Klinické zkoušky „Pre-Proof of Concept (Pre-POC)“ k optimalizaci prototypů olověných doplňkových potravin řízených mikrobiotami (MDCF) pro jejich schopnost opravit nezralost mikrobioty a stanovit jejich organoleptické přijatelnosti (MDCF)

Zkoušející provedou 3 Pre-POC studie mezi 12-18měsíčními dětmi s MAM (WLZ <-2 až -3) a zakrněním (LAZ <-2 až -3) v průběhu přibližně dvou let.

Design studie: Randomizovaná kontrolovaná intervenční studie.

Místo studie: Tato studie bude provedena v Bauniabadh, Mirpur ve městě Dháka, což je příměstská slumová oblast.

Účastníci studie: Účastníky studie budou děti ve věku 12-18 měsíců obou pohlaví s MAM (WLZ: <-2 až -3) a zakrslé (LAZ: <-2 až -3).

Počáteční screening a zápis: Děti budou vyšetřovány a zařazovány do průzkumu v domácnostech v sekci 11 Mirpur terénními výzkumnými asistenty (FRA) podle předem stanovených kritérií pro zařazení. Při splnění kritérií pro zápis a po obdržení souhlasu s účastí ve studii od rodičů nebo zákonných zástupců budou děti s příslušnou matkou/pečovatelkou zapsány a náhodně zařazeny do jedné ze čtyř skupin podle počítačem generovaných náhodných čísel pomocí permutovaných bloků různé délky čtyři a dvanáct pro studium 1. Podobně budou zapsány děti a matka/pečovatel a náhodně přiděleny do jednoho ze tří ramen podle počítačem generovaných náhodných čísel s použitím permutovaných bloků o délkách bloku tři a devět pro studii 2 a 3, v tomto pořadí. Kód přiděleného typu MDCF bude uchováván v uzavřených neprůhledných obálkách, dokud nebude přidělen zapsanému dítěti.

Stravování: Děti a matky/pečovatelé budou požádáni, aby přišli do nutričního centra zřízeného v komunitě v Mirpur nejlépe mezi 9:00 a 15:00 a 15:00 v den 1. Matky budou požádány, aby v předcházejících 2 hodinách sledované doby jídla v den sledovaného krmení nepodávaly/nedopouštěly žádné jídlo a mateřské mléko. Ve stejný den v nutričním centru bude dítěti nabídnuto 25 gramů (ve dvou jídlech nejlépe mezi 9-11 a 15-17 hodinou) MDCF podle náhodného rozdělení. Během doby krmení budou matky požádány, aby svým dětem podávaly lžící příslušnou předem zváženou stravu, dokud dítě odmítne jíst dále, jak je popsáno níže. Po dvouminutové pauze bude stejná dieta nabídnuta podruhé, dokud znovu neodmítne. Po druhé dvouminutové pauze bude dieta nabídnuta potřetí, dokud nebude znovu odmítnuta. Po tomto třetím odmítnutí bude epizoda krmení považována za „ukončenou“.7 Doba trvání krmení (vyjma mezilehlých „dob odpočinku“) bude zaznamenána stopkami a bude zaznamenána celková doba trvání krmení. Pokud po dojídání bude dítě požadovat více, bude mu nabídnuto množství, které bylo nabízeno na začátku. Tato epizoda krmení bude trvat maximálně 60 minut. Budou také uvedeny naměřené objemy čisté vody a bude změřeno množství vody přijaté během tohoto 60minutového období jídla. Epizoda krmení bude probíhat pod přímým dohledem vyškoleného studijního personálu. Děti budou považovány za děti odmítající další příjem, pokud oddálí hlavu od jídla, budou plakat, svírat ústa nebo zatínat zuby nebo jsou rozrušené, vyplivnou jídlo nebo odmítnou polykat.8 Skutečně požité množství MDCF bude vypočítáno odečtením zbylého množství od nabízeného množství. Budou poskytnuty předem zvážené ubrousky; jakékoli jídlo, které je vyvráceno, vyzvraceno nebo rozlité, bude otřeno, zváženo a odečteno od nabízeného množství.

