自閉症スペクトラム障害（ASD）の子供におけるプロバイオティクス摂取の影響

自閉症スペクトラム障害 (ASD) は、幼児期に始まる神経発達異常のグループであり、多くの場合、コミュニケーションや社会的行動の問題を特徴とします。 腸内微生物叢によって生成される代謝産物は、腸-脳-軸の存在を支える胃腸（Gl）管および中枢神経系（CNS）の機能に影響を与える可能性があります。 これまでの研究では、定型発達の対照群と比較して、ASDの小児における腸内マイクロバイオームの変化が実証されています。 ASDの小児において、プロバイオティクスの使用を含む食事の修正により、胃腸機能とCNS機能がプラスに変化する可能性がある。 発展途上国において、ASDの子供によるプロバイオティクス摂取が微生物叢の組成、腸の機能、行動に及ぼす影響を評価する臨床研究はほとんど行われていない。 したがって、この研究の一般的な目的は、ASDの子供の腸内微生物叢の組成、栄養状態、免疫状態におけるプロバイオティクスの補給の効果を判断することです。

キト首都圏に住むASDと診断された子供たちを含めた無作為化クロスオーバー研究が実施される。 包含基準と除外基準を確認した後、66 人の参加者が選択されます。 最初に、ASD と診断された子供はランダムに 2 つのグループに分類されます。 グループ A (n=33) には、250 mg の用量で 1 日 3 回、4 か月間 Sb サプリメントが投与されます。 一方、グループ B (n=33) は 4 か月間サプリメントを受けません。 その後、30 日間の「ウォッシュアウト」期間が続き、この期間中はどちらのグループもプロバイオティクスを摂取しません。 この期間の後、子供たちのグループはさらに 4 か月間治療を変更します。 研究者らは行動、腸内微生物叢、メタボローム、栄養状態、胃腸症状を分析して、Sb摂取によって引き起こされる変化を判定する予定だ。 参加者は研究の1、4、5、9、10ヶ月目に追跡調査されます。 追跡調査のたびに、さまざまな分析のために便、血液、尿のサンプルが収集されます。

参加者の疫学パラメータを決定するために、社会人口学的調査が適用されます。 各児童の行動パラメータは心理評価によって評価されます。 適用されるテストは次のとおりです。自閉症診断観察スケジュール第 2 版 (ADOS-2)。自閉症診断面接改訂版 (ADI-R);ウェクスラー児童知能指数 (WISC);適応行動評価システム (ABAS);ウェクスラー幼稚園および初等知能尺度 (WPPSI)。 Battelle 発達目録 (BATELLE)。 栄養状態を評価するために、人体測定値 (体重、身長、BMI) が測定され、パーセンタイルと Z スコアが計算されます。 さらに、24 時間のリコールアンケートが適用されます。 胃腸症状を評価するために、Roma IV 検査が適用されます。 免疫学的状態を判断するために、研究者は血液中のインターロイキンと成長因子を測定します。

腸内細菌叢の分析に関しては、研究者らは便サンプルからの DNA 抽出から始める予定だ。 イルミナのシーケンサーから得られたすべての生配列は、分類学的組成、アルファおよびベータの多様性、機能的注釈、および 2 つのグループ間の差異のある微生物の相対存在量を決定するために分析されます。 機能アノテーションは、Human Microbiome Project Unified Metabolic Analysis Network (HumanN) ソフトウェアを使用して実行されます。 分類学的割り当ては、メタゲノム系統解析 (Metaphlan) ソフトウェアを使用して行われます。 多様性指標は、Vegan Diversity R パッケージを使用して計算されます。 アルファダイバーシティ分析を比較するために、Chao 1、Shannon、Simpson の指数が計算されます。 ベータ多様性の比較では、R パッケージの生態学的データ分析 (ade4) 関数を使用して、Bray-Curtis、Jaccard、非加重 Unifrac および加重 Unifrac 距離メトリックを使用した主成分分析を生成します。 線形判別分析をサンプルサイズ効果測定試験 (LEfSe) と組み合わせて使用​​して、2 つのグループ間の差分微生物相対存在量分析を実行します。

研究者らは、血液、糞便サンプル、尿のメタボローム分析を実施します。 メタボロームの割り当ては、ヒト メタボローム データベースと生物学的磁気共鳴メタボローム データベースを使用した、プロトン核磁気共鳴 (H-NMR) の信号に基づく 2D 実験によって行われます。