Ensaios clínicos 'Pré-prova de conceito (Pré-POC)' para otimizar protótipos de alimentos complementares direcionados à microbiota de chumbo (MDCF) para sua capacidade de reparar a imaturidade da microbiota e estabelecer sua aceitabilidade organoléptica (MDCF)

Os investigadores conduzirão 3 estudos pré-POC entre crianças de 12 a 18 meses com MAM (WLZ <-2 a -3) e déficit de crescimento (LAZ <-2 a -3) ao longo de aproximadamente dois anos.

Desenho do estudo: Ensaio de intervenção controlado randomizado.

Local do estudo: Este estudo será conduzido em Bauniabadh, Mirpur na cidade de Dhaka, que é uma área de favela periurbana.

Participantes do estudo: Os participantes do estudo serão crianças de 12 a 18 meses de ambos os sexos com MAM (WLZ: <-2 a -3) e déficit de crescimento (LAZ: <-2 a -3).

Triagem inicial e inscrição: As crianças serão triadas e inscritas por pesquisa domiciliar na seção 11 de Mirpur por Assistentes de Pesquisa de Campo (FRAs) seguindo critérios de inclusão pré-especificados. Atendendo aos critérios de inclusão e ao receber o consentimento para participação no estudo dos pais ou responsáveis ​​legais, as crianças com a respectiva mãe/responsável serão matriculadas e alocadas aleatoriamente em um dos quatro braços de acordo com números aleatórios gerados por computador usando blocos permutados de comprimentos variados de quatro e doze para o estudo 1. Da mesma forma, as crianças e a mãe/responsável serão inscritas e designadas aleatoriamente para um dos três braços de acordo com números aleatórios gerados por computador usando blocos permutados de comprimentos de bloco de três e nove para o estudo 2 e 3, respectivamente. O código do tipo atribuído de MDCFs será mantido em envelopes opacos fechados até que seja atribuído a uma criança matriculada.

Sessões de alimentação: As crianças e mães/responsáveis ​​serão solicitadas a comparecer ao centro de nutrição estabelecido na comunidade de Mirpur, preferencialmente entre 9h e 11h e 15h e 17h no dia 1. As mães serão solicitadas a não dar/permitir qualquer alimento e leite materno nas 2 horas anteriores à refeição observada no dia da alimentação observada. No mesmo dia, no centro de nutrição, serão oferecidos à criança 25 gramas (em duas refeições, de preferência entre 9h e 11h e 15h e 17h) de MDCFs, conforme decidido por alocação aleatória. Durante o período de alimentação, será solicitado às mães que dêem à colher as respectivas dietas pré-pesadas para seus filhos até que ele se recuse a comer mais, conforme descrito abaixo. Após uma pausa de dois minutos, a mesma dieta será oferecida uma segunda vez até que ele recuse novamente. Após uma segunda pausa de dois minutos, a dieta será oferecida uma terceira vez até ser recusada novamente. Após esta terceira recusa, o episódio de alimentação será considerado 'encerrado'.7 A duração da alimentação (excluindo os 'períodos de descanso' intermediários) será registrada pelo cronômetro, e a duração total da alimentação será anotada. Se a criança exigir mais depois de terminar toda a comida, será oferecida a ela a quantidade que foi oferecida no início. Este episódio de alimentação durará no máximo 60 minutos. Volumes medidos de água pura também serão fornecidos e a quantidade de água ingerida durante esse período de refeição de 60 minutos será medida. O episódio de alimentação ocorrerá sob a supervisão direta de pessoal de estudo treinado. As crianças serão consideradas como recusando mais ingestão se afastarem a cabeça da comida, chorarem, apertarem a boca ou cerrarem os dentes, ou ficarem agitadas, cuspirem fora a comida ou se recusem a engolir.8 A quantidade de MDCF efetivamente ingerida será calculada subtraindo-se a sobra da quantidade ofertada. Guardanapos pré-pesados ​​serão fornecidos; qualquer alimento que seja regurgitado, vomitado ou derramado será esfregado, pesado e subtraído da quantidade oferecida.

