Wykrywanie i występowanie wirusa brodawczaka ludzkiego (HPV) w osoczu nasienia i/lub w nasieniu u mężczyzn poddawanych leczeniu metodą IVF/ICSI.

Zakażenie wirusem brodawczaka ludzkiego (HPV) jest jedną z najbardziej rozpowszechnionych chorób przenoszonych drogą płciową, dotykającą obie płcie. Ponad 100 typów wirusa HPV może powodować infekcje skóry lub błon śluzowych i zazwyczaj są przenoszone przez kontakt skóra do skóry, stosunek pochwowy lub analny, a także seks oralny. Statystyki wskazują, że od 50 do 80 procent aktywnych seksualnie dorosłych doświadczy w ciągu swojego życia infekcji HPV narządów płciowych. Zakażenia te mają zazwyczaj charakter trwały, szczególnie u mężczyzn. Chociaż większość infekcji HPV przebiega bezobjawowo, mogą one prowadzić do brodawek narządów płciowych, dysplazji, raka, niepłodności i mogą mieć wpływ na wyniki zapłodnienia in vitro (IVF). Pomimo szeroko zakrojonych badań nad schorzeniami związanymi z HPV u kobiet, schorzeniom związanym z HPV u mężczyzn poświęcono niewiele uwagi.

Przegląd systematyczny i metaanaliza przeprowadzona w 2017 roku, obejmująca 31 badań, wykazała, że ​​częstość występowania DNA HPV w próbkach nasienia wśród mężczyzn w populacji ogólnej wynosiła 11,4%, a wśród mężczyzn z niepłodnością wzrosła do 20,4%. Nie jest jasne, czy HPV lokalizuje się w osoczu nasienia, czy we frakcjach komórkowych próbek nasienia (takich jak plemniki, komórki nabłonkowe lub leukocyty). Najnowsze dowody wykazały, że DNA HPV można znaleźć na powierzchni plemnika poprzez wiązanie się ze specyficznymi glikozaminoglikanami (GAG), takimi jak syndekan-1, wzdłuż obszaru równikowego główki plemnika. Ponadto kilka badań in vitro wykazało, że DNA HPV można znaleźć w nasieniu po zmieszaniu z wirusem HPV. Potencjalny wpływ HPV na płodność nie jest jeszcze w pełni poznany. Obecność zakażenia HPV w plemnikach wiąże się z zaburzeniami parametrów plemników, głównie ich ruchliwości i zwiększoną fragmentacją DNA plemników. Istniejące dowody sugerują negatywny wpływ DNA HPV w osoczu nasienia i/lub w plemnikach na liczbę żywych urodzeń i trwających ciąż, chociaż poziom dowodów pozostaje ograniczony. Biorąc pod uwagę, że w zapłodnieniu in vitro wykorzystuje się plemniki, istotne jest zbadanie obecności wirusa HPV w osoczu nasienia i nasieniu u tych mężczyzn, a także wszelkich potencjalnych konsekwencji dla rozwoju zarodka po zapłodnieniu in vitro.

Głównym celem tego badania jest ocena częstości występowania DNA HPV w osoczu nasienia i/lub nasieniu u mężczyzn poddawanych zabiegowi zapłodnienia in vitro (IVF) lub docytoplazmatycznej iniekcji plemnika (ICSI). Ponadto badanie ma na celu charakterystykę parametrów nasienia mężczyzn z próbkami nasienia HPV-dodatniego (HPV+) i HPV-ujemnego (HPV-) oraz analizę wyników embriologicznych po IVF/ICSI u mężczyzn z próbkami nasienia HPV+ w porównaniu z mężczyznami z nasieniem HPV-. próbki.

Drugorzędne cele obejmują ocenę parametrów nasienia, takich jak objętość, stężenie plemników i ruchliwość, aby określić, czy istnieją różnice między mężczyznami z próbkami nasienia HPV+ i HPV-. Celem badania jest także sprawdzenie, czy wynik embriologiczny (współczynnik zapłodnienia, liczba wysokiej jakości zarodków) po leczeniu IVF/ICSI różni się u mężczyzn z próbkami nasienia HPV+ i HPV-.

Analizy DNA HPV w osoczu nasienia i/lub nasieniu zostaną przeprowadzone przy użyciu metody, która wykazała najwyższą skuteczność w wykrywaniu DNA HPV, na podstawie wcześniej przeprowadzonego badania pilotażowego. Próbki nasienia są zazwyczaj dostarczane do Laboratorium Płodności na Wydziale Medycyny Rozrodu, SU, w związku z badaniami niepłodności i leczeniem IVF/ICSI. Zwykle do 2 ml próbki nasienia po wytrysku poddaje się wirowaniu w gradiencie, oddzielając ruchliwe plemniki od osocza nasienia, plemników nieruchomych, komórek nabłonka płaskonabłonkowego, leukocytów i bakterii. Część osadu zawierającą ruchliwe plemniki służy do analizy parametrów próbki, przede wszystkim stężenia i ruchliwości. Podczas zabiegów IVF/ICSI część próbki nasienia wykorzystuje się do zapłodnienia komórki jajowej, a pozostałą część odrzuca się. Po odwirowaniu w gradiencie próbki nasienia rozcieńcza się płynem konserwującym (ThinPrep®, 1:2) i przechowuje w lodówce w celu transportu do Zakładu Mikrobiologii Klinicznej (laboratorium wirusologiczne) w SU (raz w tygodniu) w celu przeprowadzenia reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR). analiza. ThinPrep® jest rutynowo stosowany do konserwacji i utrwalania próbek komórek do analizy HPV u kobiet. W tym badaniu część próbki nasienia zwykle odrzucana i nieużywana do leczenia IVF zostanie wykorzystana do analizy DNA HPV metodą PCR. PCR jest metodą rutynowo stosowaną w Zakładzie Mikrobiologii Klinicznej (laboratorium wirusologiczne) SU do wykrywania DNA HPV w próbkach komórek szyjki macicy. Wyniki tych analiz zostaną skorelowane z parametrami próbki i wynikami embriologicznymi po zakończeniu leczenia IVF/ICSI. Po analizie metodą PCR i po udostępnieniu materiału próbki będą przechowywane przez 5 lat w Biobank Väst w celu potencjalnych przyszłych analiz biomarkerów związanych z HPV.