미생물군 미성숙을 복구하고 관능적 수용성을 확립하는 능력을 위해 리드 미생물군 지향 보완 식품(MDCF) 프로토타입을 최적화하기 위한 '사전 개념 증명(Pre-POC)' 임상 시험 (MDCF)

연구자들은 약 2년에 걸쳐 MAM(WLZ <-2 ~ -3) 및 발육 부진(LAZ <-2 ~ -3)이 있는 12-18개월 된 어린이들 사이에서 3개의 Pre-POC 연구를 수행할 것입니다.

연구 설계: 무작위 통제 중재 시험.

연구 장소: 이 연구는 도시 근교 슬럼 지역인 Dhaka시 Mirpur의 Bauniabadh에서 수행됩니다.

연구 참가자: 연구 참가자는 MAM(WLZ: <-2 ~ -3) 및 발육 부진(LAZ: <-2 ~ -3)이 있는 12-18개월 된 성별의 어린이입니다.

초기 선별 및 등록: 미리 지정된 포함 기준에 따라 FRA(Field Research Assistants)가 Mirpur 섹션 11의 가구 조사를 통해 아동을 선별하고 등록합니다. 등록 기준을 충족하고 부모 또는 법적 보호자로부터 연구 참여에 대한 동의를 받으면 각 어머니/보호자가 있는 어린이가 등록되고 순열 블록을 사용하여 컴퓨터 생성 난수에 따라 네 팔 중 하나에 무작위로 할당됩니다. 연구 1에 대해 4와 12의 다양한 길이. 유사하게, 아동 및 어머니/간병인은 연구 2 및 3에 대해 각각 3 및 9 블록 길이의 순열 블록을 사용하여 컴퓨터 생성 난수에 따라 3개의 팔 중 하나에 등록되고 무작위로 할당될 것입니다. 할당된 유형의 MDCF 코드는 등록된 아동에게 할당될 때까지 닫힌 불투명 봉투에 보관됩니다.

수유 시간: 어린이와 어머니/간병인은 첫째 날 오전 9시에서 11시 사이와 오후 3시에서 5시 사이에 Mirpur의 지역 사회에 설립된 영양 센터에 오도록 요청받을 것입니다. 어머니는 관찰된 수유 당일 관찰된 식사 시간의 이전 2시간 동안 음식과 모유를 주지/허용하지 않도록 요청받을 것입니다. 같은 날 영양 센터에서 아동은 무작위 할당으로 결정된 MDCF 25g(바람직하게는 오전 9-11시와 오후 3-5시 사이 두 끼 식사)을 제공받게 됩니다. 수유 시간 동안 어머니는 아래에 설명된 대로 자녀가 더 이상 먹기를 거부할 때까지 미리 계량한 각 식단을 숟가락으로 떠서 자녀에게 먹여야 합니다. 2분의 휴지 후, 다시 거부할 때까지 동일한 식단이 두 번째 제공됩니다. 두 번째 2분 정지 후 다시 거부할 때까지 다이어트가 세 번째로 제공됩니다. 이 세 번째 거부 이후에는 수유 에피소드가 '종료'된 것으로 간주됩니다.7 수유 시간(중간 '휴식 시간' 제외)은 스톱워치로 기록되며 총 수유 시간이 기록됩니다. 아이가 모든 음식을 다 먹은 후에 더 요구하면 처음에 제공된 양을 제공합니다. 이 수유 에피소드는 최대 60분 동안 지속됩니다. 일반 물의 측정된 양도 제공되며 이 60분 식사 시간 동안 섭취한 물의 양을 측정합니다. 수유 에피소드는 훈련된 연구 인력의 직접적인 감독하에 진행됩니다. 어린이가 음식에서 머리를 떼거나, 울거나, 입을 다물거나, 이를 악물거나, 동요하거나, 음식을 뱉거나, 삼키기를 거부하면 추가 섭취를 거부하는 것으로 간주됩니다.8 실제로 섭취되는 MDCF의 양은 제공된 양에서 남은 양을 빼서 계산됩니다. 미리 계량된 냅킨이 제공됩니다. 역류, 구토 또는 흘린 모든 음식은 면봉으로 닦고 무게를 재고 제공된 양에서 뺍니다.