A aceitabilidade será categorizada como 'aceito avidamente' se eles comerem prontamente, não fizerem barulho, cuspir, vomitar ou chorar durante a refeição observada. As crianças serão categorizadas como 'aceitas, mas não avidamente' se comeram a comida oferecida, mas fizeram barulho, cuspiram, vomitaram ou choraram durante a refeição observada. A terceira categoria serão as crianças que não consumirão os alimentos oferecidos.9

Serão analisados ​​a quantidade de alimento consumido (g), energia (kcal) e categoria de aceitabilidade. As crianças matriculadas serão monitoradas por visitas domiciliares diárias por assistentes de pesquisa de campo treinados para quaisquer possíveis efeitos colaterais/eventos adversos (por exemplo, erupção cutânea, urticária devido a alergia alimentar ou qualquer alteração significativa no estado clínico) por uma semana. Se quaisquer efeitos colaterais/eventos adversos forem observados, eles serão tratados de acordo com o tratamento padrão fornecido no Dhaka Hospital of icddr,b. A percepção e avaliação das características organolépticas dos MDCFs atribuídos pela respectiva mãe/cuidador também serão avaliadas usando a escala hedônica de 7 pontos. O valor mais alto, ou seja, 7, será classificado como 'gostei extremamente' e o valor mais baixo 1 será classificado como 'desgostei extremamente'.10

No início do estudo, serão buscadas informações sobre as características demográficas (riqueza das famílias, padrão de moradia, estrutura familiar e características dos pais etc.) (Seca, modelo 728, Alemanha), comprimento (usando infantômetro, Seca, modelo 416, Alemanha) e circunferência do braço até o milímetro mais próximo (usando uma fita de inserção não elástica). A antropometria será feita de acordo com os procedimentos padrão e todas as medições serão feitas três vezes e a do meio será registrada. Todas as intervenções em cada estudo serão administradas a crianças na clínica de saúde de Mirpur. As mães/cuidadores primários serão aconselhados a manter as práticas alimentares e de amamentação atuais de seus filhos.

Os estudos pré-POC 1 e 2 terão 8 semanas de duração cada e terão 4 e 3 braços, respectivamente, com 12-15 crianças inscritas por braço com um mínimo de 10 crianças por braço concluindo o estudo. Haverá um período de execução de 2 semanas para definir o MAZ pré-tratamento e, adicionalmente, a carga de enteropatógenos será avaliada por medição baseada em PCR de uma ampla gama de patógenos gastrointestinais nas mesmas amostras fecais usadas para calcular os escores MAZ (estes irão não devem ser usados ​​como ferramentas de triagem para tratamento subseqüente). As crianças serão designadas aleatoriamente para um dos três braços. Serão feitos esforços para equilibrar os braços em relação ao gênero e estratificar a randomização por idade (por exemplo, 2 níveis; 12-15 meses e > 15-18 meses). A fase de tratamento será de 4 semanas, durante as quais cada produto de teste será administrado no centro de teste duas vezes ao dia, com pelo menos 6 horas de intervalo. Haverá uma fase pós-intervenção de 2 semanas na qual serão coletadas 2 amostras fecais adicionais (no final das semanas 7 e 8) para avaliar as mudanças na microbiota que ocorrem após o término do tratamento.

O Estudo Pré-POC 3 terá 3 braços. Ele testará o MDCF principal identificado no estudo 2 e avaliará sua eficácia na reparação da imaturidade da microbiota em comparação com o padrão atual de tratamento da RUSF durante um período de intervenção de 4 semanas. Examinaremos o impacto da dosagem de 1x vs 2x por dia do chumbo MDCF na eficácia neste estudo e também incluiremos um período pós-intervenção de 4 semanas (com amostragem fecal no final das semanas 7, 8, 9 e 10) para avaliar a durabilidade das mudanças na maturidade da microbiota após a interrupção da intervenção e retorno à dieta caseira.

