NUTRIPROTECT-La nutrition des enfants comme facteur de protection ou de risque pour la santé (My-Milk-2)

La nutrition peut agir comme un facteur de risque ou de protection dans le développement d'une série de maladies non transmissibles. Bien que de tels effets aient été établis pour l'ensemble du cycle de vie, la nutrition au début de la vie peut être particulièrement pertinente pour son impact à long terme sur la santé plus tard dans la vie. Les données scientifiques fiables sur les apports alimentaires et l'état nutritionnel de l'échantillon de population représentatif servent de base pour élucider le rôle que les facteurs nutritionnels spécifiques exercent sur la santé humaine. L'arrière-plan scientifique du projet de recherche applicative proposé repose sur le fait que les études, suivant le lien entre la nutrition précoce, le microbiote intestinal initial et le développement des enfants, sur une période plus longue, sont limitées. Par conséquent, les principaux défis scientifiques abordés sont axés sur les effets de la nutrition précoce sur la croissance et la santé des enfants participants, et sur l'étude de la relation entre divers marqueurs de santé.

Si le programme de travail de cette étude prospective applicative multidisciplinaire sera centré sur les enfants, il sera étroitement lié à l'ancien projet « My-Milk » ​​(SRA J43606 ; terminé en 2013), où le rôle de la nutrition précoce dans le développement de les enfants allaités et leur microbiote intestinal, au cours de la première année de vie, ont été étudiés. Cette étude sera menée au sein de la population des 6-7 ans incluse dans la première étude « My-Milk ». L'étude caractérisera les principaux facteurs modificateurs au cours de la petite enfance du participant (définis par des variables maternelles (IMC avant la grossesse, prise de poids pendant la grossesse, nutrition pendant la grossesse et l'allaitement, composition en acides gras du lait maternel et concentration de vitamine D dans le sérum) et les variables infantiles (durée de l'allaitement et des traitements antibiotiques, microbiote fécal au premier mois, anthropométrie et densité minérale osseuse en période néonatale)) sur l'état nutritionnel du participant à l'âge de 6-7 ans. L'état nutritionnel actuel sera défini par les apports alimentaires du participant, l'anthropométrie, la composition corporelle - densité osseuse, pourcentage de graisse et de tissu musculaire), la santé (tension artérielle, cholestérol sanguin, fréquence et gravité des infections) et le microbiote fécal.

La population de l'étude invitée à participer comprendra tous les enfants célibataires de mères qui ont terminé la partie détaillée de l'étude My-Milk à la première année de l'enfant (N = 147). Compte tenu d'un taux d'abandon très faible dans la première partie détaillée de l'étude My-Milk (33 mères participantes sur 185, environ 18 %), les enquêteurs s'attendent à ce qu'au moins 70 à 75 % des participantes invitées répondent, c'est-à-dire entre 100 à 110 enfants peuvent être inscrits à l'étude. Cette population représentera 0,5 % des enfants nés en 2011 (21947 enfants - données statistiques pour la Slovénie).