관찰된 식사 동안 음식을 쉽게 먹었고, 소란을 피우거나, 뱉거나, 토하거나, 울지 않았다면 수용도는 '간절히 받아들였다'로 분류됩니다. 아이들은 제공된 음식을 먹었지만 관찰된 식사 중에 소란을 피우거나, 뱉거나, 토하거나, 울면 '받아들였지만 간절하지 않음'으로 분류됩니다. 세 번째 부류는 제공된 음식을 전혀 먹지 않는 아이들이 될 것입니다.9

섭취한 음식의 양(g), 열량(kcal), 수용성 범주를 분석합니다. 등록된 어린이는 가능한 부작용/부작용(예: 음식 알레르기로 인한 발진, 두드러기 또는 임상 상태의 중대한 변화)를 일주일 동안 부작용/부작용이 관찰될 경우 icddr,b의 Dhaka 병원에서 제공하는 표준 관리에 따라 처리됩니다. 각각의 어머니/간병인에 의한 할당된 MDCF의 관능적 특성에 대한 인식 및 평가는 7점 쾌락 척도를 사용하여 평가됩니다. 높은 값인 7은 '매우 좋아요'로, 가장 낮은 값인 1은 '매우 싫어함'으로 순위가 매겨집니다.10

연구 시작 시 인구통계학적 특성(가족의 재산, 주택 수준, 가족 구조 및 부모의 특성 등)에 대한 정보를 찾고 훈련된 FRA가 2g 정밀도의 디지털 저울을 사용하여 아동의 누드 체중을 기록합니다. (Seca, 모델 728, 독일), 길이(infantometer 사용, Seca, 모델 416, 독일), 중간 상완 둘레를 mm 단위로 표시(비신축 삽입 테이프 사용). 인체 측정은 표준 절차에 따라 수행되며 모든 측정은 세 번 수행되고 중간 측정은 기록됩니다. 각 연구의 모든 개입은 Mirpur 건강 클리닉의 어린이에게 시행됩니다. 어머니/일차 보호자는 자녀의 현재 식단 및 모유 수유 관행을 유지하도록 조언을 받습니다.

Pre-POC 연구 1과 2는 각각 기간이 8주이고 각각 ​​4개와 3개의 암이 있으며, 암당 12-15명의 어린이가 등록되어 암당 최소 10명의 어린이가 연구를 완료합니다. 전처리 MAZ를 정의하기 위한 2주간의 준비 기간이 있을 것이며, 추가로 MAZ 점수를 계산하는 데 사용된 동일한 분변 표본에서 광범위한 위장관 병원체의 PCR 기반 측정으로 장병원균 부하를 평가할 것입니다(이는 후속 치료를 위한 선별 도구로 사용되지 않음). 아이들은 세 팔 중 하나에 무작위로 배정됩니다. 성별에 따라 팔의 균형을 맞추고 나이에 따라 무작위화를 계층화하기 위해 노력할 것입니다(예: 2단계; 12-15개월 및 >15-18개월). 치료 단계는 4주 동안 진행되며, 이 기간 동안 각 테스트 제품은 최소 6시간 간격으로 하루에 두 번 테스트 센터에서 투여됩니다. 치료 중단 후 발생하는 미생물군의 변화를 평가하기 위해 2개의 추가 분변 샘플 샘플을 수집하는(7주 및 8주 말에) 개입 후 2주 단계가 있을 것입니다.

Pre-POC 연구 3에는 3개의 아암이 있습니다. 그것은 연구 2에서 확인된 납 MDCF를 테스트하고 4주 개입 기간 동안 현재 RUSF 치료 표준과 비교하여 미생물 미성숙을 복구하는 효능을 벤치마킹할 것입니다. 우리는 이 연구에서 납 MDCF의 하루 1회 대 2회 투여가 효능에 미치는 영향을 조사할 것이며 또한 중재 후 4주 기간(7주, 8주, 9주 및 10주 말에 분변 샘플링 포함)을 포함하여 중재를 중단하고 가정 식단으로 돌아온 후 미생물군 성숙도 변화의 지속성을 평가합니다.