Přijatelnost bude kategorizována jako „přijímáni dychtivě“, pokud jídlo snědli ochotně, nedělali žádný rozruch, neplivli, nezvraceli nebo neplakali během pozorovaného jídla. Děti budou kategorizovány jako „přijaté, ale ne dychtivě“, pokud jedly nabízené jídlo, ale během sledovaného jídla se rozčilovaly, vyplivovaly, zvracely nebo plakaly. Třetí kategorií budou děti, které nabízené jídlo nebudou konzumovat vůbec.9

Bude analyzováno množství zkonzumované potravy (g), energie (kcal) a kategorie přijatelnosti. Zapsané děti budou sledovány každodenními domácími návštěvami vyškolenými terénními výzkumnými asistenty kvůli možným vedlejším účinkům/nežádoucím příhodám (např. vyrážka, kopřivka v důsledku potravinové alergie nebo jakékoli významné změny klinického stavu) po dobu jednoho týdne. Pokud budou pozorovány jakékoli vedlejší účinky/nežádoucí příhody, budou léčeny podle standardního managementu poskytovaného v Dhaka Hospital of icddr,b. Vnímání a hodnocení organoleptických vlastností přidělených MDCF příslušnou matkou/pečovatelem bude rovněž hodnoceno pomocí 7bodové hedonské škály. Vyšší hodnota, tedy 7, bude hodnocena jako „extrémně se mi líbí“ a nejnižší hodnota 1 bude hodnocena jako „extrémně nelíbí“.10

Na začátku studie budou vyhledány informace o demografických charakteristikách (bohatství rodin, úroveň bydlení, struktura rodiny a charakteristiky rodičů atd.) a vyškolené FRA budou zaznamenávat nahou váhu dětí pomocí digitální váhy s přesností 2 g. (Seca, model 728, Německo), délka (pomocí infantometru, Seca, model 416, Německo) a obvod nadloktí zaokrouhlený na nejbližší mm (pomocí nepružné zaváděcí pásky). Antropometrie bude provedena podle standardních postupů a všechna měření budou provedena třikrát a střední bude zaznamenáno. Všechny intervence v každé studii budou podávány dětem na zdravotní klinice Mirpur. Matkám/primárním pečovatelům bude doporučeno, aby zachovaly stávající stravovací návyky a postupy kojení svého dítěte.

Pre-POC studie 1 a 2 bude každá trvat 8 týdnů a bude mít 4 a 3 ramena, v tomto pořadí, s 12-15 dětmi zapsanými na rameno, přičemž minimálně 10 dětí na rameno dokončí studii. K definování MAZ před léčbou bude následovat dvoutýdenní zaváděcí období a kromě toho bude zátěž enteropatogeny hodnocena měřením široké škály gastrointestinálních patogenů na bázi PCR ve stejných vzorcích stolice, které byly použity k výpočtu skóre MAZ (tyto budou nepoužívat jako screeningové nástroje pro následnou léčbu). Děti budou náhodně zařazeny do jedné ze tří ramen. Bude vynaloženo úsilí na vyvážení paží s ohledem na pohlaví a stratifikaci randomizace podle věku (např. 2 úrovně; 12-15 měsíců a >15-18 měsíců). Léčebná fáze bude trvat 4 týdny, během kterých bude každý testovaný produkt podáván v testovacím centru dvakrát denně, s odstupem nejméně 6 hodin. Bude následovat 2týdenní fáze po intervenci, ve které budou odebrány 2 další vzorky stolice (na konci 7. a 8. týdne), aby se vyhodnotily změny v mikrobiotě, ke kterým dojde po ukončení léčby.

Pre-POC studie 3 bude mít 3 ramena. Bude testovat hlavní MDCF identifikovaný ve studii 2 a porovnávat jeho účinnost při nápravě nezralosti mikroflóry ve srovnání se současným standardem péče RUSF po dobu 4 týdnů intervence. V této studii budeme zkoumat dopad dávkování 1x vs. 2x denně olověné MDCF na účinnost a také zahrneme 4týdenní období po intervenci (s odběrem vzorků stolice na konci 7., 8., 9. a 10. týdne). posoudit trvanlivost změn ve zralosti mikrobioty po ukončení intervence a návratu k domácí stravě.