Coleta de amostras fecais Amostras fecais semanais (1-2g) serão coletadas dentro de 30 minutos após a produção (em casa e transportadas de volta para o icddr,b) usando o SOP de coleta de amostras N2 dry shipper usado no estudo recente de RUTFs locais para o tratamento do SAM (consulte o Apêndice A). As amostras serão armazenadas a -80◦C antes de serem enviadas ao Gordon Lab no final de cada estudo para análise rápida da maturidade da microbiota (medida antes, durante e após a interrupção do tratamento com cada protótipo de MDCF) e avaliação baseada em PCR de enteropatógeno carga em amostras fecais (medidas antes e depois do tratamento com MDCF). A abundância relativa de cada uma das cepas bacterianas que foram especificamente visadas pelo MDCF de próxima geração será determinada por meio da análise dos conjuntos de dados 16S rRNA (realizados no Gordon Lab e financiados pela concessão primária da Fase POC do Projeto BMMI)

Estudos pré-POC propostos

Estudo 1: Teste 3 protótipos de MDCFs e o atual padrão de tratamento RUSF de lentilha de arroz para MAM para estabelecer o tamanho do efeito de cada um no reparo MAZ em uma intervenção de 4 semanas 2x / dia, com uma fase pós-intervenção de 2 semanas para avaliar a durabilidade de Alterações induzidas pelo MDCF na microbiota:

Braço 1 - RUSF atual usado para MAM, administrado 2x/dia por 4 semanas Braço 2 - Protótipo MDCF1, administrado 2x/dia por 4 semanas Braço 3 - Protótipo MDCF2, administrado 2x/dia por 4 semanas Braço 4 - Protótipo MDCF3, administrado 2x /dia durante 4 semanas

Braço 1 - RUSF à base de lentilha de arroz (fundamental: padrão de referência de atendimento para MAM; não projetado com base no conhecimento de seus efeitos na microbiota intestinal ou na imaturidade da microbiota).

Braço 2 - protótipo de MDCF com quatro ingredientes alimentares complementares mais leite em pó (fundamental: conduzir com evidências de modelos gnotobióticos pré-clínicos de reparação da imaturidade da microbiota e efeitos positivos no crescimento).

Braço 3 - protótipo de MDCF com quatro ingredientes alimentares complementares sem leite em pó (fundamental: determinar se a retirada do leite impacta os efeitos das quatro combinações de ingredientes alimentares complementares na microbiota e nos biomarcadores do hospedeiro).

Braço 4 - protótipo de MDCF com dois ingredientes alimentares complementares (grão-de-bico e farinha de soja) sem leite em pó (raciocínio: comparar a eficácia desta formulação com a da formulação MDCF contendo quatro ingredientes alimentares complementares que é administrado ao grupo 3).

Coleta de amostras fecais:

Amostras fecais serão coletadas de cada criança na inscrição, 1 semana após a inscrição, na randomização (2 semanas) e semanalmente durante as fases de intervenção e pós-intervenção.

-Assumindo 15 participantes do estudo/braço e 4 braços, um total de 540 amostras fecais será coletado no Estudo1.

Coleta de amostra de sangue:

Serão coletados 2 mL de amostras de sangue de cada criança antes da intervenção e logo após a conclusão da intervenção.

-Assumindo 15 participantes/braços do estudo, um total de 120 amostras de sangue serão coletadas no Estudo1.

Estudo 2: Selecione o MDCF mais eficaz do estudo 1 e compare com 2 protótipos MDCF adicionais usando o mesmo design usado no estudo 1:

Braço 1 - 'Vencedor' do estudo 2 administrado 2x/dia durante 4 semanas Braço 2 - Protótipo MDCF4 administrado 2x/dia durante 4 semanas Braço 3 - Protótipo MDCF5 administrado 2x/dia durante 4 semanas

Coleta de amostras fecais:

Amostras fecais serão coletadas de cada criança na inscrição, 1 semana após a inscrição, na randomização (2 semanas) e semanalmente durante as fases de intervenção e pós-intervenção.

-Assumindo 15 participantes do estudo/braço e 3 braços, um total de 405 amostras fecais será coletado no Estudo 2.