배설물 샘플 수집 매주 배설물 샘플(1-2g)은 치료를 위한 지역 RUTF의 최근 연구에서 사용된 N2 건식 배송업체 샘플 수집 SOP를 사용하여 생산 후 30분 이내에 수집됩니다(집에서 다시 icddr,b로 이동). SAM의 (부록 A 참조). 표본은 미생물 성숙도(각 MDCF 프로토타입으로 치료 중단 전, 도중 및 종료 후 측정)의 신속한 분석과 장 병원균의 PCR 기반 평가를 위해 각 연구가 끝날 때 Gordon Lab으로 보내기 전에 -80ºC에 보관됩니다. 대변 ​​샘플의 부담(MDCF 처리 전후 측정). 차세대 MDCF에 의해 구체적으로 표적이 된 각 박테리아 균주의 상대적 존재비는 16S rRNA 데이터 세트(Gordon Lab에서 수행되고 기본 BMMI 프로젝트 POC 단계 보조금으로 자금 지원)의 분석을 통해 결정됩니다.

제안된 사전 POC 연구

연구 1: MAM에 대한 3개의 프로토타입 MDCF 및 현재 쌀-렌즈콩 RUSF 치료 표준을 테스트하여 4주 2x/일 개입에서 MAZ 수리에 대한 각각의 효과 크기를 설정하고 2주 개입 후 단계에서 내구성을 평가합니다. microbiota의 MDCF 유도 변화:

Arm 1 - 현재 MAM에 사용되는 RUSF, 4주 동안 하루 2회 투여 Arm 2 - 프로토타입 MDCF1, 4주 동안 하루 2회 투여 Arm 3 - 프로토타입 MDCF2, 4주 동안 하루 2회 투여 Arm 4 - 프로토타입 MDCF3, 2회 투여 4주 동안 /일

아암 1 - 쌀-렌틸콩 기반 RUSF(근거: MAM에 대한 참조 표준 관리, 장내 미생물 또는 미생물 미성숙에 미치는 영향에 대한 지식을 기반으로 설계되지 않음).

Arm 2 - 4가지 보완 식품 성분과 분유가 포함된 MDCF 프로토타입(근거: 미성숙 미생물의 복구 및 성장에 대한 긍정적 효과에 대한 전임상 gnotobiotic 모델의 증거를 제시함).

Arm 3 - 분유가 없는 4가지 보완 식품 성분이 포함된 MDCF 프로토타입(근거: 우유 중단이 미생물 및 숙주 바이오마커에 대한 4가지 보완 식품 성분 조합의 영향에 영향을 미치는지 여부 결정).

아암 4 - 분유 없이 2개의 보완 식품 성분(병아리콩 및 콩가루)을 사용한 MDCF 프로토타입(근거: 이 제제의 효능을 그룹 3에 투여되는 4개의 보완 식품 성분을 함유하는 MDCF 제제의 효능과 비교).

대변 ​​샘플 수집:

대변 ​​샘플은 등록 시, 등록 후 1주, 무작위 배정(2주) 및 중재 및 중재 후 단계 동안 매주 각 어린이로부터 수집됩니다.

- 15명의 연구 참여자/팔 및 4개의 팔을 가정하면, 총 540개의 배설물 표본이 연구 1에서 수집될 것이다.

혈액 샘플 수집:

개입 전과 개입이 완료된 직후에 모든 어린이로부터 각각 2mL의 혈액 샘플을 수집합니다.

- 15명의 연구 참여자/팔을 가정하면, 총 120개의 혈액 샘플이 연구 1에서 수집될 것입니다.

연구 2: 연구 1에서 가장 효과적인 MDCF를 선택하고 연구 1에서 사용된 동일한 디자인을 사용하여 2개의 추가 MDCF 프로토타입과 비교합니다.

부문 1 - 4주 동안 2회/일 투여된 연구 2의 '우승자' 부문 2 - 4주 동안 2회/일 투여된 프로토타입 MDCF4 부문 3 - 4주 동안 2회/일 투여된 프로토타입 MDCF5

대변 ​​샘플 수집:

대변 ​​샘플은 등록 시, 등록 후 1주, 무작위 배정(2주) 및 중재 및 중재 후 단계 동안 매주 각 어린이로부터 수집됩니다.

