Essais cliniques de « pre-preuve de concept (pré-POC) » pour optimiser les prototypes d'aliments complémentaires dirigés par le microbiote (MDCF) pour leur capacité à réparer l'immaturité du microbiote et à établir leur acceptabilité organoleptique (MDCF)

Les enquêteurs mèneront 3 études pré-POC auprès d'enfants de 12 à 18 mois atteints de MAM (WLZ <-2 à -3) et de retard de croissance (LAZ <-2 à -3) sur une période d'environ deux ans.

Conception de l'étude : Essai d'intervention contrôlé randomisé.

Site d'étude : Cette étude sera menée à Bauniabadh, Mirpur dans la ville de Dhaka, qui est un bidonville périurbain.

Participants à l'étude : Les participants à l'étude seront des enfants de 12 à 18 mois des deux sexes atteints de MAM (WLZ : <-2 à -3) et de retard de croissance (LAZ : <-2 à -3).

Dépistage initial et inscription : les enfants seront sélectionnés et inscrits par enquête auprès des ménages dans la section 11 de Mirpur par des assistants de recherche sur le terrain (FRA) selon des critères d'inclusion prédéfinis. En remplissant les critères d'inscription et après avoir reçu le consentement à la participation à l'étude des parents ou des tuteurs légaux, les enfants avec la mère/tutrice respective seront inscrits et assignés au hasard à l'un des quatre bras selon des nombres aléatoires générés par ordinateur en utilisant des blocs permutés de longueurs variées de quatre et douze pour l'étude 1. De même, les enfants et la mère/soignante seront inscrits et assignés au hasard à l'un des trois bras selon des nombres aléatoires générés par ordinateur en utilisant des blocs permutés de longueurs de bloc de trois et neuf pour les études 2 et 3 respectivement. Le code du type attribué de MDCF sera conservé dans des enveloppes opaques fermées jusqu'à ce qu'il soit attribué à un enfant inscrit.

Séances d'alimentation : Les enfants et les mères/gardiennes d'enfants seront priés de se présenter au centre de nutrition établi dans la communauté à Mirpur de préférence entre 9h et 11h et entre 15h et 17h le jour 1. Il sera demandé aux mères de ne donner/permettre aucun aliment ni lait maternel au cours des 2 heures précédentes de l'heure du repas observé le jour de l'alimentation observée. Le même jour au centre de nutrition, l'enfant se verra offrir 25 grammes (en deux repas de préférence entre 9h-11h et 15h-17h) de MDCF selon une répartition aléatoire. Pendant le temps d'alimentation, les mères seront invitées à donner à leurs enfants les régimes prépesés respectifs à la cuillère jusqu'à ce qu'ils refusent de continuer à manger, comme décrit ci-dessous. Après une pause de deux minutes, le même régime lui sera proposé une deuxième fois jusqu'à ce qu'il refuse à nouveau. Après une deuxième pause de deux minutes, le régime sera proposé une troisième fois jusqu'à ce qu'il soit à nouveau refusé. Après ce troisième refus, l'épisode d'alimentation sera considéré comme « terminé ».7 La durée de l'alimentation (à l'exclusion des « périodes de repos » intermédiaires) sera enregistrée par un chronomètre, et la durée totale de l'alimentation sera notée. Si l'enfant demande plus après avoir fini toute la nourriture, on lui offrira la quantité offerte au début. Cet épisode d'alimentation durera au maximum 60 minutes. Des volumes mesurés d'eau plate seront également donnés et la quantité d'eau prise pendant cette période de repas de 60 minutes sera mesurée. L'épisode d'alimentation aura lieu sous la supervision directe du personnel d'étude qualifié. Les enfants seront considérés comme refusant de continuer à manger s'ils éloignent leur tête de la nourriture, pleurent, serrent la bouche ou serrent les dents, ou deviennent agités, recrachent la nourriture ou refusent d'avaler.8 La quantité de MDCF réellement ingérée sera calculée en soustrayant le reste de la quantité offerte. Des serviettes pré-pesées seront fournies; tout aliment régurgité, vomi ou renversé sera prélevé, pesé et soustrait de la quantité offerte.