Coleta de amostra de sangue:

Serão coletados 2 mL de amostras de sangue de cada criança antes da intervenção e logo após a conclusão da intervenção.

- 15 participantes/braços do estudo, um total de 90 amostras de sangue serão coletadas no Estudo 2.

Estudo 3:

Selecione o MDCF principal dos estudos 1, 2 e conduza o 'bake-off' final vs RUSF atual e também examine o impacto da administração de 1x vs 2x por dia com um período pós-intervenção de 4 semanas para fornecer informações adicionais sobre a durabilidade do MDCF patrocinado mudanças na microbiota:

Braço 1 - RUSF atual usado para MAM 2x/dia por 4 semanas seguido por uma fase pós-intervenção de 4 semanas Braço 2 - MDCF de derivação identificado no estudo 2, 2x /dia por 4 semanas seguido por uma fase pós-intervencional de 4 semanas Braço 3 - Lead MDCF identificado no estudo 2, 1x/dia por 4 semanas seguido por uma fase pós-intervenção de 4 semanas

Coleta de amostras fecais:

As fezes seriam coletadas semanalmente de cada participante do estudo durante o estudo de 8 semanas, incluindo as 2 semanas anteriores ao tratamento, as quatro semanas durante o tratamento e as duas semanas após o término do tratamento (11 amostras/criança).

-Assumindo 15 participantes do estudo/braço e 3 braços, um total de 495 amostras fecais será coletado no Estudo 3.

Assumindo uma duração de estudo de 8 semanas (estudos 1 e 2) e 8 semanas para envio de amostras fecais para a Universidade de Washington, extração de DNA, amplificação por PCR da região V4 dos genes 16S rRNA bacterianos, sequenciamento desses amplicons e análise de dados, cada ciclo de estudo desde a conclusão da inscrição até a conclusão da análise de dados é previsto para ser de 16 semanas. Com esse tempo de ciclo, prevemos poder avaliar os MDCFs candidatos até o final de junho de 2017 e concluir todos os 5 até o final de abril de 2018, quando um MDCF líder será nomeado para o estudo POC.

As informações coletadas serão usadas para selecionar amostras fecais humanas para transplante em animais livres de germes; esses animais, que serão alimentados com as dietas de seus doadores de microbiota humana, serão usados ​​para caracterizar ainda mais os mecanismos que ligam os protótipos de MDCF, a microbiota intestinal e a fisiologia/metabolismo do hospedeiro.

Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa Alvo de Ultra Desempenho (UPLC-MS) e Espectrometria de Massa-Cromatografia Gasosa (GC-MS) serão usadas para perfilar analitos de interesse específico em amostras de plasma e/ou fezes, incluindo ácidos biliares e ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs). ); marcadores da função mitocondrial (por exemplo, β-hidroxibutirato, acilcarnitinas/acilCoAs, intermediários do ciclo TCA); aminoácidos em amostras fecais [aminoácidos de cadeia ramificada, triptofano e metabólitos de triptofano relacionados ao crescimento e estado inflamatório, incluindo aqueles produzidos pelo metabolismo bacteriano do triptofano (por exemplo, derivados do ácido indol acético)].

Coleta de amostra de sangue:

Serão coletados 2 mL de amostras de sangue de cada criança antes da intervenção e logo após a conclusão da intervenção.15 participantes do estudo/braço e 3 braços, um total de 90 amostras de sangue serão coletadas no Estudo 3.

A fim de construir uma biblioteca de microbiota intestinal de crianças em crescimento saudável da mesma comunidade, uma amostra de fezes (1-2 g) e uma amostra de sangue (2 mL) serão coletadas de 30 crianças cada uma com idade entre 12 e 18 anos. meses de ambos os sexos, tendo WLZ e LAZ: >-1. Isso será feito somente após o consentimento dos participantes do estudo.