Odběr vzorků stolice Týdenní vzorky stolice (1–2 g) budou odebírány do 30 minut od výroby (doma a převezeny zpět do icddr,b) pomocí SOP pro odběr suchých expedičních vzorků N2 použitého v nedávné studii místních RUTF pro léčbu SAM (viz příloha A). Vzorky budou skladovány při -80°C, než budou na konci každé studie odeslány do Gordon Lab pro rychlou analýzu zralosti mikrobioty (měřeno před, během a po ukončení léčby s každým prototypem MDCF) a posouzení enteropatogenu na základě PCR zátěž ve vzorcích stolice (měřeno před a po ošetření MDCF). Relativní množství každého z bakteriálních kmenů, které byly specificky zaměřeny MDCF příští generace, bude určeno analýzou datových souborů 16S rRNA (prováděné v Gordon Lab a financované primárním grantem BMMI Project POC Phase)

Navrhované studie před POC

Studie 1: Otestujte 3 prototypy MDCF a současný standard péče o MAM RUSF z rýže-čočky, abyste určili velikost účinku každého z nich na opravu MAZ při 4týdenním zásahu 2x denně, s 2týdenní fází po zásahu k posouzení trvanlivosti Změny v mikrobiotě vyvolané MDCF:

Rameno 1 - Aktuální RUSF používané pro MAM, podávané 2x /den po dobu 4 týdnů Rameno 2 - Prototyp MDCF1, podávané 2x /den po 4 týdny Rameno 3 - Prototyp MDCF2, podávané 2x /den po 4 týdny Rameno 4 - Prototyp MDCF3, podávané 2x /den po dobu 4 týdnů

Rameno 1 – RUSF na bázi rýže-čočky (důvod: referenční standard péče o MAM; není navrženo na základě znalosti jeho účinků na střevní mikroflóru nebo nezralost mikroflóry).

Rameno 2 - Prototyp MDCF se čtyřmi doplňkovými potravinovými složkami plus sušené mléko (důvod: olovo s důkazy z preklinických gnotobiotických modelů opravy nezralosti mikrobioty a pozitivních účinků na růst).

Rameno 3 – prototyp MDCF se čtyřmi doplňkovými potravinovými složkami bez sušeného mléka (důvod: určit, zda stažení mléka ovlivní účinky čtyř doplňkových kombinací potravinových složek na mikrobiotu a biomarkery hostitele).

Rameno 4 - Prototyp MDCF se dvěma doplňkovými potravinovými složkami (cizrna a sójová mouka) bez sušeného mléka (důvod: porovnejte účinnost této formulace s účinností formulace MDCF obsahující čtyři doplňkové složky potravin, která je podávána skupině 3).

Sbírka vzorků stolice:

Vzorky stolice budou odebírány od každého dítěte při zápisu, 1 týden po zařazení, při randomizaci (2 týdny) a jednou týdně během intervenčních a postintervenčních fází.

-Za předpokladu 15 účastníků studie / rameno a 4 ramena bude ve studii 1 odebráno celkem 540 vzorků stolice.

Odběr vzorku krve:

Každému dítěti budou před intervencí a těsně po jejím dokončení odebrány 2 ml vzorků krve.

- Za předpokladu 15 účastníků studie / paží bude ve studii 1 odebráno celkem 120 vzorků krve.

Studie 2: Vyberte nejúčinnější MDCF ze studie 1 a porovnejte se 2 dalšími prototypy MDCF s použitím stejného designu jako ve studii 1:

Rameno 1 - 'Vítěz' ze studie 2 podávané 2x denně po dobu 4 týdnů Rameno 2 - Prototyp MDCF4 podávaný 2x /den po dobu 4 týdnů Rameno 3 - Prototyp MDCF5 podávaný 2x /den po dobu 4 týdnů

Sbírka vzorků stolice:

Vzorky stolice budou odebírány od každého dítěte při zápisu, 1 týden po zařazení, při randomizaci (2 týdny) a jednou týdně během intervenčních a postintervenčních fází.

