NUTRIPROTECT-儿童营养作为保护或健康风险因素 (My-Milk-2)

营养在一系列非传染性疾病的发展中既可以作为风险因素，也可以作为保护因素。 虽然这种影响是针对整个生命周期确定的，但生命早期的营养可能与其对生命后期健康的长期影响尤为相关。 有关代表性样本人群膳食摄入量和营养状况的可靠科学数据可作为阐明特定营养因素对人类健康的作用的基础。 拟议的应用研究项目的科学背景是基于这样一个事实，即在较长时期内，研究早期营养、初始肠道微生物群和儿童发育之间的联系是有限的。 因此，解决的关键科学挑战集中在早期生命营养对参与儿童的生长和健康的影响，并调查各种健康指标之间的关系。

虽然这项多学科应用前瞻性研究的工作计划将侧重于儿童，但它应与以前的“My-Milk”项目（SRA J43606；2013 年完成）紧密联系，早期营养在儿童发育中的作用对母乳喂养的儿童及其出生后第一年的肠道菌群进行了调查。 这项研究将在第一个“My-Milk”研究中包含的 6-7 岁人群中进行。 该研究将描述参与者早年生活中的关键调节因素（通过母体变量（孕前 BMI、孕期体重增加、孕期和哺乳期营养、母乳脂肪酸组成和血清维生素 D 浓度）和婴儿变量定义（母乳喂养和抗生素治疗的持续时间、第一个月的粪便微生物群、新生儿期的人体测量学和骨矿物质密度））对参与者在 6-7 岁时的营养状况的影响。 当前的营养状况将由参与者的饮食摄入量、人体测量学、身体成分 - 骨密度、脂肪和肌肉组织的百分比）、健康状况（血压、血液胆固醇、感染的频率和严重程度）和粪便微生物群来定义。

受邀参与的研究人群将包括母亲的所有单身儿童，这些儿童在孩子一岁时完成了 My-Milk 研究的详细部分 (N=147)。 考虑到 My-Milk 研究的第一个详细部分的退出率非常低（185 名参与的母亲中有 33 名，大约 18%），调查人员预计至少 70-75% 的受邀参与者会做出回应，这意味着介于100 - 110 名儿童可能会参加该研究。 这一人口占 2011 年出生儿童的 0.5%（21947 名儿童——斯洛文尼亚的统计数据）。

将测量和评估以下参数： 使用欧洲食品安全局指南 (EFSA) 中提供的针对儿童和成人/老年人口的标准膳食评估方法来评估儿童的营养。 即，食物消费调查将通过重复的 24 小时食物日记和计算机辅助个人/电话访问方法 (CAPI/CATI) 以及根据 PANCAKE 支持的一般问卷和食物倾向问卷 (FPQ) 在个人层面进行。 - 评估欧洲儿童营养摄入和食物消耗的试点研究。 24 小时结构化饮食回忆访谈是一种用于营养评估的定量研究方法。 训练有素的营养师调查员将要求父母或看护人回忆参与儿童在研究期间的两个不同时间点在过去 24 小时内食用的所有食物和饮料（两次记录之间至少有 8 - 20 天的非连续天数）获得有关食物习惯摄入的正确信息。 根据 24 小时召回调查获得的数据，研究人员打算评估人口亚组的营养摄入量。 此外，还将研究儿童营养与身体成分和健康指标之间的联系。 FPQ 将能够估计某些相关的、不经常食用的食物组。 将使用计算机辅助数据收集方法和处理，使用经过验证的问卷收集数据。 饮食摄入数据的评估将由 Jožef Stefan Institute (IJS) 的饮食软件临床营养开放平台 (OPEN) 进行。 OPEN 是一个基于 Web 的饮食评估和治疗应用程序，并升级为支持 24 小时召回/食物日记方法和 FPQ，符合 EFSA 泛欧食品消费调查（也称为欧盟菜单）方法。 OPEN 是斯洛文尼亚第一个基于网络的高效工具，用于根据当地食品进行饮食评估。 OPEN 允许营养师输入每个参与者的食物和数量。 在将食品、数量和准备工作输入 OPEN 后，程序会创建一个包含营养信息细分的分析。

对 6-7 岁参与者的生长、发育和健康状况的评估将基于进行的临床检查和从病历中获得的数据。 临床检查将包括临床状态评估、人体测量、骨矿物质密度的定量超声测量和血压测量。

