维生素 D 和钙对儿童 HIV 骨骼的影响

A.1.a. 简介 这是一项前瞻性、随机、双盲临床试验，旨在评估 24 个月补充维生素 D3 和钙对感染 HIV 的儿童和青少年骨量增加的影响。

A.1.b.受试者招募 i.联合研究人员将从在参与地点接受治疗且符合纳入和排除标准的感染 HIV 的儿童和青少年中招募 HIV 感染的受试者。

A.1.c.测量：

用于测量血清 25(OH)D 水平的血液将由参与的临床站点从所有感染 HIV 的儿童和青少年获得。 在横断面研究访问之前，将对样本进行分析并获知结果。 血清 25(OH)D 水平将用于选择参与者。 将采取以下措施：

病史，包括用药 有生育能力的女性妊娠试验 身高和体重 青春期评估 膳食摄入钙和维生素 D 评估 体力活动评估 全身骨矿物质含量（TBBMC）、全身骨矿物质密度（ TBBBMD）、脊柱 BMC 和 BMD，以及骨龄射线照片 清晨空腹抽血，用于矿物质代谢指标：血清钙、磷酸盐、白蛋白、总碱性磷酸酶活性、25(OH)D、1,25(OH)2D、iPTH、尿钙和肌酐。

骨转换标志物：血清 N-端肽（N-tx，再吸收标志物）、骨特异性碱性磷酸酶 (BALP) 和骨钙素（形成标志物） 这些测量将在 SLRHC 儿科身体成分单元进行。

A.2.a.学习规划：

双盲、随机试验将比较补充维生素 D3 和钙与安慰剂 24 个月对骨矿物质增加的影响。 60 名 8-16 岁的感染 HIV 的儿童和青少年将被随机分配接受维生素 D3 加钙或安慰剂。 主要结果变量 BMC 和 BMD 将在随机化之前、1 年和 2 年后进行测量。 血清 25(OH)D、1,25(OH)2D、PTH、骨转换标志物的连续测量将在研究之前和研究期间的规定时间间隔进行评估。

A.2.b.治疗臂：

符合条件的受试者将被随机分配接受：

1. 维生素 D3（100,000 IU 或 2.5 毫克）每 60 天口服一次，元素钙 500 毫克，每天两次；或者

2. 维生素 D3 安慰剂每 60 天口服一次，钙安慰剂每天两次。

   A.2.c. 进入和随机访问：

   所有符合条件的受试者将因参与横断面研究（第 D.2.f 节）而在 SLRHC 儿科身体成分单元进行初始研究进入评估。 由于合格的血清 25(OH)D 水平将在横断面研究访问之前已知，因此可以在横断面研究访问期间将符合随机临床试验条件的研究参与者随机分配（见方法）到两个治疗臂；在这种情况下，横断面访视也将起到进入/基线访视的作用。 每个受试者将获得第一剂维生素 D3/安慰剂，并将分配前 30 天的钙/安慰剂供应。 生育能力女性

   A.2.d.后续访问：

   参与者将在研究的第一年每月一次，第二年每两个月一次。 进入/基线、12 个月和 24 个月的访问将在 SLRHC 身体成分单元进行。 所有其他访问将在接受常规护理的地点进行。 维生素 D3/安慰剂将在每 2 个月的研究访问期间给药。 在第一年的每月访问和随机化后第二年的每两个月访问时，将分配 30 或 60 天的钙/安慰剂供应。 将在每次就诊时评估对补钙的依从性。

   A.2.e. 12 和 24 个月的研究访问：

   这些访问将在 SLRHC 身体成分单元进行。 每次访问时，将执行以下测试：

   病史，包括药物 有生育能力女性的妊娠试验 身高和体重 青春期评估 钙和维生素 D 的膳食摄入量评估 体力活动评估 TBBMC、TBBBMD、脊柱 BMC 和 BMD 的测定 骨龄射线照相

   A.3.方法

   A.3.a.随机化：

   将通过计算机生成的随机数（SAS 版本 8.2 for Windows，SAS Institute，Cary，NC）将感染 HIV 的儿童随机分配到治疗组。 随机化将按性别和年龄（例如 > 或 < 14 岁）分层，以确保治疗组在这些变量方面保持平衡。 块随机化将用于确保每组中的受试者数量随着时间的推移保持大致相似。 随机化序列将由研究生物统计学家生成，并传达给研究药剂师，他们将在受试者登记时分配活性药物或安慰剂药物。