Les paramètres suivants seront mesurés et évalués : la nutrition des enfants en utilisant la méthodologie d'évaluation alimentaire standard pour les enfants et les adultes/personnes âgées, comme prévu dans les orientations de l'Autorité européenne de sécurité des aliments (EFSA). À savoir, l'enquête sur la consommation alimentaire sera réalisée au niveau individuel par un journal alimentaire répété de 24 h et la méthode d'entrevue personnelle/téléphonique assistée par ordinateur (CAPI/CATI) et en soutenant le questionnaire général et le questionnaire sur la propension alimentaire (FPQ) selon PANCAKE - Étude pilote pour l'évaluation de l'apport en nutriments et de la consommation alimentaire chez les enfants en Europe. L'entretien de rappel alimentaire structuré de 24 heures est une méthode de recherche quantitative utilisée dans l'évaluation nutritionnelle. Un enquêteur diététicien qualifié demandera à un parent ou à un gardien de rappeler tous les aliments et boissons que l'enfant participant a consommés au cours des 24 heures précédentes à deux moments différents de l'étude (jours non consécutifs d'au moins 8 à 20 jours entre les deux enregistrements) recevoir les informations appropriées sur la consommation habituelle d'aliments. A partir des données obtenues par rappel de 24h, les enquêteurs entendent évaluer les apports nutritionnels des sous-groupes de population. De plus, les liens entre la nutrition des enfants et la composition corporelle et les marqueurs de santé seront étudiés. Le FPQ permettra d'estimer certains groupes d'aliments pertinents peu consommés. Les données seront collectées à l'aide de questionnaires validés utilisant des méthodes de collecte et de traitement des données assistées par ordinateur. L'évaluation des données d'apport alimentaire sera effectuée par le logiciel diététique Open Platform for Clinical Nutrition (OPEN) de l'Institut Jožef Stefan (IJS). OPEN est une application Web pour l'évaluation et le traitement diététiques, ainsi que mise à niveau pour prendre en charge la méthode de rappel/journal alimentaire de 24h et les FPQ conformément à l'enquête paneuropéenne sur la consommation alimentaire de l'EFSA, également connue sous le nom de méthodologie EU Menu. OPEN est un premier outil Web slovène efficace pour l'évaluation alimentaire basée sur les produits alimentaires locaux. OPEN permet à la diététiste d'entrer les aliments et les quantités pour chaque participant. Une fois les aliments, les quantités et les préparations entrés dans l'OPEN, le programme crée une analyse avec la répartition des informations nutritionnelles.

L'évaluation de la croissance, du développement et de l'état de santé des participants âgés de 6 à 7 ans sera basée sur l'examen clinique effectué et les données obtenues à partir des dossiers médicaux. L'examen clinique comprendra l'évaluation de l'état clinique, des mesures anthropométriques et des mesures échographiques quantitatives de la densité minérale osseuse et la mesure de la pression artérielle.

L'examen clinique sera réalisé à l'Hôpital Universitaire des Enfants et sera réalisé par un médecin spécialiste en pédiatrie et biologiste investigateur. Il comprendra l'évaluation de l'état clinique, des mesures anthropométriques et des mesures quantitatives par ultrasons de la densité minérale osseuse. La densité minérale osseuse sera mesurée au niveau du tibia droit à l'aide du (QS) Sunlight Omnisense (Sunlight Medical Ltd, Tel Aviv, Israël) qui est une enquête simple, indolore et sans rayonnement et donne des informations sur la densité osseuse et la micro architecture. Le QUS mesure le temps mis par le signal ultrasonore pour se déplacer entre deux émetteurs et deux récepteurs contenus dans la sonde. Ces temps de propagation sont utilisés par un algorithme propriétaire pour déterminer la vitesse osseuse du son (SOS), qui est exprimée en mètres par seconde (m/s). Le logiciel utilisera les trois mesures les plus cohérentes pour calculer le résultat. Les résultats seront pris sous forme de score SOS et Z (unités d'écarts types par rapport à la moyenne des valeurs de référence de la population appariées selon l'âge et le sexe). Contrairement aux enfants, chez les adultes, les mesures sont prises sur un rayon. Pour l'anthropométrie : la taille corporelle [cm] et la masse corporelle [kg] seront mesurées avec une balance médicale certifiée pieds nus et dans un vêtement minimal. La précision d'une mesure de taille sera de 0,1 cm et d'une mesure de masse de 0,1 kg. Les épaisseurs de plis cutanés [mm] à six emplacements standard seront mesurées selon la méthodologie standardisée avec une précision de 0,1 mm par un pied à coulisse certifié et calibré (Harpenden, Angleterre). Les circonférences [cm] seront mesurées une fois sur le tronc ou sur le côté droit du corps avec un ruban à mesurer étroit non extensible (ruban en fibre de verre, Chine) avec une précision de 0,1 cm. Les estimations de la composition corporelle seront liées aux données nutritionnelles acquises.