L'acceptabilité sera classée comme « acceptée avec empressement » s'ils ont mangé de la nourriture facilement, n'ont pas fait d'agitation, craché, vomi ou pleuré pendant le repas observé. Les enfants seront classés comme « acceptés mais pas avec empressement » s'ils ont mangé la nourriture offerte, mais qu'ils ont fait des histoires, recraché, vomi ou pleuré pendant le repas observé. La troisième catégorie sera celle des enfants qui ne consommeront pas du tout la nourriture proposée.9

La quantité de nourriture consommée (g), l'énergie (kcal) et la catégorie d'acceptabilité seront analysées. Les enfants inscrits seront surveillés par des visites à domicile quotidiennes par des assistants de recherche sur le terrain formés pour tout effet secondaire / événement indésirable (par ex. éruption cutanée, urticaire due à une allergie alimentaire ou tout changement significatif de l'état clinique) pendant une semaine. Si des effets secondaires / événements indésirables sont observés, ils seront traités conformément à la gestion standard fournie à l'hôpital de Dhaka de l'icddr,b. La perception et l'évaluation des caractéristiques organoleptiques des MDCF attribués par la mère / la personne qui s'occupe de l'enfant seront également évaluées à l'aide de l'échelle hédonique à 7 points. La valeur la plus élevée, c'est-à-dire 7, sera classée comme « j'aime extrêmement » et la valeur la plus basse 1 sera classée comme « je n'aime pas énormément ».10

Au début de l'étude, des informations seront recherchées sur les caractéristiques démographiques (richesse des familles, niveau de logement, structure familiale et caractéristiques parentales, etc.), et des ARF formés enregistreront le poids nu des enfants à l'aide d'une balance numérique avec une précision de 2 g. (Seca, modèle 728, Allemagne), la longueur (à l'aide de l'infantomètre, Seca, modèle 416, Allemagne) et la circonférence du bras au millimètre près (à l'aide d'un ruban d'insertion non extensible). L'anthropométrie sera effectuée selon les procédures standard et toutes les mesures seront prises trois fois et celle du milieu sera enregistrée. Toutes les interventions de chaque étude seront administrées aux enfants à la clinique de santé de Mirpur. Il sera conseillé aux mères/gardiens principaux de maintenir les pratiques alimentaires et d'allaitement actuelles de leur enfant.

Les études pré-POC 1 et 2 dureront chacune 8 semaines et comprendront respectivement 4 et 3 bras, avec 12 à 15 enfants inscrits par bras avec un minimum de 10 enfants par bras terminant l'étude. Il y aura une période de rodage de 2 semaines pour définir la MAZ avant le traitement, et en outre, la charge d'entéropathogènes sera évaluée par la mesure basée sur la PCR d'un large éventail d'agents pathogènes gastro-intestinaux dans les mêmes échantillons fécaux utilisés pour calculer les scores MAZ (ceux-ci seront pas être utilisés comme outils de dépistage pour un traitement ultérieur). Les enfants seront assignés au hasard à l'un des trois bras. Des efforts seront faits pour équilibrer les bras en fonction du sexe et stratifier la randomisation sur l'âge (par exemple, 2 niveaux ; 12-15 mois et > 15-18 mois). La phase de traitement durera 4 semaines, pendant lesquelles chaque produit testé sera administré au centre de test deux fois par jour, espacées d'au moins 6 heures. Il y aura une phase post-intervention de 2 semaines au cours de laquelle 2 échantillons fécaux supplémentaires seront prélevés (à la fin des semaines 7 et 8) pour évaluer les changements du microbiote qui se produisent après l'arrêt du traitement.

L'étude pré-POC 3 aura 3 bras. Il testera le MDCF principal identifié dans l'étude 2 et comparera son efficacité à réparer l'immaturité du microbiote par rapport à la norme de soins RUSF actuelle sur une période d'intervention de 4 semaines. Nous examinerons l'impact du dosage 1x vs 2x par jour du plomb MDCF sur l'efficacité dans cette étude et inclurons également une période post-intervention de 4 semaines (avec prélèvement fécal à la fin des semaines 7, 8, 9 et 10) pour évaluer la durabilité des changements de maturité du microbiote après l'arrêt de l'intervention et le retour à l'alimentation à domicile.