- 15명의 연구 참여자/팔 및 3개의 팔을 가정하면, 연구 2에서 총 405개의 대변 표본이 수집될 것이다.

혈액 샘플 수집:

개입 전과 개입이 완료된 직후에 모든 어린이로부터 각각 2mL의 혈액 샘플을 수집합니다.

- 15명의 연구 참여자/팔, 총 90개의 혈액 샘플이 연구 2에서 수집될 것입니다.

연구 3:

연구 1, 2에서 리드 MDCF를 선택하고 현재 RUSF에 대한 최종 '베이크오프'를 수행하고 개입 후 4주의 기간으로 하루 1x 대 2x 투여의 영향을 조사하여 MDCF 후원의 내구성에 대한 추가 정보를 제공합니다. 미생물군의 변화:

1군 - 4주 동안 MAM 2x/일에 이어 4주 중재 후 단계에 사용된 현재 RUSF 2군 - 연구 2에서 확인된 리드 MDCF, 4주 동안 2x/일 이후 4주 중재 후 단계 3군 - 연구 2에서 확인된 납 MDCF, 4주 동안 1x/일 이후 4주 중재 후 단계

대변 ​​샘플 수집:

대변은 치료 전 2주, 치료 중 4주 및 치료 중단 후 2주를 포함하는 8주 연구 과정 동안 각 연구 참여자로부터 매주 수집됩니다(11개 샘플/아동).

- 15명의 연구 참여자/팔 및 3개의 팔을 가정하면, 총 495개의 배설물 표본이 연구 3에서 수집될 것이다.

8주간의 연구 기간(연구 1 및 2) 및 분변 표본을 워싱턴 대학으로 운송하는 데 8주가 걸린다고 가정하면, DNA 추출, 박테리아 16S rRNA 유전자의 V4 영역의 PCR 증폭, 이러한 앰플리콘의 시퀀싱 및 데이터 분석, 등록 완료에서 데이터 분석 완료까지의 각 학습 주기는 16주로 예상됩니다. 이 주기 시간을 통해 2017년 6월 말까지 후보 MDCF를 평가하고 2018년 4월 말까지 5개를 모두 완료할 수 있을 것으로 예상합니다.

수집된 정보는 무균 동물에 이식할 인간 배설물 샘플을 선택하는 데 사용됩니다. 인간 미생물군 공여자의 식단을 먹게 될 이 동물들은 MDCF 프로토타입, 장내 미생물군 및 숙주 생리/대사를 연결하는 메커니즘을 추가로 특성화하는 데 사용될 것입니다.

타겟 초고성능 액체 크로마토그래피-질량 분석법(UPLC-MS) 및 가스 크로마토그래피-질량 분석법(GC-MS)은 담즙산 및 단쇄 지방산(SCFA)을 포함한 혈장 및/또는 분변 샘플에서 특정 관심 대상 분석물을 프로파일링하는 데 사용됩니다. ); 미토콘드리아 기능의 마커(예: β-하이드록시부티레이트, 아실카르니틴/아실CoAs, TCA 주기 중간체); 배설물 샘플의 아미노산[세균의 트립토판 대사(예: 인돌 아세트산 유도체)].

혈액 샘플 수집:

개입 전과 개입이 완료된 직후에 모든 어린이로부터 각각 2mL의 혈액 샘플을 수집합니다.15 연구 참여자/팔 및 3개의 팔, 총 90개의 혈액 샘플이 연구 3에서 수집될 것입니다.

같은 지역사회에서 건강하게 성장하는 어린이의 장내미생물 라이브러리를 구축하기 위해 12-18세의 어린이 30명으로부터 분변 샘플(1-2gm)과 혈액 샘플(2mL) 1개를 각각 수집합니다. WLZ 및 LAZ가 있는 성별 중 한 달: >-1. 이것은 연구 참여자의 동의를 얻은 후에만 수행됩니다.