   A.3.b.坚持：

   将在每次就诊时通过药丸计数和使用泡罩包装来评估对钙/安慰剂的依从性。 在规定的研究访问期间，将通过监督管理确保坚持服用维生素 D/安慰剂。

   A.3.c. 儿童和青少年骨矿物质状况的测量：

   HIV 感染者的骨矿物质状态将通过全身和腰椎 DXA 扫描确定。 这些将在 SLRHC 儿科身体成分单元使用 Hologic Delphi-A 扫描仪进行。

   通过 DXA 测量的以克为单位的骨矿物质含量与全身钙含量密切相关 (Ellis 1996)。 迄今为止，该实验室已使用 DXA 为 50 多个研究项目和临床试验的 13,000 多名受试者提供了骨矿物质和身体成分数据。

   在我们的实验室中，人类受试者的骨矿物质密度的变异系数为 0.8%。 全息德尔福

   A.4.d. 骨龄评估：

   骨骼年龄将通过左手腕的标准化骨龄射线照片确定，该照片将在 DXA 扫描的同一天在 SL 现场放射科进行。 使用来自 Greulich 和 Pyle Atlas 的手和手腕平片的骨龄性别特异性标准将用作标准参考（Greulich 和 Pyle 1959）。 一位对受试者的年龄和治疗状况不知情的儿科放射科医生将阅读所有骨龄射线照片。

   不会对进入时发现已达到骨骼成熟（即 骨骺融合）。

   成熟对骨矿物质的积累有深远的影响。 在青春期体征出现之前，唯一可用的评估相对成熟度或“生理年龄”的方法是通过标准化 X 射线测量骨骼或“骨龄”。 骨龄仍然有用，即使在出现青春期体征之后，因为随着青春期骨成熟的进展速度因人而异。 它在患有慢性病的儿童中尤其多变，他们的一般健康状况和生长速度以及青春期进展可能会随着治疗或疾病活动的变化而“赶上”或“赶上”。 对于患有慢性疾病的儿童，骨龄可能是比实足年龄、体型或青春期阶段更好的成熟状态指标。 因此，骨龄是该协议中的一个重要协变量。

   A.3.e. 青春期状态评估：

   由研究调查员 (Drs. Stephen Arpadi 和 Mary Horlick）在向受试者和家庭成员解释了确定性成熟水平的程序和原理之后。 这些将在使用 Tanner 的方法（Tanner 1970，Tanner 1971）对 SLRHC 儿科身体成分单元进行研究访问期间进行。 不会对在进入时确定已经历性成熟（即性成熟）的受试者进行重复评估。 坦纳阶段 5)。

   由于青春期的时间和速度通常存在很大差异，因此将对研究参与者的青春期状态进行标准化系列评估，以帮助区分青春期的影响和研究治疗的影响、年龄、身高和体重增加对骨矿物质累积的影响. 对患有慢性疾病（例如 HIV 感染）的儿童进行的性成熟延迟常见的研究中，该变量的测量可能具有重要意义（de Martino 2001）。

   青春期时 DXA 引起的骨矿物质量变化及其伴随的生长突增已在男性和女性中得到报道（Glastre 1990，Gilsanz 1991，Rico 1993，Mora 1999）。 然而，DXA 制造商制定的参考标准和最近的纵向研究仅针对年龄和性别（Bachrach 1999）。 仅基于年龄或青春期的参考标准无助于评估患有疾病的患者，例如 HIV 感染，它会影响生长、青春期时间，并可能独立影响骨矿物质的获取（Leonard 1999，Thearle 2000，Arpadi 2002）。

   A.3.f. 青春期状态评估程序：

   该项目中的青春期评估将完全遵循 BMDCS 项目的协议。 青春期阶段对骨矿物质积累的影响将在入组研究访问时向所有参与者解释，以便他们和他们的家人了解青春期状态体检的目的。 儿科内分泌学家 (MH) 将按照为多中心 BMDCS 项目制定的协议评估青春期阶段。 对于女孩，乳房发育将通过视觉标准进行评估，但也会通过青春期早期的触诊来评估（Marshall 和 Tanner 1971 年，Biro 1992 年）。 对于男孩，睾丸大小将使用 Prader 睾丸计的卵圆形进行评估（Zachman 1974，Biro 1995）。 对于男孩和女孩，阴毛发育将通过 Tanner 标准进行评估 (Marshall and Tanner 1970, 1971)。