Collecte d'échantillons fécaux Des échantillons fécaux hebdomadaires (1-2g) seront collectés dans les 30 minutes suivant la production (à domicile et ramenés à l'icddr,b) à l'aide de la POS de collecte d'échantillons d'expéditeur sec N2 utilisée dans l'étude récente des RUTF locaux pour le traitement du SAM (voir l'annexe A). Les échantillons seront stockés à -80◦C avant d'être envoyés au Gordon Lab à la fin de chaque étude pour une analyse rapide de la maturité du microbiote (mesurée avant, pendant et après l'arrêt du traitement avec chaque prototype MDCF) et une évaluation par PCR de l'entéropathogène charge dans les échantillons fécaux (mesurée avant et après le traitement MDCF). L'abondance relative de chacune des souches bactériennes spécifiquement ciblées par le MDCF de nouvelle génération sera déterminée par l'analyse des ensembles de données d'ARNr 16S (réalisée au Gordon Lab et financée par la subvention primaire de la phase POC du projet BMMI)

Études pré-POC proposées

Étude 1 : Testez 3 prototypes de MDCF et la norme actuelle de soins RUSF riz-lentille pour MAM afin d'établir l'ampleur de l'effet de chacun sur la réparation MAZ dans une intervention de 4 semaines 2x /jour, avec une phase post-intervention de 2 semaines pour évaluer la durabilité de Changements induits par le MDCF dans le microbiote :

Bras 1 - RUSF actuel utilisé pour la MAM, administré 2x/jour pendant 4 semaines Bras 2 - Prototype MDCF1, administré 2x/jour pendant 4 semaines Bras 3 - Prototype MDCF2, administré 2x/jour pendant 4 semaines Bras 4 - Prototype MDCF3, administré 2x /jour pendant 4 semaines

Bras 1 - RUSF à base de riz-lentilles (justification : norme de référence de soins pour la MAM ; non conçu sur la base de la connaissance de ses effets sur le microbiote intestinal ou l'immaturité du microbiote).

Bras 2 - Prototype MDCF avec quatre ingrédients alimentaires complémentaires plus du lait en poudre (justification : avance avec des preuves issues de modèles gnotobiotiques précliniques de réparation de l'immaturité du microbiote et d'effets positifs sur la croissance).

Bras 3 - Prototype MDCF avec quatre ingrédients alimentaires complémentaires sans lait en poudre (justification : déterminer si le retrait du lait impacte les effets des quatre combinaisons d'ingrédients alimentaires complémentaires sur le microbiote et les biomarqueurs de l'hôte).

Bras 4 - Prototype MDCF avec deux ingrédients alimentaires complémentaires (pois chiche et farine de soja) sans lait en poudre (justification : comparer l'efficacité de cette formulation à celle de la formulation MDCF contenant quatre ingrédients alimentaires complémentaires qui est administrée au groupe 3).

Prélèvement d'échantillons fécaux :

Des échantillons fécaux seront prélevés sur chaque enfant lors de l'inscription, 1 semaine après l'inscription, lors de la randomisation (2 semaines) et chaque semaine pendant les phases d'intervention et de post-intervention.

-En supposant 15 participants à l'étude/bras et 4 bras, un total de 540 échantillons fécaux seront collectés dans l'étude 1.

Prélèvement d'échantillon de sang :

2 ml d'échantillons de sang chacun seront prélevés sur chaque enfant avant l'intervention et juste après la fin de l'intervention.

-En supposant 15 participants à l'étude/bras, un total de 120 échantillons de sang seront prélevés dans l'étude 1.

Étude 2 : Sélectionnez le MDCF le plus efficace de l'étude 1 et comparez avec 2 prototypes supplémentaires de MDCF en utilisant le même design que celui utilisé dans l'étude 1 :

Bras 1 - 'Gagnant' de l'étude 2 administré 2x/jour pendant 4 semaines Bras 2 - Prototype MDCF4 administré 2x/jour pendant 4 semaines Bras 3 - Prototype MDCF5 administré 2x/jour pendant 4 semaines

Prélèvement d'échantillons fécaux :

Des échantillons fécaux seront prélevés sur chaque enfant lors de l'inscription, 1 semaine après l'inscription, lors de la randomisation (2 semaines) et chaque semaine pendant les phases d'intervention et de post-intervention.