우리의 초기 연구실 작업과 워싱턴 대학 게놈 과학 센터에서 영지생물학 동물에 대해 수행한 이전 연구를 통해 우리는 분유를 포함하거나 포함하지 않은 식품 성분(병아리콩, 콩가루, 땅콩 및 녹색 바나나)의 조합이 비용 및 지속 가능성뿐만 아니라 성장 차별 미생물의 증식 촉진에 대한 식단의 영향과 관련하여 연구할 가치가 있습니다.

연구 참가자는 음식 공유 문제를 피하기 위해 영양 치료를 위해 매일 지정된 급식 센터에 오도록 요청받을 것입니다. 클리닉 직원에게 연락할 수 있는 전화번호가 제공되며 직원 중 한 명이 필요한 경우 사전 협의를 통해 직접 관찰 영양 치료를 위해 가족의 가정을 방문할 수 있습니다.

5일 음식 빈도 설문지는 등록 시, 무작위 배정 전 및 전체 연구 기간 동안 매주 완료됩니다.

다양한 MDCF 준비:

Pre-POC 임상 연구를 위한 보완 식품 준비:

위에서 설명한 전임상 연구에서 확인된 보완 식품 성분의 호환 가능한 조합을 기반으로 조사관은 icddr,b 식품 가공 연구소에서 임상 연구에 충분한 양의 5개의 MDCF 프로토타입을 디자인하고 생산합니다(연구 1의 경우 3개의 MDCF 프로토타입, 연구를 위한 2개의 MDCF 프로토타입). 연구 2 및 연구 3에 대한 연구 2로부터 적격 MDCF). 이러한 제형은 방글라데시 및 기타 국가에서 MAM에 사용되는 바로 사용할 수 있는 보조 식품(RUSF)과 에너지 밀도 및 미량 영양소 함량이 일치하고 12-18개월 된 보완/보충 식품에 대한 기타 모든 현지 요구 사항을 충족합니다. MAM 및 발육 부진 아동. icddr,b 식품 가공 연구소는 또한 연구 1과 3에서 사용하기 위해 이러한 어린이 치료에 사용되는 현재 쌀-렌즈콩 RUSF 관리 표준을 생산할 것입니다.

제품 개발

1. 식품 성분의 확인: 전임상 식이 진동 연구에서 확인된 것을 포함하여 현지에서 구할 수 있는 식품 성분(예: 병아리 콩, 콩가루, 땅콩, 생 바나나, 콩기름, 설탕 및 분유 유무)는 프로토 타입 MDCF를 제조하는 데 사용됩니다.

   MDCF는 방글라데시의 보충 식품에 대한 미량 영양소 요구 사항을 충족하기 위해 비타민과 미네랄의 프리믹스로 강화됩니다(아래 참조).