   A.3.g. 测量身高和体重的步骤：

   将使用壁挂式测距仪（Holtain，Crosswell，Wales）测量站立高度，精确到 0.1cm。 在指定的每个时间点将获得三个独立的测量值，并对结果进行平均。 体重将由穿着医院长袍的受试者获得，并测量到最接近的 0.1 公斤（Weight Tronix，纽约，纽约州）。

   A.3.h. 影响骨矿物质积累的可改变行为因素的评估：

   我们将使用食物频率问卷 (FFQ) 来收集饮食数据，以估计本研究的营养摄入量。 关于膳食摄入量的标准化信息的可用性也将允许调查 HIV 感染儿童在生长过程中食物/营养素摄入量与骨骼增生之间的关系。

   将使用 Slemenda 等人 (1991) 发表的自我报告工具来确定负重身体活动。 尽管多项研究支持儿童身体活动自我报告措施的有效性，但只有 Slemenda 的研究报告了儿童负重身体活动自我报告的使用（Sallis 1993，Slemenda 1991）。

   A.3.i. 膳食摄入量和体力活动问卷的程序：

   按照为多中心 BMDCS 项目建立的协议，受试者将完成 FFQ（如果他们未满 14 岁，则在其父母或监护人的帮助下）。 问卷大约需要 20 分钟，将在访问时完成。 每个 FFQ 将包含一张包含各种份量的图片。 受试者被要求指出哪张图片最符合他们的份量。 受试者将被提醒指出他们通常吃了多少——而不是提供了多少。

   将对所有参与者进行问卷调查，要求他们回忆过去一周内他们参与多项体育活动的小时数。 调查员将提示参与者尽可能准确地回忆他们的活动。 孩子可能会请父母帮忙。 完成问卷大约需要十分钟。

   FFQ，BLOCKIDS（NutritionQuest，伯克利大学，加利福尼亚州伯克利），由 NHANES III 确定的对该年龄和人口群体重要的食物组成。 与该项目相关的测量包括维生素 D 和钙的膳食摄入量。 FFQ 已在 8-10 岁的非裔美国儿童（Block 2000）中验证了一些常量和微量营养素（例如 钙的相关性 = 0.64）。 作为 BMDHC 项目的一部分，计划进行额外的验证研究。

   A.3..j. 生化分析程序：

   一般实验室测试将在研究地点的临床化学实验室进行，包括 CBC、淋巴细胞亚群（CD4、CD8）、HIV 病毒载量、肾和肝功能测试。 用于特殊生物化学（PTH、维生素 D 代谢物、OC、BSAP、NTx）的血清在收集后立即被等分、冷冻，并转移到 SLRHC，在那里它们将在 -70 度下储存。 冷冻样本将在哥伦比亚大学欧文临床研究中心的核心实验室进行分析。 来自个体受试者的所有样本将在同一测定中分批分析，以减少测定间变异性。 所有计划的化验目前都在核心实验室进行。

   血清：用于完整 PTH、维生素 D 代谢物和骨钙素的试剂盒将从 Corning-Nichols Laboratory (San Juan Capistrano, CA) 购买。

   甲状旁腺激素：目前正在通过化学发光方法测量 PTH，该方法现在已知可检测 PTH 的 7-84 片段以及该分子的完整形式 (1-84) (72)。 批内和批间变异性分别为 3.4% 和 5.6%。 该测定的正常成人范围是 10-65 pg/ml。

   维生素 D 代谢物：提取血清样品后，25OHD 将在放射性结合测定中测量。 批内和批间变异性分别为 7.5% 和 9.6%。 正常范围是 9-52 纳克/毫升。 将在放射受体测定中测定血清 1,25(OH)2D。 正常的成人范围是 15-60 pg/ml。 批内和批间变异性分别为 7.6% 和 9.8%。

   骨钙素：骨钙素是根据 Gundberg 等人的方法通过 RIA 测量的。 批内和批间变异性分别为 4.3% 和 5.7%。 成年男性的正常范围为 3.4-11.7 ng/ml，2.4-10.0 ng/ml 用于成年绝经前妇女。

   骨特异性碱性磷酸酶 (BSAP)：BSAP 是通过固相双位点免疫放射测定法测定的，该测定法专门测定血清中碱性磷酸酶的骨骼同工酶。 试剂盒购自 Hybritech Incorporated (San Diego, CA)。 批内和批间变异性分别为 4.2% 和 7.2%。 成年女性的正常范围为 8.0 - 16.6 ng/ml，成年男性为 7.2 - 15.8 ng/ml。