-En supposant 15 participants à l'étude / bras et 3 bras, un total de 405 échantillons fécaux seront collectés dans l'étude 2.

Prélèvement d'échantillon de sang :

2 ml d'échantillons de sang chacun seront prélevés sur chaque enfant avant l'intervention et juste après la fin de l'intervention.

- 15 participants à l'étude/bras, un total de 90 échantillons de sang seront prélevés dans l'étude 2.

Étude 3 :

Sélectionnez le MDCF principal dans les études 1, 2 et effectuez le « bake-off » final par rapport au RUSF actuel et examinez également l'impact de l'administration 1x vs 2x par jour avec une période post-intervention de 4 semaines pour fournir des informations supplémentaires sur la durabilité du MDCF parrainé changements dans le microbiote :

Bras 1 - RUSF actuel utilisé pour la MAM 2x/jour pendant 4 semaines suivi d'une phase post-interventionnelle de 4 semaines Bras 2 - Principal MDCF identifié dans l'étude 2, 2x/jour pendant 4 semaines suivi d'une phase post-interventionnelle de 4 semaines Bras 3 - Plomb MDCF identifié dans l'étude 2, 1x/jour pendant 4 semaines suivi d'une phase post-interventionnelle de 4 semaines

Prélèvement d'échantillons fécaux :

Les matières fécales seraient collectées chaque semaine sur chaque participant à l'étude au cours de l'étude de 8 semaines, y compris les 2 semaines précédant le traitement, les quatre semaines pendant le traitement et les deux semaines suivant l'arrêt du traitement (11 échantillons/enfant).

-En supposant 15 participants à l'étude / bras et 3 bras, un total de 495 échantillons fécaux seront collectés dans l'étude 3.

En supposant une durée d'étude de 8 semaines (études 1 et 2) et 8 semaines pour l'expédition des échantillons fécaux à l'Université de Washington, l'extraction de l'ADN, l'amplification par PCR de la région V4 des gènes bactériens de l'ARNr 16S, le séquençage de ces amplicons et l'analyse des données, chaque cycle d'étude, de la fin de l'inscription à la fin de l'analyse des données, devrait durer 16 semaines. Avec cette durée de cycle, nous prévoyons d'être en mesure d'évaluer les MDCF candidats d'ici la fin juin 2017 et de terminer les 5 d'ici la fin avril 2018, date à laquelle un MDCF principal sera nommé pour l'étude POC.

Les informations recueillies seront utilisées pour sélectionner des échantillons de matières fécales humaines à transplanter dans des animaux exempts de germes ; ces animaux, qui seront nourris avec les régimes de leurs donneurs de microbiote humain, seront utilisés pour caractériser davantage les mécanismes qui lient les prototypes de MDCF, le microbiote intestinal et la physiologie/métabolisme de l'hôte.

La chromatographie liquide ultra performante ciblée-spectrométrie de masse (UPLC-MS) et la chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (GC-MS) seront utilisées pour profiler les analytes d'intérêt spécifique dans le plasma et/ou les échantillons fécaux, y compris les acides biliaires et les acides gras à chaîne courte (SCFA). ); marqueurs de la fonction mitochondriale (par exemple, β-hydroxybutyrate, acylcarnitines/acylCoAs, intermédiaires du cycle TCA); acides aminés dans les échantillons fécaux [acides aminés de la chaîne ramifiée, tryptophane et métabolites du tryptophane liés à la croissance et à l'état inflammatoire, y compris ceux produits par le métabolisme bactérien du tryptophane (par ex. dérivés de l'acide indole acétique)].

Prélèvement d'échantillon de sang :

2 ml d'échantillons de sang chacun seront prélevés sur chaque enfant avant l'intervention et juste après la fin de l'intervention.15 participants à l'étude / bras et 3 bras, un total de 90 échantillons de sang seront prélevés dans l'étude 3.

Afin de construire une bibliothèque de microbiote intestinal d'enfants en pleine croissance de la même communauté, un échantillon fécal ponctuel (1-2 g) et un échantillon sanguin ponctuel (2 ml) seront prélevés chez 30 enfants chacun âgés de 12 à 18 ans. mois de l'un ou l'autre sexe, ayant WLZ et LAZ : >-1. Cela ne sera fait qu'après avoir obtenu le consentement des participants à l'étude.

