NUTRIPROTECT-Nutrição Infantil como Fator Protetor ou de Risco à Saúde (My-Milk-2)

A nutrição pode atuar tanto como fator de risco quanto de proteção no desenvolvimento de uma série de doenças não transmissíveis. Embora tais efeitos tenham sido estabelecidos para todo o ciclo de vida, a nutrição no início da vida pode ser particularmente relevante por seu impacto de longo prazo na saúde da vida adulta. Os dados científicos confiáveis ​​sobre a ingestão alimentar e o estado nutricional da amostra populacional representativa servem como base para elucidar o papel que os fatores nutricionais específicos exercem sobre a saúde humana. O embasamento científico do projeto de pesquisa aplicativa proposto baseia-se no fato de que os estudos, seguindo a ligação entre a nutrição precoce, a microbiota intestinal inicial e o desenvolvimento de crianças, por um período de tempo mais longo, são limitados. Portanto, os principais desafios científicos abordados estão focados nos efeitos da nutrição no início da vida no crescimento e na saúde das crianças participantes e na investigação da relação entre vários marcadores de saúde.

Embora o programa de trabalho deste estudo prospectivo aplicativo multidisciplinar seja focado em crianças, ele deve estar intimamente ligado ao antigo projeto "My-Milk" (SRA J43606; concluído no ano de 2013), onde o papel da nutrição precoce no desenvolvimento de crianças amamentadas e sua microbiota intestinal, durante o primeiro ano de vida, foi investigada. Este estudo será conduzido na população de 6-7 anos incluída no primeiro estudo "My-Milk". O estudo caracterizará os principais fatores modificadores durante o início da vida do participante (definido por meio de variáveis ​​maternas (IMC antes da gravidez, ganho de peso durante a gravidez, nutrição durante a gravidez e lactação, composição de ácidos graxos do leite humano e concentração de vitamina D no soro) e variáveis ​​infantis (duração da amamentação e tratamentos com antibióticos, microbiota fecal no primeiro mês, antropometria e densidade mineral óssea no período neonatal)) sobre o estado nutricional do participante na idade de 6-7 anos. O estado nutricional atual será definido pela ingestão alimentar do participante, antropometria, composição corporal - densidade óssea, percentual de gordura e tecido muscular), estado de saúde (pressão arterial, colesterol sanguíneo, frequência e gravidade de infecções) e microbiota fecal.

A população do estudo convidada a participar incluirá todos os filhos únicos de mães que completaram a parte detalhada do estudo My-Milk no primeiro ano de idade da criança (N=147). Considerando uma taxa de desistência muito baixa na primeira parte detalhada do estudo My-Milk (33 mães participantes em 185, aproximadamente 18 por cento), os investigadores esperam que pelo menos 70-75 por cento dos participantes convidados respondam, ou seja, entre 100 - 110 crianças podem se matricular no estudo. Esta população representará 0,5% das crianças nascidas em 2011 (21947 crianças - dados estatísticos da Eslovénia).

Os seguintes parâmetros serão medidos e avaliados: a nutrição de crianças usando a metodologia padrão de avaliação dietética para crianças e adultos/população idosa conforme previsto na orientação da European Food Safety Authority (EFSA). Nomeadamente, o inquérito ao consumo alimentar será realizado a nível individual através de diário alimentar repetido de 24 horas e método de Entrevista Pessoal/Telefone Assistida por Computador (CAPI/CATI) e por Questionário Geral de Apoio e Questionário de Propensão Alimentar (FPQ) de acordo com PANCAKE - Estudo piloto para a avaliação da ingestão de nutrientes e consumo alimentar entre crianças na Europa. A entrevista estruturada de recordatório alimentar de 24 horas é um método de pesquisa quantitativa utilizado na avaliação nutricional. Um pesquisador nutricionista treinado pedirá a um dos pais ou cuidador que recorde todos os alimentos e bebidas que a criança participante consumiu durante as 24 horas anteriores em dois momentos diferentes durante o estudo (dias não consecutivos de pelo menos 8 a 20 dias entre os dois registros) receber informações adequadas sobre a ingestão habitual de alimentos. A partir dos dados obtidos pelo recordatório de 24 horas, os investigadores pretendem avaliar a ingestão nutricional dos subgrupos populacionais. Além disso, serão estudadas as conexões entre a nutrição de crianças e composição corporal e marcadores de saúde. O FPQ permitirá estimar certos grupos de alimentos relevantes e pouco consumidos. Os dados serão coletados usando questionários validados usando métodos de coleta e processamento de dados assistidos por computador. A avaliação dos dados de ingestão alimentar será realizada pelo software dietético Open Platform for Clinical Nutrition (OPEN) do Jožef Stefan Institute (IJS). O OPEN é um aplicativo baseado na web para avaliação e tratamento dietético, bem como atualizado para oferecer suporte ao método de recordatório 24h/diário alimentar e FPQs de acordo com a metodologia da pesquisa pan-europeia de consumo de alimentos da EFSA, também conhecida como metodologia Menu da UE. O OPEN é uma ferramenta eficiente baseada na Web da Eslovênia para avaliação dietética com base nos alimentos locais. O OPEN permite que o nutricionista insira os alimentos e as quantidades para cada participante. Após a entrada dos alimentos, quantidades e preparações no OPEN, o programa faz uma análise com o detalhamento das informações nutricionais.

A avaliação do crescimento, desenvolvimento e estado de saúde em participantes de 6 a 7 anos será baseada no exame clínico realizado e nos dados obtidos dos prontuários. O exame clínico incluirá a avaliação do estado clínico, medidas antropométricas e medições ultrassonográficas quantitativas da densidade mineral óssea e medição da pressão arterial.