   血清 N-端肽 (Osteomark, Ostex, Seattle, WA) 使用竞争抑制酶联免疫吸附测定法测量，该测定法利用微孔作为 NTx 吸附到其上的固相。 测定值以每升纳摩尔骨胶原当量 (BCE) 为单位报告。 成年女性的正常范围为 6.2 - 19.0，成年男性为 5.4 至 24.2。 批内和批间变异性分别为 4.6% 和 6.9%。

   A.3.l. HIV 疾病的免疫学和病毒学措施：

   作为患者护理的一部分，受试者的 CD-4 + 淋巴细胞数和 CD4% 值将从临床现场实验室进行的结果中获得。 定量病毒载量测定 - 通过聚合酶链反应方法测定的 HIV RNA 作为临床护理的一部分在合作临床站点进行，将收集用于本研究。

   A.3.米。 安全监测和毒性管理程序：

   在每次 SLRHC 访问时以及在进行任何放射学研究之前，将对所有有生育能力的女性进行尿液妊娠试验。 在尿检和 DEXA 扫描之前，将询问所有有生育能力的女性是否怀孕。

   监测高钙血症、高钙尿症和低钙血症：为了保持受试者治疗分配的盲法，实验室报告将由位于纽约长老会医院的共同研究者 Shane 博士审查，该医院在物理上与任何临床研究设施。 这也是 GCRC 进行专门实验室化验的地点。

   在研究的第一年每月监测一次血清钙和白蛋白以及清晨空腹尿，第二年每两个月监测一次。 这些化验将通过 Quest Diagnostics Laboratory 作为方便样本进行（即在收集时运行）。

   研究者认为与研究药物相关的临床或实验室异常将按如下方式处理：

   如果出现高钙血症（>10.5 mg/dl，白蛋白校正），钙的剂量将减少 250 mg/天，并在一周后重新检查水平。 如果异常没有解决，每周逐步减少口服钙，直到达到正常水平或停止补充钙。 维生素 D3 或安慰剂将被停用，直到血清钙恢复正常。

   具有持续异常的受试者将被转介给治疗医师。 维生素 D3 或安慰剂将被停用，直到血清钙恢复正常。

   如果出现严重的高钙血症 (>12.0 mg/dl)，所有钙补充剂和维生素 D/安慰剂将立即停止，受试者将从研究中退出。

   高钙血症如果出现高钙尿症（现场尿样尿钙/肌酐比值>0.25），将对受试者进行 24 小时尿液收集以进行确认。 对于确诊的高钙尿症（>4mg/kg/24 小时），钙的剂量将减少 250mg，并在一周后重复点尿。 如果异常没有解决，每周逐步减少钙，直到高钙血症解决或停止补充钙。 如有必要，将停用维生素 D3 或安慰剂，直至尿钙恢复正常。

   如果出现低钙血症（< 8.4 mg/dl，针对白蛋白校正），将抽血检测血尿素氮、血清电解质、肌酐、25-OHD、PTH、肌酐、镁和白蛋白。

   确认与维生素 D 缺乏症相关的低钙血症（25-OHD<10 ng/dl 和 PTH >73 的受试者将退出研究并转诊给他们的医疗提供者进行治疗并退出研究

   监测维生素 D 缺乏症

   在研究的第一年，将每月抽取血清以测量 25-OH 和 iPTH，并在第二个研究年期间每 2 个月抽取一次。 每个受试者的标本在采集后将立即冷冻，并转移到 SLRHC，在-70 度下保存。 每隔一年，将以“分批”方式对每个受试者的样本进行化验。 在这些年度测定的基础上，持续整个冬季和夏季几个月的持续性维生素 D 缺乏症（25-OHD<10ng/l 和 PTH>73）的受试者将从研究中退出并转诊给他们的医疗提供者。

   我们预计这些特殊异常的发生率很低。 在之前的一项研究中，Guillemant 等人每 60 天服用相同剂量的维生素 D3（100,000 IU），持续 6 个月。 13-16 岁的法国青春期男性没有季节性维生素 D 缺乏症的报道（Guillemant 2000）。 此外，在 Shane 博士正在进行的一项研究中（心脏移植后骨质疏松症的预防，ROI AR 46124-04），在接受代谢活性形式维生素 D 骨化三醇（0.25 微克 BID）的 74 名受试者中，有只有 4 次尿钙排泄 > 400 mg/g 肌酐。 除了服用骨化三醇外，这些受试者还接受皮质类固醇，这也会增加尿钙的排泄。 在本研究中，皮质类固醇不是允许的联合给药药物。