Através do nosso trabalho de laboratório inicial, bem como de estudos anteriores feitos em animais gnotobióticos no Centro de Ciência do Genoma da Universidade de Washington, nos levou a sugerir que uma combinação de ingredientes alimentares (grão-de-bico, farinha de soja, amendoim e banana verde) com ou sem leite em pó será vale a pena estudar com relação ao impacto da dieta na estimulação da proliferação da microbiota discriminatória do crescimento, bem como custo e sustentabilidade.

Os participantes do estudo serão solicitados a comparecer diariamente ao centro de alimentação designado para terapia nutricional, a fim de evitar o problema de compartilhamento de alimentos. Eles receberão um número de telefone para entrar em contato com a equipe clínica, e um membro da equipe pode visitar a casa de uma família para terapia nutricional diretamente observada com acordo prévio, se necessário.

Questionários de frequência alimentar de cinco dias serão preenchidos na inscrição, antes da randomização e semanalmente durante todo o período do estudo.

Preparação de diferentes MDCFs:

Preparação de alimentos complementares para estudos clínicos pré-POC:

Com base em combinações compatíveis de ingredientes alimentares complementares identificados nos estudos pré-clínicos descritos acima, os investigadores projetarão e produzirão 5 protótipos MDCF no Laboratório de Processamento de Alimentos icddr,b em quantidades suficientes para estudos clínicos (3 protótipos MDCF para o Estudo 1, 2 protótipos MDCF para Estudo 2 e o MDCF qualificado do Estudo 2 para o Estudo 3). Essas formulações serão combinadas em densidade de energia e conteúdo de micronutrientes com alimentos suplementares prontos para uso (RUSFs) usados ​​para MAM em Bangladesh e outros países, e atenderão a todos os outros requisitos locais para alimentos complementares/suplementares para crianças de 12 a 18 meses crianças com MAM e déficit de crescimento. O Laboratório de Processamento de Alimentos icddr,b também produzirá o atual padrão de cuidado RUSF de lentilha de arroz usado para o tratamento dessas crianças para uso nos estudos 1 e 3.

Desenvolvimento do produto

1. Identificação de ingredientes alimentares: Ingredientes alimentares disponíveis localmente, incluindo aqueles identificados nos estudos pré-clínicos de oscilação da dieta (por exemplo, grão de bico, farinha de soja, amendoim, banana crua, óleo de soja, açúcar e com e sem leite em pó) serão utilizados para fabricar protótipos de MDCFs.

   Os MDCFs serão enriquecidos com uma pré-mistura de vitaminas e minerais para atender aos requisitos de micronutrientes para alimentos suplementares em Bangladesh (veja abaixo).

2. Experimentos no desenvolvimento de receitas: A formulação teórica dos componentes do MDCF será feita com base em programação linear para identificar as combinações de ingredientes que resultariam nas receitas mais nutritivas. A densidade de energia do MDCF é de aproximadamente 5 kcal/g, e a distribuição calórica é de 45 a 50 por cento de gordura e 8 a 12 por cento de proteína. Com base na opinião de especialistas e consenso dentro da equipe de pesquisa, o conteúdo de micronutrientes deve ser definido para cobrir 70 por cento dos requisitos de crianças não SAM de 12 a 18 meses. Experimentos para desenvolver receitas e preparação de amostras serão realizados no Laboratório de Processamento de Alimentos do icddr,b seguindo um procedimento de produção padronizado para controlar a qualidade do MDCF de cada lote de produção e garantir que nenhuma contaminação inesperada e perda de nutrientes ocorra durante o processamento. Todos os ingredientes serão limpos e classificados. Receitas potenciais devem ser produzidas em pequenos lotes após (cozimento/cozimento a vapor/assado conforme apropriado para cada um dos ingredientes) e misturando todos os ingredientes em um liquidificador elétrico. Quando necessário, a consistência das receitas deve ser ajustada variando a quantidade de ingredientes secos e óleo de soja. Além disso, a combinação de minerais e vitaminas deve ser ajustada caso haja sabor desagradável para adição de alta(s) dose(s) de micronutrientes. Uma pequena quantidade (1 por cento) de lecitina de soja deve ser adicionada à receita para melhorar a consistência e evitar a separação do óleo.
3. Avaliação das propriedades organolépticas das receitas: As novas receitas serão avaliadas quanto à aparência, sabor, consistência das dietas e grau de agrado geral por meio da escala Hedônica de 7 pontos. O valor mais alto, ou seja, 7, será classificado como 'gostei extremamente' e o valor mais baixo de 1 será classificado como 'desgostei mais'.
4. Estudo de questões de segurança alimentar e prazo de validade: Os investigadores avaliarão a estabilidade do produto, incluindo a qualidade microbiológica, para obter informações importantes necessárias para estabelecer a data inicial de consumo e avaliar a estabilidade do conteúdo de vitaminas e minerais e o potencial de oxidação. Testes microbiológicos padrão (contagem total de viáveis, leveduras, bolores, coliformes, Escherichia coli, Bacillus cereus, Staphylococci, Listeria monocytogenes, Cronobacter sakazaki) serão realizados no Laboratório de Segurança Alimentar do icddr,b.
5. Finalização de 5 MDCFs protótipos para os ensaios clínicos pré-POC: Com base em todos os critérios mencionados acima, nossa equipe de pesquisadores selecionará 5 MDCFs para ensaios de aceitabilidade. os investigadores também estimarão o custo/kg dos ingredientes dos MDCFs candidatos.

