Efeitos do consumo de probióticos em crianças com transtorno do espectro do autismo (TEA)

O transtorno do espectro do autismo (TEA) é um grupo de anormalidades do neurodesenvolvimento que começam na primeira infância, frequentemente caracterizados por problemas de comunicação e comportamento social. Os metabólitos produzidos pelo microbioma intestinal podem afetar as funções do trato gastrointestinal (Gl) e do sistema nervoso central (SNC), apoiando a presença do eixo intestino-cérebro. Estudos anteriores demonstraram alterações no microbioma intestinal em crianças com TEA em comparação com controles neurotípicos. É possível que modificações dietéticas, incluindo o uso de probióticos, em crianças com TEA possam modificar positivamente as funções do Gl e do SNC. Poucos estudos clínicos foram realizados para avaliar os efeitos do consumo de probióticos por crianças com TEA na composição da microbiota, na função intestinal e no comportamento nos países em desenvolvimento. Consequentemente, o objetivo geral do estudo é determinar os efeitos da suplementação de probióticos na composição da microbiota intestinal, estado nutricional e estado imunológico em crianças com TEA.

Um estudo cruzado randomizado será realizado incluindo crianças com diagnóstico de TEA, residentes no Distrito Metropolitano de Quito. Após verificação dos critérios de inclusão e exclusão, serão selecionados 66 participantes. Inicialmente, as crianças com diagnóstico de TEA serão organizadas aleatoriamente em 2 grupos. O Grupo A (n=33) receberá suplementos de Sb na dose de 250 mg 3 vezes ao dia por um período de 4 meses. Enquanto o Grupo B (n=33) não receberá suplementação por 4 meses. Isto será seguido por um período de “washout” de 30 dias, durante o qual nenhum dos grupos consome probióticos. Após esse período, os grupos infantis mudarão de tratamento por mais quatro meses. Os investigadores analisarão o comportamento, o microbioma intestinal, o metaboloma, o estado nutricional e os sintomas gastrointestinais para determinar as mudanças causadas pelo consumo de Sb. Os participantes serão acompanhados nos meses 1, 4, 5, 9 10 do estudo. A cada acompanhamento serão coletadas amostras de fezes, sangue e urina para as diferentes análises.

Será aplicado um inquérito sociodemográfico para determinar os parâmetros epidemiológicos dos participantes. Os parâmetros comportamentais de cada criança serão avaliados por meio de avaliações psicológicas. Os testes que serão aplicados são: Cronograma de Observação Diagnóstica do Autismo, Segunda Edição (ADOS-2); Entrevista de Diagnóstico de Autismo Revisada (ADI-R); Escala Wechsler de Inteligência para Crianças (WISC); Sistema de Avaliação de Comportamento Adaptativo (ABAS); Escala Wechsler de Inteligência Pré-escolar e Primária (WPPSI); Inventário de Desenvolvimento Battelle (BATELLE). Para avaliação do estado nutricional serão realizadas medidas antropométricas (peso, altura, IMC) e calculados percentis e escores Z. Além disso, será aplicado um questionário recordatório de 24 horas. O teste Roma IV será aplicado para avaliar sintomas gastrointestinais. Para determinar o estado imunológico, os investigadores medirão interleucinas e fatores de crescimento no sangue.

Em relação à análise da microbiota intestinal, os investigadores começarão com a extração de DNA de amostras de fezes. Todas as sequências brutas obtidas do sequenciador Illumina serão analisadas para determinar: composição taxonômica, diversidade alfa e beta, anotação funcional e abundância relativa microbiana diferencial entre os dois grupos. A anotação funcional será realizada usando o software Human Microbiome Project Unified Metabolic Analysis Network (HumanN). A atribuição taxonômica será feita utilizando o software Metagenômica Filogenética (Metaphlan). As métricas de diversidade serão calculadas usando o pacote Vegan Diversity R. Para comparar a análise de diversidade alfa, serão calculados os índices de Chao 1, Shannon e Simpson. Para comparação de diversidade Beta, a função Análise de Dados Ecológicos (ade4) no pacote R será usada para gerar análise de componentes principais usando métricas de distância Bray-Curtis, Jaccard, Unifrac não ponderada e Unifrac ponderada. A análise discriminante linear será usada em conjunto com o teste de medição do efeito do tamanho da amostra (LEfSe) para realizar análise diferencial de abundância relativa microbiana entre os dois grupos.

Os investigadores realizarão análises de metaboloma em sangue, amostras fecais e urina. A atribuição do metaboloma será por meio de experimentos 2D baseados no sinal de ressonância magnética nuclear de prótons (H-NMR), usando o banco de dados do metaboloma humano e o banco de dados do metaboloma da ressonância magnética biológica.