- Za předpokladu 15 účastníků studie / rameno a 3 ramena bude ve studii 2 odebráno celkem 405 vzorků stolice.

Odběr vzorku krve:

Každému dítěti budou před intervencí a těsně po jejím dokončení odebrány 2 ml vzorků krve.

- 15 účastníků studie / paží, ve studii 2 bude odebráno celkem 90 vzorků krve.

Studie 3:

Vyberte hlavní MDCF ze studií 1, 2 a proveďte závěrečné „vypalování“ oproti současnému RUSF a také prozkoumejte dopad podávání 1x vs. 2x denně se 4týdenním obdobím po intervenci, abyste získali další informace o trvanlivosti sponzorovaných MDCF. změny v mikrobiotě:

Rameno 1 – aktuální RUSF používané pro MAM 2x/den po dobu 4 týdnů s následnou 4týdenní pointervenční fází Rameno 2 – hlavní MDCF identifikovaný ve studii 2, 2x/den po dobu 4 týdnů, po kterém následuje 4týdenní postintervenční fáze Rameno 3 - Vedení MDCF identifikované ve studii 2, 1x denně po dobu 4 týdnů, po kterých následuje 4týdenní pointervenční fáze

Sbírka vzorků stolice:

Výkaly byly odebírány týdně od každého účastníka studie v průběhu 8týdenní studie včetně 2 týdnů před léčbou, čtyř týdnů během léčby a dvou týdnů po ukončení léčby (11 vzorků/dítě).

- Za předpokladu 15 účastníků studie / rameno a 3 ramena bude ve studii 3 odebráno celkem 495 vzorků stolice.

Za předpokladu 8týdenního trvání studie (studie 1 a 2) a 8 týdnů pro odeslání fekálních vzorků na Washington University, extrakci DNA, PCR amplifikace oblasti V4 bakteriálních genů 16S rRNA, sekvenování těchto amplikonů a analýzu dat, Předpokládá se, že každý studijní cyklus od dokončení zápisu po dokončení analýzy dat bude trvat 16 týdnů. Předpokládáme, že s touto dobou cyklu budeme schopni vyhodnotit kandidátské MDCF do konce června 2017 a dokončit všech 5 do konce dubna 2018, kdy bude vedoucí MDCF nominován do studie POC.

Shromážděné informace budou použity k výběru vzorků lidských výkalů pro transplantaci do bezmikrobních zvířat; tato zvířata, která budou krmena stravou svých dárců lidské mikroflóry, budou použita k další charakterizaci mechanismů, které spojují prototypy MDCF, střevní mikroflóru a fyziologii/metabolismus hostitele.

Cílená ultravýkonná kapalinová chromatografie-hmotnostní spektrometrie (UPLC-MS) a plynová chromatografie-hmotnostní spektrometrie (GC-MS) budou použity k profilování analytů specifického zájmu ve vzorcích plazmy a/nebo stolice, včetně žlučových kyselin a mastných kyselin s krátkým řetězcem (SCFA). ); markery mitochondriální funkce (např. p-hydroxybutyrát, acylkarnitiny/acylCoAs, meziprodukty cyklu TCA); aminokyseliny ve vzorcích stolice [aminokyseliny s rozvětveným řetězcem, tryptofan a metabolity tryptofanu související s růstem a zánětlivým stavem, včetně těch produkovaných bakteriálním metabolismem tryptofanu (např. deriváty kyseliny indoloctové)].

Odběr vzorku krve:

Každému dítěti budou před intervencí a těsně po jejím dokončení odebrány 2 ml vzorků krve.15 účastníků studie / rameno a 3 ramena, ve studii 3 bude odebráno celkem 90 vzorků krve.

Aby bylo možné sestavit knihovnu střevní mikroflóry zdravých rostoucích dětí ze stejné komunity, bude odebrán jeden bodový vzorek stolice (1–2 g) a vzorek krve (2 ml) od 30 dětí ve věku 12–18 let. měsíce obou pohlaví, s WLZ a LAZ: >-1. To bude provedeno až po získání souhlasu účastníků studie.