D'autres informations concernant l'état de santé actuel (y compris le cholestérol sanguin) et le développement de l'enfant seront obtenues à partir de la documentation médicale. A cet effet, les enquêteurs demanderont aux pédiatres l'accès aux dossiers médicaux des participants. Les données sur la perturbation éventuelle d'un développement physique régulier seront analysées (la croissance accélérée, la croissance atténuée, la masse corporelle faible et l'IMC pour le surpoids ou l'obésité), et sur la présence d'allergies et de maladies chroniques émergentes. L'accent sera également mis sur les infections, les prises médicamenteuses (traitements antibiotiques) et les maladies chroniques.

L'étude du microbiote fécal des enfants s'appuiera sur des approches moléculaires telles que la PCR quantitative en temps réel (qPCR) et le séquençage de nouvelle génération (NGS) séquençage de la sous-unité à 16 coefficients de sédimentation (16S) des amplicons du gène de l'acide ribonucléique ribosomal (ARNr) à l'aide d'Illumina technologie. Un seul échantillon fécal d'un enfant apparemment en bonne santé sera prélevé lors de l'examen clinique. Au préalable, les parents recevront les récipients de prélèvement stériles codés avec une cuillère attachée au couvercle et les instructions de prélèvement par courrier et par e-mail. Il leur sera demandé de collecter environ 2 g (2 cuillères) de fèces de l'enfant participant éventuellement le jour prévu de la visite à la clinique pédiatrique ou un jour avant. Les échantillons seront conservés au réfrigérateur/refroidis jusqu'à la visite et seront immédiatement congelés à -20 ˚C à l'arrivée à la clinique par le personnel médical. Dans un délai d'un mois après avoir été prélevés, les échantillons fécaux congelés à -20 ˚C seront transférés au laboratoire et stockés à -80 ˚C jusqu'à la réalisation des analyses microbiennes. Les méthodes de séquençage des amplicons QPCR et ARNr 16S, également appliquées dans la première partie du projet My-Milk, conviennent à l'évaluation de la biodiversité parmi les communautés bactériennes totales et la composition du microbiote fécal, ainsi qu'à l'évaluation des fluctuations quantitatives de groupes cibles dans les écosystèmes microbiens complexes tels que le tractus gastro-intestinal.

Les données sur la nutrition des participants âgés de 6 à 7 ans seront étudiées en lien avec la composition corporelle (densité osseuse, pourcentage de graisse et tissu musculaire), les marqueurs de santé (tension artérielle, cholestérol sanguin) et le microbiote fécal. Après contrôle de la qualité des lectures séquencées, la biodiversité du microbiome fécal et l'abondance relative des taxons bactériens seront acquises et des mesures de la biodiversité telles que le score Chao1 et l'indice de diversité de Shannon seront calculées.

Ensuite, toutes les données seront déposées dans la base de données centrale avec celles déjà obtenues lors de la première partie de l'étude My-Milk. L'analyse statistique appropriée sera appliquée pour étudier l'impact des expositions précoces sur la croissance ultérieure, l'état nutritionnel, la santé et le microbiote fécal chez les participants à l'âge actuel de 6-7 ans. La base de données centrale permettra (a) un accès protégé aux informations déjà collectées ; (b) ajout de nouveaux attributs et (c) exportation de données à des fins d'analyse statistique. La base de données ne contiendra aucune identification personnelle (les sujets seront codés uniquement par des numéros d'identification). La majorité des données recueillies dans le cadre de l'étude My-Milk ont ​​déjà été converties sous forme électronique. La méthodologie statistique comprendra les deux étapes : la première étape exploratoire, qui consiste en la vérification des données, les affichages graphiques et la réduction de l'espace dimensionnel supérieur en espace dimensionnel inférieur via des méthodes statistiques multivariées, telles que l'analyse en composantes principales et la mise à l'échelle multivariée ; la deuxième étape sera consacrée à l'inférence statistique. Les tests statistiques appropriés seront utilisés, des modèles de régression seront dérivés en tenant compte des hypothèses de recherche. La puissance des tests sera calculée et les modèles seront évalués de manière critique par des techniques de simulation modernes (par exemple, l'approche bootstrap).