Treinamento da equipe de campo O treinamento será fornecido a todos os membros da equipe de campo sobre diferentes procedimentos relacionados à coleta de amostras de fezes. A formação será facilitada por um grupo central de formadores, bem como pelos investigadores do estudo.

Antropometria:

A idade da criança será verificada mediante documentação (certidão de nascimento ou carteira de vacinação, se houver) ou relatório do responsável sobre a data de nascimento da criança. O comprimento será medido por um infantômetro sensível a 0,1 cm (SECA, modelo no. 4161721009, Hamburgo, Alemanha). O peso corporal será medido por uma balança sensível a 2 g (SECA 7281321009, Hamburgo, Alemanha). Os escores Z de comprimento para idade (LAZ), peso para comprimento (WLZ) e peso para idade (WAZ) serão calculados de acordo com os padrões de crescimento da OMS 11 do Multicentre Growth Reference Study (MGRS). O edema será examinado pressionando a parte superior de ambos os pés por 3 segundos. A circunferência do braço médio (MUAC) será medida usando fita TALC MUAC (Reino Unido). Padronização dos equipamentos de medição: Será feita a padronização regular da balança de bebê, e da prancha comprimento/comprimento com peso e comprimento conhecidos.

Análises de amostras de plasma e fezes

As amostras de plasma coletadas neste estudo exploratório pré-POC serão enviadas ao laboratório de Jeffrey Gordon localizado no Centro de Ciências do Genoma e Biologia de Sistemas da Universidade de Washington em St. Louis. Métodos avançados baseados em espectroscopia de massa e imunoensaio serão usados ​​para obter novos conhecimentos sobre o papel da imaturidade da microbiota intestinal e os efeitos da tentativa de reparo agudo dessa imaturidade com protótipos de alimentos complementares direcionados à microbiota de chumbo (MDCF) em biomarcadores e mediadores de saúde crescimento.

Este teste inicial dos efeitos dos MDCFs na imaturidade da microbiota e nas respostas do hospedeiro à intervenção dietética fornecerá conjuntos de dados importantes que permitirão um cálculo de poder para nosso estudo planejado de prova de conceito em uma população maior. No atual pré-POC exploratório, cada criança em cada grupo de 12 a 15 participantes do estudo servirá como seu próprio controle. Comparações adicionais serão feitas dentro e entre os quatro grupos de tratamento (ou seja, aqueles que consomem o padrão RUSF de referência e uma das três formulações MDCF diferentes).

As fezes seriam coletadas semanalmente de cada participante do estudo durante o estudo de 8 semanas, incluindo as 2 semanas anteriores ao tratamento, as quatro semanas durante o tratamento e as duas semanas após o término do tratamento. Além disso, uma amostra de 2 mL de sangue seria obtida imediatamente antes de iniciar a intervenção MDCF de 4 semanas e assim que a intervenção de 4 semanas fosse concluída.