Díky naší počáteční laboratorní práci i dřívějším studiím provedeným na gnotobiotických zvířatech ve Washingtonském univerzitním centru pro vědu o genomu jsme navrhli, že kombinace potravinových přísad (cizrna, sójová mouka, arašídy a zelený banán) se sušeným mlékem nebo bez něj bude stojí za to prostudovat s ohledem na vliv stravy na stimulaci proliferace mikroflóry diskriminující růst, jakož i náklady a udržitelnost.

Účastníci studie budou požádáni, aby denně docházeli do určeného stravovacího centra na nutriční terapii, aby se předešlo problému sdílení potravy. Bude jim poskytnuto telefonní číslo, aby se mohli spojit s personálem kliniky, a člen personálu může v případě potřeby po předchozí domluvě navštívit rodinnou domácnost za účelem přímo sledované nutriční terapie.

Pětidenní dotazníky týkající se frekvence jídla budou vyplněny při zápisu, před randomizací a týdně během celého období studie.

Příprava různých MDCF:

Příprava doplňkových potravin pro klinické studie před POC:

Na základě kompatibilních kombinací doplňkových složek potravin identifikovaných ve výše popsaných preklinických studiích výzkumníci navrhnou a vyrobí 5 prototypů MDCF v icddr,b Food Processing Laboratory v dostatečném množství pro klinické studie (3 prototypy MDCF pro studii 1, 2 prototypy MDCF pro Studie 2 a kvalifikovaný MDCF ze Studie 2 pro Studii 3). Tyto formulace budou odpovídat energetické hustotě a obsahu mikroživin s doplňkovými potravinami připravenými k použití (RUSF) používanými pro MAM v Bangladéši a dalších zemích a budou splňovat všechny další místní požadavky na doplňkové/doplňkové krmivo pro děti ve věku 12–18 měsíců. děti s MAM a zakrnění. Laboratoř zpracování potravin icddr,b také vyrobí aktuální standard péče RUSF z rýže a čočky používaný k léčbě těchto dětí pro použití ve studiích 1 a 3.

Vývoj produktu

1. Identifikace složek potravin: Místně dostupné složky potravin včetně složek identifikovaných v předklinických studiích výkyvů stravy (např. cizrna, sójová mouka, arašídy, syrový banán, sójový olej, cukr a se sušeným mlékem a bez něj) budou použity k výrobě prototypů MDCF.

   MDCF budou obohaceny o premix vitamínů a minerálů, aby byly splněny požadavky na mikroživiny pro doplňkové potraviny v Bangladéši (viz níže).