2. 레시피 개발에 대한 실험: MDCF 구성 요소의 이론적 공식화는 가장 영양가 있는 레시피를 생성할 수 있는 성분 조합을 식별하기 위해 선형 프로그래밍을 기반으로 해야 합니다. MDCF의 에너지 밀도는 ~5kcal/g을 목표로 하고 칼로리 분포는 지방에서 45-50%, 단백질에서 8-12%를 목표로 합니다. 전문가의 의견과 연구팀 내 합의에 따라 미량영양소 함량은 12-18개월 된 Non SAM 어린이의 요구량의 70%를 충족하도록 설정되어야 합니다. 레시피 개발 및 샘플 준비를 위한 실험은 표준화된 생산 절차에 따라 icddr,b 식품 가공 연구소에서 수행되어 각 생산 배치에서 MDCF의 품질을 제어하고 가공 중에 예기치 않은 오염 및 영양소 손실이 발생하지 않도록 합니다. 모든 재료를 세척하고 분류합니다. 가능한 레시피는 (각 재료에 맞게 요리/찜/구이) 후 모든 재료를 전기 믹서기에 혼합하여 소량으로 생산해야 합니다. 필요한 경우 건재료와 콩기름의 양을 조절하여 조리법의 일관성을 조절한다. 또한 다량의 미량영양소를 첨가하여 불쾌한 맛이 있는 경우에는 미네랄과 비타민의 조합을 조정하여야 한다. 일관성을 개선하고 오일 분리를 방지하기 위해 소량(1%)의 대두 레시틴을 레시피에 추가해야 합니다.
3. 레시피의 관능적 특성 평가: 새로운 레시피는 7점 쾌락 척도를 사용하여 외관, 풍미, 식단의 일관성 및 전반적인 기호도에 대해 평가됩니다. 높은 값인 7은 '매우 좋아요'로 순위가 매겨지고 가장 낮은 값인 1은 '가장 싫어함'으로 순위가 매겨집니다.
4. 식품 안전 및 유통 기한 문제에 대한 연구: 조사관은 미생물학적 품질을 포함한 제품의 안정성을 평가하여 최초 유통기한 설정에 필요한 주요 정보를 얻고 비타민 및 미네랄 함량의 안정성과 산화 가능성을 평가합니다. 표준 미생물 검사(총 생존 수, 효모, 곰팡이, 대장균군, 대장균, 바실러스 세레우스, 포도상구균, 리스테리아 모노사이토제네스, 크로노박터 사카자키)는 icddr,b 식품 안전 실험실에서 수행됩니다.
5. 사전 POC 임상 시험을 위한 5개의 프로토타입 MDCF 완성: 위에서 언급한 모든 기준에 따라 우리 연구팀은 수용성 시험을 위해 5개의 MDCF를 선택합니다. 조사관은 후보 MDCF 성분의 비용/kg도 추정합니다.

현장 직원 교육 대변 샘플 수집과 관련된 다양한 절차에 대해 모든 현장 팀원에게 교육이 제공됩니다. 교육은 연구 조사관뿐만 아니라 강사의 핵심 그룹에 의해 촉진될 것입니다.

인체 측정:

아동의 나이는 서류(출생 증명서 또는 예방 접종 카드, 가능한 경우) 또는 아동의 생년월일에 대한 보호자의 보고서를 통해 확인됩니다. 길이는 0.1cm에 민감한 유아계(SECA, 모델 번호. 4161721009, 함부르크, 독일). 체중은 2g에 민감한 저울(SECA 7281321009, Hamburg, Germany)로 측정한다. 연령 대비 길이(LAZ), 길이 대비 무게(WLZ) 및 연령 대비 무게(WAZ) Z-점수는 MGRS(Multicentre Growth Reference Study) WHO 성장 표준 11에 따라 계산됩니다. 양 발의 윗부분을 3초간 눌러 부종을 검사합니다. 팔 중간 둘레(MUAC)는 TALC MUAC 테이프(UK)를 사용하여 측정합니다. 계량기의 표준화 : 아기용 체중계, 무게와 길이를 알 수 있는 길이/길이판을 정기적으로 표준화한다.

혈장 및 대변 샘플 분석

이 탐색적 사전 POC 연구에서 수집된 혈장 샘플은 세인트루이스에 있는 워싱턴 대학교의 게놈 과학 및 시스템 생물학 센터에 위치한 Jeffrey Gordon의 연구실로 보내질 것입니다. 고급 질량 분광법 및 면역분석 기반 방법을 사용하여 장내 미생물 미성숙의 역할과 건강한 미생물의 바이오마커 및 중재자에 대한 납 미생물무리 지향 보완 식품(MDCF) 프로토타입을 사용하여 이러한 미성숙의 급성 복구를 시도하는 효과에 대한 새로운 지식을 얻습니다. 성장.

미생물군 미성숙 및 식이 개입에 대한 숙주 반응에 대한 MDCF의 효과에 대한 이 초기 테스트는 더 큰 인구에서 계획된 개념 증명 연구를 위한 검정력 계산을 가능하게 하는 핵심 데이터 세트를 제공할 것입니다. 현재 탐색적 사전 POC에서 12-15명의 연구 참가자로 구성된 각 그룹의 각 어린이는 자신의 통제 역할을 합니다. 4개의 치료군(즉, 참조 RUSF 표준 및 3개의 다른 MDCF 제형 중 하나를 소비하는 그룹) 내에서 그리고 전체에 걸쳐 추가 비교가 이루어질 것입니다.