Grâce à nos travaux de laboratoire initiaux ainsi qu'à des études antérieures effectuées sur des animaux gnotobiotiques au Washington University Center for Genome Science, nous avons suggéré qu'une combinaison d'ingrédients alimentaires (pois chiche, farine de soja, arachide et banane verte) avec ou sans lait en poudre serait mérite d'être étudié en ce qui concerne l'impact de l'alimentation sur la stimulation de la prolifération du microbiote discriminant la croissance ainsi que le coût et la durabilité.

Les participants à l'étude seront invités à se rendre quotidiennement au centre d'alimentation désigné pour une thérapie nutritionnelle afin d'éviter le problème du partage de la nourriture. Ils recevront un numéro de téléphone pour joindre le personnel de la clinique, et un membre du personnel peut visiter le foyer d'une famille pour une thérapie nutritionnelle directement observée avec un arrangement préalable si nécessaire.

Des questionnaires de fréquence alimentaire sur cinq jours seront remplis lors de l'inscription, avant la randomisation et chaque semaine pendant toute la période d'étude.

Préparation des différents MDCF :

Préparation d'aliments complémentaires pour les études cliniques Pré-POC :

Sur la base de combinaisons compatibles d'ingrédients alimentaires complémentaires identifiés dans les études précliniques décrites ci-dessus, les chercheurs concevront et produiront 5 prototypes MDCF au laboratoire de transformation des aliments icddrb en quantités suffisantes pour les études cliniques (3 prototypes MDCF pour l'étude 1, 2 prototypes MDCF pour étude 2 et le MDCF qualifié de l'étude 2 pour l'étude 3). Ces formulations seront assorties en termes de densité énergétique et de teneur en micronutriments avec des aliments complémentaires prêts à l'emploi (RUSF) utilisés pour la MAM au Bangladesh et dans d'autres pays, et répondront à toutes les autres exigences locales pour un aliment complémentaire/supplémentaire pour les 12-18 mois enfants atteints de MAM et de retard de croissance. Le laboratoire de transformation des aliments icddr,b produira également la norme de soins RUSF riz-lentille actuelle utilisée pour le traitement de ces enfants à utiliser dans les études 1 et 3.

Développement du produit

1. Identification des ingrédients alimentaires : ingrédients alimentaires disponibles localement, y compris ceux identifiés dans les études précliniques d'oscillation de l'alimentation (par ex. pois chiches, farine de soja, arachides, banane crue, huile de soja, sucre et avec et sans lait en poudre) seront utilisés pour fabriquer des prototypes de MDCF.

   Les MDCF seront enrichis d'un prémélange de vitamines et de minéraux pour répondre aux besoins en micronutriments des aliments complémentaires au Bangladesh (voir ci-dessous).

2. Expériences sur le développement de recettes : La formulation théorique des composants MDCF doit être basée sur une programmation linéaire pour identifier les combinaisons d'ingrédients qui donneraient les recettes les plus nutritives. La densité énergétique du MDCF est ciblée à environ 5 kcal/g, et la distribution calorique est ciblée à 45-50 % de matières grasses et 8 à 12 % de protéines. Sur la base de l'opinion d'experts et d'un consensus au sein de l'équipe de recherche, la teneur en micronutriments doit être fixée pour couvrir 70 % des besoins des enfants non MAS âgés de 12 à 18 mois. Des expériences de développement de recettes et de préparation d'échantillons seront effectuées au laboratoire de transformation des aliments icddr,b en suivant une procédure de production normalisée pour contrôler la qualité du MDCF de chaque lot de production et s'assurer qu'aucune contamination inattendue ni perte de nutriments ne se produisent pendant le traitement. Tous les ingrédients seront nettoyés et triés. Les recettes potentielles doivent être produites en petits lots après (cuisson / cuisson à la vapeur / rôtissage selon le cas pour chacun des ingrédients) et en mélangeant tous les ingrédients dans un mélangeur électrique. Au besoin, la consistance des recettes sera ajustée en faisant varier la quantité d'ingrédients secs et d'huile de soja. De plus, la combinaison de minéraux et de vitamines doit être ajustée s'il y a un goût désagréable pour l'ajout de fortes doses de micronutriments. Une petite quantité (1 %) de lécithine de soja doit être ajoutée à la recette afin d'améliorer la consistance et d'empêcher la séparation de l'huile.
3. Évaluation des propriétés organoleptiques des recettes : l'apparence, la saveur, la consistance des régimes et le degré d'appréciation global des nouvelles recettes seront évalués à l'aide de l'échelle hédonique en 7 points. La valeur la plus élevée, c'est-à-dire 7, sera classée comme « J'aime extrêmement » et la valeur la plus basse de 1 sera classée comme « Je n'aime pas le plus ».
4. Étude des problèmes de sécurité alimentaire et de durée de conservation : les enquêteurs évalueront la stabilité du produit, y compris la qualité microbiologique, afin d'obtenir les informations clés nécessaires à l'établissement de la date de péremption initiale et d'évaluer la stabilité de la teneur en vitamines et minéraux et le potentiel d'oxydation. Les tests microbiologiques standards (numération viable totale, levures, moisissures, coliformes, Escherichia coli, Bacillus cereus, Staphylocoques, Listeria monocytogenes, Cronobacter sakazaki) seront effectués au laboratoire de salubrité des aliments de l'icddr,b.
5. Finalisation de 5 prototypes de MDCF pour les essais cliniques pré-POC : Sur la base de tous les critères mentionnés ci-dessus, notre équipe de chercheurs sélectionnera 5 MDCF pour les essais d'acceptabilité. les enquêteurs estimeront également le coût/kg des ingrédients des MDCF candidats.