2. Experimenty s vývojem receptury: Teoretická formulace složek MDCF musí být vytvořena na základě lineárního programování, aby se identifikovaly kombinace přísad, které by vedly k nejvýživnějším receptům. Energetická hustota MDCF je zaměřena na ~5 kcal/g a kalorická distribuce je zaměřena na 45-50 procent z tuku a 8-12 procent z bílkovin. Na základě odborného názoru a konsensu v rámci výzkumného týmu by měl být obsah mikroživin nastaven tak, aby pokryl 70 procent požadavků dětí bez SAM ve věku 12-18 měsíců. Experimenty pro vývoj receptur a přípravu vzorků budou prováděny v icddr,b Food Processing Laboratory podle standardizovaného výrobního postupu pro kontrolu kvality MDCF z každé výrobní šarže a zajištění, že během zpracování nedojde k žádné neočekávané kontaminaci a ztrátě živin. Všechny ingredience budou vyčištěny a roztříděny. Potenciální receptury by měly být vyráběny v malých dávkách po (vaření/paření/pečení podle potřeby pro každou ze složek) a smícháním všech složek v elektrickém mixéru. V případě potřeby se konzistence receptů upraví změnou množství suchých přísad a sójového oleje. Kromě toho musí být kombinace minerálů a vitamínů upravena, pokud se objeví nepříjemná chuť po přidání vysoké dávky (dávek) mikroživin. Do receptury se přidá malé množství (1 procento) sójového lecitinu, aby se zlepšila konzistence a zabránilo se separaci oleje.
3. Posouzení organoleptických vlastností receptur: Nové receptury budou posuzovány z hlediska vzhledu, chuti, konzistence diet a celkové líbivosti pomocí 7bodové hedonské stupnice. Vyšší hodnota, tedy 7, bude hodnocena jako „extrémně se líbí“ a nejnižší hodnota 1 bude hodnocena jako „nejvíce se mi nelíbí“.
4. Studie otázek bezpečnosti potravin a trvanlivosti: Výzkumníci vyhodnotí stabilitu produktu včetně mikrobiologické kvality, aby získali klíčové informace potřebné pro stanovení počátečního data „minimální trvanlivosti“ a posoudili stabilitu obsahu vitamínů a minerálů a potenciál pro oxidaci. Standardní mikrobiologické testy (celkový počet životaschopných jedinců, kvasinky, plísně, koliformní bakterie, Escherichia coli, Bacillus cereus, Staphylococci, Listeria monocytogenes, Cronobacter sakazaki) budou provedeny v icddr,b Food Safety Laboratory.
5. Finalizace 5 prototypů MDCF pro klinické zkoušky před POC: Na základě všech výše uvedených kritérií vybere náš tým výzkumníků 5 MDCF pro zkoušky přijatelnosti. vyšetřovatelé rovněž odhadnou cenu/kg složek kandidátských MDCF.

Školení terénního personálu Všem členům terénního týmu bude poskytnuto školení o různých postupech odběru vzorků stolice. Školení bude usnadňovat základní skupina školitelů a také řešitelů studie.

Antropometrie:

Věk dítěte se ověří podle dokladů (rodný list nebo očkovací průkaz, pokud je k dispozici) nebo hlášení pečovatele o datu narození dítěte. Délka bude měřena infantometrem citlivým na 0,1 cm (SECA, model č. 4161721009, Hamburk, Německo). Tělesná hmotnost bude měřena váhou citlivou na 2 g (SECA 7281321009, Hamburg, Německo). Z-skóre délky na věk (LAZ), hmotnosti na délku (WLZ) a hmotnosti na věk (WAZ) budou vypočteny podle Růstových standardů WHO podle Multicentre Growth Reference Study (MGRS) 11. Edém bude vyšetřen stisknutím horní strany obou chodidel po dobu 3 sekund. Obvod střední části paže (MUAC) bude měřen pomocí pásky TALC MUAC (UK). Standardizace měřících zařízení: Bude prováděna pravidelná standardizace dětské váhy a délkové/délkové desky o známé hmotnosti a délce.

Analýza vzorků plazmy a stolice

Vzorky plazmy shromážděné v této průzkumné studii před POC budou odeslány do laboratoře Jeffreyho Gordona umístěné v Centru pro vědy o genomu a systémovou biologii na Washingtonské univerzitě v St. Louis. Pokročilé metody hmotnostní spektroskopie a imunoanalýzy budou použity k získání nových poznatků o úloze nezralosti střevní mikroflóry a účincích pokusů o akutní opravu této nezralosti pomocí prototypů olověných mikrobiálních komplementárních potravin (MDCF) na biomarkery a mediátory zdravých růst.

Tento počáteční test účinků MDCF na nezralost mikrobioty a reakce hostitele na dietní zásah poskytne klíčové soubory dat, které umožní výpočet síly pro naši plánovanou studii důkazu konceptu ve větší populaci. V současném průzkumném pre-POC bude každé dítě v každé skupině 12-15 účastníků studie sloužit jako jeho/její vlastní kontrola. Další srovnání budou provedena v rámci a napříč čtyřmi léčebnými skupinami (tj. těmi, které konzumují referenční standard RUSF a jednu ze tří různých formulací MDCF).

