昼夜节律紊乱对吸入烟雾的影响

参与者：将招募健康的大学年龄男性 (n = 15)，无睡眠障碍且最近没有经络旅行（过去 2 周内）。 参与者将完成时间型问卷（Morningness-Eveningness Questionnaire；MEQ，Munich Chronotype Questionnaire；MCTQ）以建立中间时间型。 这将最大限度地减少昼夜节律偏好对早晨接触烟雾的影响。 参与者随后将配备活动监测器 (ActiCal)，以监测整个实验期间的睡眠和身体活动。 将要求参与者在实验试验前至少 3 天保持正常的睡眠时间表，并保留睡眠日志以进行验证。

实验性试验：参与者将接受 2 项随机交叉设计的实验性试验，试验之间至少有 1 周的清除期； 1) NS-250：暴露于 250 µg/m^3 木烟的正常睡眠，以及 RS-250：暴露于 250 µg/m^3 木烟的睡眠受限。 在 NS 试验期间（22:00-06:00），参与者将在自己家中有 8 小时的睡眠机会，在 RS 试验期间（00:00-04:00）有 4 小时的睡眠机会。 在所有试验中，参与者将在实验睡眠之夜后的第二天早上 07:30 到实验室报到。 PM 暴露将发生在 08:00-08:45，同时以 70% 的心率储备 (HRR) 骑自行车，以模拟消防的身体需求。

呼出气冷凝物 (EBC)：将使用标准化的 10 分钟收集技术收集 EBC。 为了保持潜在不稳定生物标志物（例如氧化应激）的样品完整性，样品 pH 值将在分装到多个冷冻管（500-700 微升）、快速冷冻并储存在 -80 摄氏度直至进一步测定之前立即测量。 氧化应激和炎症的标准化生物标志物组将使用单一解冻方法进行。

炎症生物标志物分析：在暴露于 PM2.5 之前 (PRE) 和之后 (POST) 将血液收集到肝素化的真空采血管中，并离心以收集血浆。 将使用标准酶联免疫吸附测定 (ELISA) 测定血浆中的炎症生物标志物（白细胞介素 (IL)-6、肿瘤坏死因子 (TNF)-α、五聚蛋白-3 和 C 反应蛋白 (CRP)）。

昼夜节律评估：在整个实验方案中，将以两种方式评估昼夜节律； 1) 体动记录仪和 2) 口腔细胞拭子中的时钟基因表达。 Acticals 将全程佩戴以收集睡眠变量（时间、持续时间、质量）。 将每隔 6 小时（00:00、06:00、12:00、18:00）在从脸颊采集的拭子中测量时钟基因表达（CLOCK、BMAL1、PER2），以评估睡眠剥夺对分子生物学的影响昼夜节律。 面颊拭子将立即置于 RNA 稳定缓冲液中直至分离。 在 00:00 采集的拭子将在尽可能少的光照下进行，以避免干扰睡眠。 这些方法以前曾用于评估正常和中断的睡眠。