   我们预计维生素 D3 不会对 HIV 感染或抗逆转录病毒药物产生不利影响。 然而，根据 CD4 计数或 CD4%，或治疗医师认为可能与研究药物有关的 HIV 病毒载量测量值增加，HIV 感染的受试者会出现无法解释的免疫状态下降，并将退出研究参与。 CD4 计数、CD% 和 HIV 病毒载量的测量将根据护理标准在临床护理站点进行测量。 结果将由主治医师监测。

   在一年的治疗 DXA 中，TBBMC z 分数从基线下降 >0.5 的受试者将停止研究，并转诊由治疗医师进行额外的临床评估。 此外，如果发生低冲击或反复骨折，治疗医师、安全官员和研究 PI 的临床评估将决定受试者是否应继续研究。监测研究受试者的 DXA 扫描结果将由 Horlick 博士执行，他是一名St. Luke's-Roosevelt 儿科身体成分实验室的联合研究员和主任。

   最后，因为这是一项涉及儿童的安慰剂对照试验，我们选择包括对 12 个月的治疗数据进行的中期数据分析（人类受试者，E.部分）。 将根据 NIH 指南建立一个由生物统计学、儿科 HIV 疾病、儿科内分泌学和儿科骨获取方面的专家组成的数据安全和监测委员会，以监测研究结果的安全性和有效性，并通过协商制定提前终止研究的标准与主要研究人员和合作研究人员一起，并确定是否以及何时满足这些标准。

   A.3.n 数据分析和功效计算 具体目标 1：确定补充钙和维生素 D3 对接受 HAART 的 HIV 感染儿童和青少年骨矿物质增加的影响。

   本研究的主要假设是，与接受安慰剂的受试者相比，随机接受维生素 D3 加钙的 HIV 感染受试者的 BMC 和 BMD 会增加。 我们将通过比较 TBBMC、TBBMD、SBMC 和 SBMD 来检验这一假设，这些测量是在基线时以及在 2 个研究组中随机化后 1 年和 2 年进行的全身和脊柱 DXA 扫描测量的，使用意向治疗分析。

   协方差的重复测量分析将用于分析骨应计数据。 将在 1 年和 2 年时比较治疗组和安慰剂组之间骨矿物质含量的差异，同时控制进入试验时各组之间的任何可能差异。 组间主效应（维生素 D3 和钙与安慰剂相比）将检验各组之间是否存在总体差异，而组内 x 时间交互效应将检验各组之间的差异是否在后续两组中保持不变年。 维生素 D3 和钙组的变化幅度也将与 BMDCS 的规范数据进行比较，以确定每组中有多少儿童达到正常范围内的水平 (95% CI)，使用初步研究第 C.5 节中提供的算法.

   根据我们之前的试点数据，30 名 7-14 岁的 HIV 感染儿童的 TBBMC 平均每年变化为 120 g，标准差为 84。 注意到男孩和女孩之间的 SD 差异。 为了保持保守估计，我们选择了在女孩中观察到的 SD。 这可以假定为将在安慰剂组中观察到的年度变化水平。 根据儿科罗塞塔项目 (NIDDK 37352) 的数据，这是一项对 1300 多名儿童进行的横断面研究，7-14 岁健康的非裔美国人和西班牙裔儿童的 TBBMC 平均每年变化为 195 克。

   因此，比较安慰剂组 120 g 的平均年变化与维生素 D3 和钙组 195 g 的变化的效应量 (d) 为 0.89。 每组 21 名儿童将足以检测到具有 alpha = 0.05 和 beta = 80% 的这种大小的影响大小。 如果样本量增加到每组 30 名儿童，则功效将足以检测维生素 D3 和钙组与安慰剂组之间 61 gm 的差异，α = 0.05，功效 = 80%。 这与接受钙（RDA 的 110%）或安慰剂的健康少女（平均年龄 11.9 岁）的临床试验中观察到的差异相当（Lloyd 1996）。