Formation du personnel de terrain Une formation sera dispensée à tous les membres de l'équipe de terrain sur les différentes procédures concernant la collecte d'échantillons de selles. La formation sera animée par un noyau de formateurs ainsi que par des enquêteurs de l'étude.

Anthropométrie:

L'âge de l'enfant sera vérifié par rapport à la documentation (certificat de naissance ou carte de vaccination, si disponible) ou au rapport du soignant indiquant la date de naissance de l'enfant. La longueur sera mesurée par un infantomètre sensible à 0,1 cm (SECA, modèle no. 4161721009, Hambourg, Allemagne). Le poids corporel sera mesuré par une balance sensible à 2 g (SECA 7281321009, Hambourg, Allemagne). Les scores Z de la longueur pour l'âge (LAZ), du poids pour la taille (WLZ) et du poids pour l'âge (WAZ) seront calculés selon les normes de croissance de l'OMS de l'étude multicentrique de référence de croissance (MGRS) 11. L'œdème sera examiné en appuyant sur le dessus des deux pieds pendant 3 secondes. La circonférence du bras à mi-hauteur (MUAC) sera mesurée à l'aide de la bande TALC MUAC (Royaume-Uni). Standardisation des appareils de mesure : Une standardisation régulière du pèse-bébé, et de la toise/longueur avec un poids et une longueur connus sera effectuée.

Analyses d'échantillons plasmatiques et fécaux

Les échantillons de plasma recueillis dans le cadre de cette étude exploratoire pré-POC seront envoyés au laboratoire de Jeffrey Gordon situé au Centre des sciences du génome et de la biologie des systèmes de l'Université de Washington à St. Louis. Des méthodes avancées basées sur la spectroscopie de masse et les immunoessais seront utilisées pour obtenir de nouvelles connaissances sur le rôle de l'immaturité du microbiote intestinal et les effets de la tentative de réparation aiguë de cette immaturité avec des prototypes d'aliments complémentaires dirigés par le microbiote (MDCF) sur les biomarqueurs et les médiateurs de la santé. croissance.

Ce test initial des effets des MDCF sur l'immaturité du microbiote et les réponses de l'hôte à l'intervention alimentaire fournira des ensembles de données clés qui permettront un calcul de puissance pour notre étude de preuve de concept prévue dans une population plus large. Dans le pré-POC exploratoire actuel, chaque enfant de chaque groupe de 12 à 15 participants à l'étude servira de son propre contrôle. Des comparaisons supplémentaires seront effectuées au sein et entre les quatre groupes de traitement (c'est-à-dire ceux qui consomment la norme RUSF de référence et l'une des trois formulations MDCF différentes).

