datos se expresarán como media ± desviación estándar y se analizarán mediante la prueba t de medidas repetidas o ANOVA con comparaciones post hoc. Si los datos no se distribuyen normalmente, se informarán como mediana y rango intercuartil y se realizará la prueba de Friedman con comparaciones post hoc por pares. El valor de p <0,05 se considerará estadísticamente significativo.

Se utilizará un análisis multivariado supervisado y no supervisado para identificar y caracterizar los diferentes metabotipos urinarios, siguiendo los procedimientos desarrollados por nuestro grupo de investigación para el análisis metabolómico dirigido de metabolitos fenólicos o cuando se utilizan datos metabolómicos no dirigidos. Utilizaremos diferentes enfoques de agrupación para explorar mejor la variabilidad existente. Esto servirá para establecer el número de grupos (es decir, metabotipos fenólicos), el número de participantes que forman cada grupo y las similitudes entre posibles metabotipos.

La relación entre los patrones de LMWP y sus supuestos determinantes (edad, sexo, origen étnico, estilo de vida, antropometría, composición corporal, genotipo y microbioma intestinal) se explorará mediante pruebas de correlación y análisis multivariados. El valor de p <0,05 se considerará estadísticamente significativo. La estadística será realizada por el personal especializado de la Unidad de Nutrición Humana, bajo la supervisión del IP, y en colaboración con los equipos de la Universidad encargados del perfil microbiano y el genotipado.