食用益生菌对自闭症谱系障碍 (ASD) 儿童的影响

自闭症谱系障碍 (ASD) 是一组始于儿童早期的神经发育异常，通常以沟通和社会行为问题为特征。 肠道微生物组产生的代谢物可能会影响胃肠道（GI）和支持肠脑轴存在的中枢神经系统（CNS）功能。 先前的研究表明，与神经正常对照组相比，自闭症谱系障碍儿童的肠道微生物组发生了变化。 自闭症谱系障碍儿童的饮食调整，包括使用益生菌，可能会积极改变胃肠道和中枢神经系统功能。 在发展中国家，很少有临床研究来评估自闭症儿童摄入益生菌对其微生物群组成、肠道功能和行为的影响。 因此，该研究的总体目标是确定补充益生菌对自闭症儿童肠道微生物群组成、营养状况和免疫状态的影响。

将进行一项随机交叉研究，研究对象包括居住在基多都市区的被诊断患有自闭症谱系障碍的儿童。 核实纳入和排除标准后，将选出 66 名参与者。 最初，诊断患有 ASD 的儿童将被随机分为 2 组。 A 组（n=33）将接受锑补充剂，剂量为 250 毫克，每天 3 次，为期 4 个月。 而B组（n=33）将在4个月内不接受补充。 接下来是 30 天的“清洗”期，在此期间两组均不食用益生菌。 此后，儿童小组将改变治疗方案，为期四个月。 研究人员将分析行为、肠道微生物组、代谢组、营养状况和胃肠道症状，以确定锑消耗引起的变化。 参与者将在研究的第 1、4、5、9、10 个月进行随访。 每次随访时，都会收集粪便、血液和尿液样本进行不同的分析。

将进行社会人口统计调查来确定参与者的流行病学参数。 每个孩子的行为参数将通过心理评估的方式进行评估。 将应用的测试有： 自闭症诊断观察表，第二版 (ADOS-2)；自闭症诊断访谈修订版 (ADI-R)；韦克斯勒儿童智力量表（WISC）；适应性行为评估系统（ABAS）；韦克斯勒学前和小学智力量表（WPPSI）；巴特尔发育量表（BATELLE）。 为了评估营养状况，将进行人体测量（体重、身高、BMI）并计算百分位数和 Z 分数。 此外，还将采用 24 小时回忆调查问卷。 罗马IV测试将用于评估胃肠道症状。 为了确定免疫状态，研究人员将测量血液中的白细胞介素和生长因子。

关于肠道微生物群的分析，研究人员将从粪便样本中提取 DNA 开始。 从 Illumina 测序仪获得的所有原始序列将被分析以确定：分类组成、α 和 β 多样性、功能注释以及两组之间的差异微生物相对丰度。 将使用人类微生物组项目统一代谢分析网络 (HumanN) 软件进行功能注释。 分类分配将使用宏基因组系统发育分析（Metaphlan）软件完成。 多样性指标将使用 Vegan 多样性 R 包进行计算。 为了比较 α 多样性分析，将计算 Chao 1、Shannon 和 Simpson 指数。 对于 Beta 多样性比较，R 包中的生态数据分析 (ade4) 函数将用于使用 Bray-Curtis、Jaccard、未加权 Unifrac 和加权 Unifrac 距离度量生成主成分分析。 线性判别分析将与样本量效应测量检验（LEfSe）结合使用，对两组之间的微生物相对丰度进行差异分析。

研究人员将对血液、粪便样本和尿液进行代谢组分析。 代谢组分配将使用人类代谢组数据库和生物磁共振代谢组数据库，通过基于质子核磁共振 (H-NMR) 信号的 2D 实验进行。