Výkaly by byly odebírány týdně od každého účastníka studie v průběhu 8týdenní studie, včetně 2 týdnů před léčbou, čtyř týdnů během léčby a dvou týdnů po ukončení léčby. Kromě toho by byl odebrán 2 ml vzorek krve těsně před zahájením 4týdenní intervence MDCF a právě po dokončení 4týdenní intervence.

Cílená ultravýkonná kapalinová chromatografie-hmotnostní spektrometrie (UPLC-MS) a plynová chromatografie-hmotnostní spektrometrie (GC-MS) budou použity k profilování analytů specifického zájmu ve vzorcích plazmy a/nebo stolice, včetně žlučových kyselin a mastných kyselin s krátkým řetězcem (SCFA). ); markery mitochondriální funkce (např. p-hydroxybutyrát, acylkarnitiny/acylCoAs, meziprodukty cyklu TCA); aminokyseliny v séru a vzorcích stolice [aminokyseliny s rozvětveným řetězcem, tryptofan a metabolity tryptofanu související s růstem a zánětlivým stavem, včetně těch produkovaných bakteriálním metabolismem tryptofanu (např. deriváty kyseliny indoloctové)].

Kromě toho klíčové mediátory/biomarkery lineárního růstu (např. růstový hormon a IGF-1), využití energie (inzulín, leptin) a biologie kostí [IL-6, osteoprotegerin, C-terminální peptid kolagenu typu I (CTX , marker aktivity osteoklastů/kostní resorpce) a amino-terminální propeptid prokolagenu typu 1 (P1NP, marker aktivity osteoblastů/tvorby kosti)] a systémový zánět (CRP, AGP) budou kvantifikovány pomocí zavedeného ELISA/ Testy Luminex.

Shromážděné informace budou použity k výběru vzorků lidských výkalů pro transplantaci do bezmikrobních zvířat; tato zvířata, která budou krmena stravou svých dárců lidské mikroflóry, budou použita k další charakterizaci mechanismů, které spojují prototypy MDCF, střevní mikroflóru a fyziologii/metabolismus hostitele. Kromě toho budou tyto plazmatické a fekální biomarkery použity ke stanovení vlastností našich preklinických modelů, které nejlépe korelují s odpověďmi u dětí; tyto znalosti pomohou při navrhování prototypů nové generace MDCF s vynikající účinností na výsledky růstu.

Vzorový výpočet velikosti:

Primárním výsledkem této studie bude změna ve skóre Microbiota-for-Age Z (ΔMAZ) po 4 týdnech intervence. Naše předchozí práce5 ukázala, že průměrná MAZ 18měsíčních dětí s MAM byla -1,60+ 0,36 (SEM), zatímco u zdravých dětí stejného věku byl průměr MAZ -0,52+0,22, s rozdílem mezi průměry 1,08+0,41. Použití funkce power.t.test R pro párový t-test (tj. párování vzorků od dítěte před a po intervenci), s předpokládanou SD 1 a jednostrannou hypotézou, 15 dětí v každé paži nám umožní zachytit zlepšení MAZ > 0,7 s 80% silou a prahem významnosti 0,05. Vyšetřovatelé proto očekávají, že budou dostatečně silní, aby mohli s jistotou detekovat změnu v MAZ o velikosti, která odlišuje mikrobiotu zdravých dětí od mikrobioty dětí s MAM v naší předchozí studii.

Analýza dat :

Analýza dat bude provedena stejným přístupem jako pro výpočet zralosti mikrobioty a aplikací těchto nástrojů v předchozí intervenční studii RUTF, která léčila děti se SAM na icddr,b5.

Primárním měřítkem výsledku v každé studii je průměrná změna skóre MAZ vyvolaná léčbou od výchozí hodnoty pro každé rameno ve studii. Rozdíly (95% CI) mezi průměry léčebných ramen budou hodnoceny pomocí jednocestné ANOVA následované Tukeyho HSD nebo podobným post hoc testem (pokud je to vhodné). Prototyp MDCF s největší průměrnou velikostí účinku v těchto studiích před POC a přijatelnými organoleptickými vlastnostmi bude vybrán pro následnou klinickou studii POC, aby byly zkoumány klinické výsledky u dětí s post-SAM MAM.