   研究期间治疗组之间性成熟率的差异可能会在对骨量结果具有重要意义的因素方面“失衡”。 为了解决这个问题，我们包括了一个标准化的测量青春期阶段，用作分析中的协变量。

   具体目标 2：确定 HIV 感染和维生素 D 和钙补充剂对矿物质代谢指标和骨转换标志物的影响。

   我们假设矿物质代谢指标异常（低血清 25（OH）D 和升高的 PTH）和骨形成和骨吸收的生化标志物在接受 HAART 治疗的 HIV 感染儿童中与正常对照相比增加，并且矿物质代谢指标和标志物在随机接受维生素 D 和钙补充剂的感染 HIV 的儿童和青少年中，骨形成和吸收的速度将恢复正常。 我们将首先通过比较参与横断面研究的 HIV 感染和健康儿童和青少年的骨转换标志物（骨钙素、BALP 和 N-Tx）来检验这一假设，使用独立样本 t 检验来比较均值。

   接受维生素 D 和钙补充剂的 HIV 感染儿童和青少年的骨转换标志物的纵向变化也将与接受安慰剂的儿童和青少年进行比较。 维生素 D 代谢物的水平和骨转换标志物（（骨钙素、BALP 和 N-Tx）将使用混合模型回归分析，以模拟这些措施随时间推移的趋势，以评估这些变量之间的相关相互关系。

   具体目标 3：评估接受 HAART 的感染 HIV 的儿童和青少年的维生素 D 储存量。

   我们假设与健康对照相比，感染 HIV 的儿童体内维生素 D 的储存量有所减少。

   我们将通过比较接受 HAART 的 HIV 感染儿童和青少年与健康对照组相比的维生素 D 代谢物血清水平和矿物质代谢指数（25(OH)D 1,25(OH)2D) 和 PTH）来测试这一点。 测试数据将从横断面研究中获得。 HIV 感染组将包括经过筛选以招募到研究中的 HIV+ 儿童样本，而健康组将包括从同一社区招募的年龄相仿的儿童（包括 HIV 阳性儿童的健康兄弟姐妹）。 将使用独立样本 t 检验将 HIV 阳性儿童血清维生素 D 代谢物和 PTH 的筛查水平与健康儿童的水平进行比较。

   感兴趣的主要变量是 25(OH)D，因为它最能反映维生素 D 的储存量。 根据之前的试点数据，HIV 感染者的平均 (SD) 预期 25(OH) 为 21 (11) ng/ml。 本研究中的样本量具有 80% 的功效来检测 25(OH) D 的变化为 8 ng/ml，alpha = 0.05。 然后将使用基于一般线性回归模型的协方差分析来确定在控制其他因素（例如种族、性别、估计的维生素 D 饮食摄入量和阳光照射）后是否仍然存在任何可能的群体差异（使用研究月份作为替代因素）阳光照射）。

   具体目标 4：评估维生素 D 储存是否是接受 HAART 的 HIV 感染儿童和青少年骨量的决定因素。

   我们的假设是，在接受 HAART 的感染 HIV 的儿童和青少年中，通过血清 25(OH)D 测量的维生素 D 储存量是骨量的重要决定因素。

   我们将评估这些变量与感染 HIV 的儿童和青少年的 TBBMC 之间的关系。 这将通过分析从至少 60 名感染 HIV 的儿童和青少年样本中获得的数据来进行，这些儿童和青少年正在接受纵向临床试验的筛选。 在 HIV 阳性组中，将使用线性回归来确定 HIV 相关因素，包括抗病毒药物、免疫缺陷标志物 (CD4count)、HIV 病毒载量和细胞因子水平是否在预测血清维生素 D 水平和骨量方面发挥作用。 模型中将包含的其他协变量包括年龄、性别、种族、身高、体重和青春期阶段。

   这些分析对于包含在该临床试验和分析中是特别关键的测量，因为这些将允许为异常骨量的病因学和参与改善的中间响应变量开发潜在的机制途径。

   我们将使用多元回归模型评估 TNF、IL-6 维生素 D 水平和 TBBMC 之间的关系。 据估计，接受筛查的 HIV 阳性儿童中有 50% 将符合试验的纳入标准，大约 100 至 120 名 HIV 阳性儿童将可用于横断面比较，因此也将有同等数量的健康儿童招募。 总共有 200 名儿童，样本量足够大，除了分组因素（HIV 阳性与健康）外，还可以添加多达 18 个协变量，并测试 R2 增加 5%，其中 alpha = 0.05，功效 = 80%。 仅 100 名 HIV 阳性儿童的样本将允许进行回归分析，其中包括多达 9 个预测因子，这些预测因子共同解释了结果变量（TBBMC 等）至少 15% 的方差，其中 alpha = 0.05，功效 = 80 % .