Cromatografia Líquida-Espectrometria de Massa Alvo de Ultra Desempenho (UPLC-MS) e Espectrometria de Massa-Cromatografia Gasosa (GC-MS) serão usadas para perfilar analitos de interesse específico em amostras de plasma e/ou fezes, incluindo ácidos biliares e ácidos graxos de cadeia curta (SCFAs). ); marcadores da função mitocondrial (por exemplo, β-hidroxibutirato, acilcarnitinas/acilCoAs, intermediários do ciclo TCA); aminoácidos no soro mais amostras fecais [aminoácidos de cadeia ramificada, triptofano e metabólitos de triptofano relacionados ao crescimento e estado inflamatório, incluindo aqueles produzidos pelo metabolismo bacteriano do triptofano (por exemplo, derivados do ácido indol acético)].

Além disso, os principais mediadores/biomarcadores do crescimento linear (por exemplo, hormônio do crescimento e IGF-1), utilização de energia (insulina, leptina) e biologia óssea [IL-6, osteoprotegerina, o peptídeo C-terminal do colágeno tipo I (CTX , um marcador de atividade osteoclástica/reabsorção óssea), e o propeptídeo amino-terminal do procolágeno tipo 1 (P1NP, um marcador de atividade osteoblástica/formação óssea)], e a inflamação sistêmica (CRP, AGP) serão quantificados usando ELISA/ Ensaios Luminex.

As informações coletadas serão usadas para selecionar amostras fecais humanas para transplante em animais livres de germes; esses animais, que serão alimentados com as dietas de seus doadores de microbiota humana, serão usados ​​para caracterizar ainda mais os mecanismos que ligam os protótipos de MDCF, a microbiota intestinal e a fisiologia/metabolismo do hospedeiro. Além disso, esses biomarcadores plasmáticos e fecais serão usados ​​para determinar se as características de nossos modelos pré-clínicos estão mais bem correlacionadas com as respostas em crianças; esse conhecimento ajudará a informar o projeto de protótipos de MDCF de próxima geração com eficácia superior nos resultados de crescimento.

Cálculo do tamanho da amostra:

O resultado primário deste estudo será a mudança na pontuação Microbiota-for-Age Z (ΔMAZ) após 4 semanas de intervenção. Nosso trabalho anterior5 mostrou que o MAZ médio de crianças de 18 meses com MAM foi -1,60+ 0,36 (SEM), enquanto para crianças saudáveis ​​da mesma idade, o MAZ médio foi de -0,52+0,22, com diferença entre as médias de 1,08+0,41. Usando a função power.t.test do R para um teste t pareado (ou seja, amostras de pareamento de uma criança antes e depois da intervenção), com um SD assumido de 1 e uma hipótese unilateral, 15 crianças em cada braço nos permitirá capturar uma melhora no MAZ de > 0,7 com poder de 80% e um limite de significância de 0,05. Os investigadores, portanto, antecipam ter poder suficiente para detectar com confiança uma mudança na MAZ da magnitude que distinguiu a microbiota de crianças saudáveis ​​daquela em crianças com MAM em nosso estudo anterior

Análise de dados :

A análise dos dados será feita com a mesma abordagem usada para calcular a maturidade da microbiota e a aplicação dessas ferramentas em um estudo de intervenção RUTF anterior tratando crianças com SAM em icddr,b5.

A medida de resultado primário em cada estudo é a alteração média induzida pelo tratamento no escore MAZ desde a linha de base para cada braço do estudo. As diferenças (95% CI) entre as médias dos braços de tratamento serão avaliadas usando ANOVA de uma via seguida por Tukey's HSD ou teste post hoc semelhante (quando apropriado). O protótipo MDCF com o maior tamanho de efeito médio nesses estudos pré-POC e propriedades organolépticas aceitáveis ​​será selecionado para o ensaio clínico POC subsequente para examinar os resultados clínicos em crianças com MAM pós-SAM.