临床检查将在大学儿童医院进行，由儿科专科医生和研究生物学家进行。 它将包括临床状态评估、人体测量和骨矿物质密度的定量超声测量。 将使用 (QUS) Sunlight Omnisense（Sunlight Medical Ltd, Tel Aviv, Israel）测量右胫骨的骨矿物质密度，该方法简单、无痛且无辐射，并提供有关骨密度和微结构的信息。 QUS 测量超声波信号在探头内包含的两个发射器和两个接收器之间传播所花费的时间。 专有算法使用这些传播时间来确定骨骼声速 (SOS)，以米每秒 (m/s) 表示。 该软件将使用三个最一致的测量值来计算结果。 结果将作为 SOS 和 Z 分数（相对于年龄和性别匹配的人口参考值平均值的标准偏差单位）。 与儿童不同，在成人中，测量是在半径上进行的。 对于人体测量：身高 [cm] 和体重 [kg] 将使用经认证的医疗秤赤脚和穿着最少的衣服进行测量。 高度测量的精度为 0.1 厘米，质量测量的精度为 0.1 千克。 六个标准位置的皮褶厚度 [mm] 将根据标准化方法通过经过校准的认证皮褶卡尺（Harpenden，England）测量，精度为 0.1 mm。 周长 [cm] 将在躯干或身体右侧用不可拉伸的窄卷尺（玻璃纤维卷尺，中国）测量一次，精度为 0.1 厘米。 身体成分的估计将与获得的营养数据相关联。

有关当前健康状况（包括血液胆固醇）和儿童发育的其他信息将从医疗文件中获得。 为此，调查人员将要求儿科医生访问参与者的医疗记录。 应分析有关正常身体发育最终中断的数据（加速生长、生长减慢、低体重和超重或肥胖的 BMI），以及是否存在过敏和新出现的慢性疾病。 重点还将放在感染、药物摄入（抗生素治疗）和慢性病上。

儿童粪便微生物群的研究将基于分子方法，例如使用 Illumina 对核糖体核糖核酸 (rRNA) 基因扩增子的 16 沉降系数 (16S) 亚基进行定量实时 PCR (qPCR) 和下一代测序 (NGS) 测序技术。 将在临床检查时收集一个表面上健康的儿童的单个粪便样本。 之前，父母将获得编码的无菌采样容器，盖子上附有勺子，并通过邮寄和电子邮件提供采样说明。 他们将被要求收集大约 2 克（2 勺）参与儿童的粪便，可能是在计划访问儿科诊所的那天或前一天。 样品将一直冷藏/冷藏直至就诊，并在医务人员到达诊所后立即冷冻在 -20 摄氏度。 收集后一个月内，-20 ˚C 冷冻粪便样本将被转移到实验室并储存在 -80 ˚C 下，直到进行微生物分析。 QPCR和16S rRNA扩增子测序方法，同样应用于My-Milk项目第一部分，适用于总细菌群落和粪便微生物群组成的生物多样性评估，以及特定细菌数量波动的评估胃肠道等复杂微生物生态系统中的目标群体。

将研究 6-7 岁参与者的营养数据，包括身体成分（骨密度、脂肪百分比和肌肉组织）、健康指标（血压、血胆固醇）和粪便微生物群。 在对测序读数进行质量控制后，将获得粪便微生物组生物多样性和细菌类群的相对丰度，并计算生物多样性指标，如 Chao1 分数和香农多样性指数。

之后，所有数据将与在 My-Milk 研究的第一部分中已经获得的数据一起存储在中央数据库中。 将应用适当的统计分析来调查早期生活暴露对当前 6-7 岁参与者后期生长、营养状况、健康和粪便微生物群的影响。 中央数据库将允许 (a) 对已收集的信息进行受保护的访问； (b) 添加新属性和 (c) 为统计分析目的导出数据。 数据库将不包含任何个人身份信息（受试者将仅通过身份号码进行编码）。 从 My-Milk 研究中收集的大部分数据已经转换为电子形式。 统计方法将包括两个步骤： 第一个探索步骤，包括数据检查、图形显示和通过多元统计方法（如主成分分析和多元缩放）将高维空间简化为低维空间；第二步将致力于统计推断。 将使用适当的统计检验，考虑研究假设得出回归模型。 将计算测试的功效，并通过现代模拟技术（例如自举方法）对模型进行严格评估。