O exame clínico será realizado no Hospital Infantil Universitário e será realizado por um médico especialista em pediatria e biólogo investigador. Incluirá a avaliação do estado clínico, medidas antropométricas e medidas quantitativas de ultrassom da densidade mineral óssea. A densidade mineral óssea será medida na tíbia direita usando o (QUS) Sunlight Omnisense (Sunlight Medical Ltd, Tel Aviv, Israel), que é uma investigação simples, indolor e livre de radiação e fornece informações sobre a densidade óssea e a microarquitetura. O QUS mede o tempo que o sinal de ultrassom leva para viajar entre dois transmissores e dois receptores contidos na sonda. Esses tempos de propagação são usados ​​por um algoritmo proprietário para determinar a velocidade óssea do som (SOS), que é expressa em metros por segundo (m/s). O software usará as três medições mais consistentes para calcular o resultado. Os resultados serão considerados como SOS e escore Z (unidades de desvio padrão em relação à média para valores de referência da população pareada por idade e sexo). Ao contrário das crianças, nos adultos as medições são feitas em um raio. Para antropometria: a altura corporal [cm] e a massa corporal [kg] serão medidas com uma balança médica certificada, descalço e com roupas mínimas. A precisão de uma medida de altura será de 0,1 cm e de uma medida de massa de 0,1 kg. As espessuras de dobras cutâneas [mm] em seis locais padrão serão medidas de acordo com a metodologia padronizada com precisão de 0,1 mm por um calibrador de dobras cutâneas certificado e calibrado (Harpenden, Inglaterra). As circunferências [cm] serão medidas uma vez no tronco ou no lado direito do corpo com uma fita métrica estreita inelástica (fita de vidro, China) com precisão de 0,1 cm. As estimativas da composição corporal serão vinculadas aos dados nutricionais adquiridos.

Outras informações sobre o estado de saúde atual (incluindo colesterol no sangue) e o desenvolvimento da criança serão obtidas na documentação médica. Para o efeito, os investigadores solicitarão aos pediatras o acesso aos registos médicos dos participantes. Serão analisados ​​os dados sobre a eventual perturbação de um desenvolvimento físico regular (crescimento acelerado, crescimento atenuado, baixa massa corporal e IMC para sobrepeso ou obesidade), e sobre a presença de alergias e doenças crônicas emergentes. A ênfase também será colocada nas infecções, ingestão de medicamentos (tratamentos com antibióticos) e doenças crônicas.

O estudo da microbiota fecal infantil será baseado em abordagens moleculares, como PCR quantitativo em tempo real (qPCR) e sequenciamento de próxima geração (NGS) da subunidade do coeficiente de sedimentação 16 (16S) do gene do ácido ribonucléico ribossômico (rRNA) usando Illumina tecnologia. Uma única amostra fecal de uma criança aparentemente saudável será coletada no exame clínico. Previamente, os pais receberão os recipientes de amostragem estéreis codificados com uma colher presa à tampa e com instruções de amostragem por correio e e-mail. Eles serão solicitados a coletar aproximadamente 2 g (2 colheres) das fezes da criança participante possivelmente no dia planejado da visita na clínica pediátrica ou um dia antes. As amostras serão mantidas refrigeradas até a visita e serão imediatamente congeladas a -20 ˚C na chegada à clínica pelo pessoal médico. No prazo de um mês após a coleta, as amostras fecais congeladas a -20 ˚C serão transferidas para o laboratório e armazenadas a -80 ˚C até a realização das análises microbianas. Os métodos de sequenciamento de amplicon QPCR e 16S rRNA, também aplicados na primeira parte do projeto My-Milk, são adequados para a avaliação da biodiversidade entre comunidades bacterianas totais e composição da microbiota fecal, bem como, a avaliação das flutuações quantitativas de bactérias específicas grupos-alvo nos ecossistemas microbianos complexos, como o trato gastrointestinal.

Os dados sobre a nutrição dos participantes de 6 a 7 anos serão estudados em conexão com a composição corporal (densidade óssea, percentual de gordura e tecido muscular), marcadores de saúde (pressão arterial, colesterol no sangue) e microbiota fecal. Após o controle de qualidade das leituras sequenciadas, a biodiversidade do microbioma fecal e a abundância relativa de táxons bacterianos serão obtidas e medidas de biodiversidade, como a pontuação de Chao1 e o índice de diversidade de Shannon, serão calculadas.

Posteriormente, todos os dados serão depositados no banco de dados central juntamente com os já obtidos durante a primeira parte do estudo My-Milk. A análise estatística apropriada será aplicada na investigação do impacto das exposições precoces no crescimento posterior, estado nutricional, saúde e microbiota fecal em participantes na idade atual de 6-7 anos. A base de dados central permitirá (a) acesso protegido às informações já coletadas; (b) adição de novos atributos e (c) exportação de dados para fins de análise estatística. A base de dados não conterá quaisquer identificações pessoais (as pessoas serão codificadas apenas por números de identificação). A maioria dos dados coletados do estudo My-Milk já foram convertidos em formato eletrônico. A metodologia estatística compreenderá duas etapas: a primeira etapa exploratória, que consiste na verificação de dados, exibições gráficas e redução do espaço dimensional superior para o espaço dimensional inferior por meio de métodos estatísticos multivariados, como análise de componentes principais e escalonamento multivariado; a segunda etapa será dedicada à inferência estatística. Serão utilizados os testes estatísticos apropriados, modelos de regressão serão derivados levando em consideração as hipóteses de pesquisa. O poder dos testes será calculado e os modelos serão avaliados criticamente por técnicas modernas de simulação (por exemplo, abordagem bootstrap).