Les matières fécales seraient collectées chaque semaine sur chaque participant à l'étude au cours de l'étude de 8 semaines, y compris les 2 semaines précédant le traitement, les quatre semaines pendant le traitement et les deux semaines suivant l'arrêt du traitement. De plus, un échantillon de sang de 2 ml serait obtenu juste avant le début de l'intervention MDCF de 4 semaines et juste au moment où l'intervention de 4 semaines est terminée.

La chromatographie liquide ultra performante ciblée-spectrométrie de masse (UPLC-MS) et la chromatographie en phase gazeuse-spectrométrie de masse (GC-MS) seront utilisées pour profiler les analytes d'intérêt spécifique dans le plasma et/ou les échantillons fécaux, y compris les acides biliaires et les acides gras à chaîne courte (SCFA). ); marqueurs de la fonction mitochondriale (par exemple, β-hydroxybutyrate, acylcarnitines/acylCoAs, intermédiaires du cycle TCA); acides aminés dans le sérum et les échantillons fécaux [acides aminés à chaîne ramifiée, tryptophane et métabolites du tryptophane liés à la croissance et à l'état inflammatoire, y compris ceux produits par le métabolisme bactérien du tryptophane (par ex. dérivés de l'acide indole acétique)].

De plus, les médiateurs/biomarqueurs clés de la croissance linéaire (p. , un marqueur de l'activité des ostéoclastes/résorption osseuse), et le propeptide amino-terminal du procollagène de type 1 (P1NP, un marqueur de l'activité des ostéoblastes/formation osseuse)], et l'inflammation systémique (CRP, AGP) seront quantifiées à l'aide d'ELISA/ Essais Luminex.

Les informations recueillies seront utilisées pour sélectionner des échantillons de matières fécales humaines à transplanter dans des animaux exempts de germes ; ces animaux, qui seront nourris avec les régimes de leurs donneurs de microbiote humain, seront utilisés pour caractériser davantage les mécanismes qui lient les prototypes de MDCF, le microbiote intestinal et la physiologie/métabolisme de l'hôte. De plus, ces biomarqueurs plasmatiques et fécaux seront utilisés pour déterminer les caractéristiques de nos modèles précliniques les mieux corrélées avec les réponses chez les enfants ; ces connaissances aideront à éclairer la conception de prototypes MDCF de nouvelle génération avec une efficacité supérieure sur les résultats de croissance.

Calcul de la taille de l'échantillon :

Le résultat principal de cette étude sera le changement du score Microbiota-for-Age Z (ΔMAZ) après 4 semaines d'intervention. Nos travaux précédents5 ont montré que le MAZ moyen des enfants de 18 mois atteints de MAM était de -1,60+ 0,36 (SEM) alors que pour les enfants en bonne santé appariés selon l'âge, le MAZ moyen était de -0,52 + 0,22, avec une différence entre les moyennes de 1,08+0,41. Utilisation de la fonction power.t.test de R pour un test t apparié (c'est-à-dire appariant des échantillons d'un enfant avant et après l'intervention), avec et supposé SD de 1 et une hypothèse unilatérale, 15 enfants dans chaque bras nous permettront de capturer une amélioration de MAZ de > 0,7 avec une puissance de 80 % et un seuil de signification de 0,05. Les enquêteurs prévoient donc d'être suffisamment puissants pour détecter en toute confiance un changement de MAZ de l'ampleur qui distinguait le microbiote des enfants en bonne santé de celui des enfants atteints de MAM dans notre étude précédente.

L'analyse des données :

L'analyse des données sera effectuée avec la même approche que celle utilisée pour calculer la maturité du microbiote et l'application de ces outils dans une précédente étude d'intervention ATPE traitant des enfants atteints de MAS à icddr,b5.

Le critère de jugement principal dans chaque étude est le changement moyen induit par le traitement du score MAZ par rapport au départ pour chaque bras de l'étude. Les différences (IC à 95 %) entre les moyens des bras de traitement seront évaluées à l'aide d'une ANOVA unidirectionnelle suivie d'un test HSD de Tukey ou d'un test post hoc similaire (le cas échéant). Le prototype MDCF avec la plus grande taille d'effet moyenne dans ces études pré-POC et des propriétés organoleptiques acceptables sera sélectionné pour l'essai clinique POC de suivi afin d'examiner les résultats cliniques chez les enfants atteints de MAM post-MAS.