대변은 치료 전 2주, 치료 중 4주 및 치료 중단 후 2주를 포함하는 8주 연구 과정 동안 각 연구 참여자로부터 매주 수집됩니다. 또한 4주 MDCF 개입을 시작하기 직전과 4주 장기 개입이 완료되는 시점에 2mL의 혈액 샘플을 채취합니다.

타겟 초고성능 액체 크로마토그래피-질량 분석법(UPLC-MS) 및 가스 크로마토그래피-질량 분석법(GC-MS)은 담즙산 및 단쇄 지방산(SCFA)을 포함한 혈장 및/또는 분변 샘플에서 특정 관심 대상 분석물을 프로파일링하는 데 사용됩니다. ); 미토콘드리아 기능의 마커(예: β-하이드록시부티레이트, 아실카르니틴/아실CoAs, TCA 주기 중간체); 혈청 및 분변 샘플의 아미노산[세균의 트립토판 대사(예: 인돌 아세트산 유도체)].

또한 선형 성장(예: 성장 호르몬 및 IGF-1), 에너지 이용(인슐린, 렙틴) 및 뼈 생물학[IL-6, 오스테오프로테게린, I형 콜라겐의 C-말단 펩티드(CTX , 파골 세포 활성/골 흡수 마커), Type 1 프로콜라겐(P1NP, 조골 세포 활성/골 형성 마커)의 아미노-말단 프로펩티드] 및 전신 염증(CRP, AGP)은 확립된 ELISA/ Luminex 분석.

수집된 정보는 무균 동물에 이식할 인간 배설물 샘플을 선택하는 데 사용됩니다. 인간 미생물군 공여자의 식단을 먹게 될 이 동물들은 MDCF 프로토타입, 장내 미생물군 및 숙주 생리/대사를 연결하는 메커니즘을 추가로 특성화하는 데 사용될 것입니다. 또한, 이러한 혈장 및 분변 바이오마커는 전임상 모델의 특징이 어린이의 반응과 가장 잘 연관되어 있는지 결정하는 데 사용될 것입니다. 이 지식은 성장 결과에 대한 탁월한 효능을 가진 차세대 MDCF 프로토타입의 설계를 알리는 데 도움이 될 것입니다.

샘플 크기 계산:

이 연구의 주요 결과는 개입 4주 후 Microbiota-for-Age Z(ΔMAZ) 점수의 변화가 될 것입니다. 0.36 (SEM) 나이가 맞는 건강한 어린이의 경우 평균 MAZ는 -0.52+0.22, 평균 1.08+0.41의 차이가 있습니다. paired t-test를 위해 R의 power.t.test 기능 사용(즉, 개입 전후 아동의 표본을 짝짓기), SD를 1로 가정하고 단측 가설을 가정하면 각 팔에 15명의 아동이 80% 검정력 및 유의 임계값 0.05. 따라서 연구자들은 이전 연구에서 건강한 어린이의 미생물군과 MAM이 있는 어린이의 미생물군을 구별하는 크기의 MAZ 변화를 자신 ​​있게 감지할 수 있을 만큼 충분히 강력할 것으로 예상합니다.

데이터 분석 :

데이터 분석은 icddr,b5에서 SAM을 가진 어린이를 치료한 이전 RUTF 개입 연구에서 미생물 성숙도를 계산하는 데 사용된 것과 동일한 접근 방식과 이러한 도구의 적용으로 수행됩니다.

각 연구의 주요 결과 측정은 연구의 각 부문에 대한 기준선으로부터 MAZ 점수의 평균 치료 유발 변화입니다. 치료 부문의 수단 사이의 차이(95% CI)는 일원 ANOVA에 이어 Tukey의 HSD 또는 유사한 사후 테스트(적절한 경우)를 사용하여 평가됩니다. 이러한 사전 POC 연구에서 가장 큰 평균 효과 크기를 갖는 MDCF 프로토타입과 수용 가능한 관능 특성이 SAM 후 MAM이 있는 어린이의 임상 결과를 조사하기 위한 후속 POC 임상 시험을 위해 선택될 것입니다.