A cirkadián ritmus megzavarásának hatása a füst belélegzésére

Résztvevők: Egészséges, főiskolai korú férfiakat (n = 15), akik mentesek az alvászavaroktól, és nem utaztak a közelmúltban (az elmúlt 2 hétben) a meridiánon keresztül. A résztvevők kronotípus kérdőíveket (Morningness-Eveningness Questionnaire; MEQ, München Chronotype Questionnaire; MCTQ) töltenek ki a köztes kronotípusok megállapítása érdekében. Ez minimálisra csökkenti a cirkadián preferencia hatását a reggeli füstnek való kitettségre. A résztvevők ezt követően aktivitásfigyelőkkel (ActiCal) lesznek felszerelve, hogy figyelemmel kísérjék az alvást és a fizikai aktivitást a kísérlet teljes időtartama alatt. A résztvevőket arra kérik, hogy a kísérleti kísérletekig legalább 3 napig tartsanak normális alvási ütemtervet, és vezessenek alvásnaplót az ellenőrzés érdekében.

Kísérleti próbák: A résztvevők 2 kísérleti próbán esnek át randomizált keresztezett elrendezésben, legalább 1 hetes kimosási periódussal a kísérletek között; 1) NS-250: Normál alvás 250 µg/m^3 fafüsttel és RS-250: Korlátozott alvás 250 µg/m^3 fafüsttel. A résztvevők 8 órás alvási lehetőséget kapnak saját otthonukban az NS-próbák alatt (22:00-06:00), és 4 órás alvási lehetőséget az RS-próbák alatt (00:00-04:00). Minden kísérletben a résztvevők a kísérleti alváséjszaka utáni reggel 07:30-kor jelentkeznek a laboratóriumba. A PM-expozíció 08:00 és 08:45 között történik, miközben 70%-os pulzustartalékkal (HRR) kerékpározunk, hogy szimuláljuk a tűzoltás fizikai követelményeit.

Kilégzési kondenzátum (EBC): Az EBC gyűjtése szabványos 10 perces gyűjtési technikákkal történik. A potenciálisan labilis biomarkerek (pl. oxidatív stressz) minta integritásának megőrzése érdekében a minta pH-ját közvetlenül a több kriocsőben (500-700 µl) történő aliquot kiosztás, gyorsfagyasztás és -80 °C-on történő tárolás előtt a további vizsgálatig meg kell mérni. Az oxidatív stresszre és gyulladásra vonatkozó szabványosított biomarker paneleket egyetlen felolvasztásos módszerrel készítik el.

Gyulladásos biomarker analízis: A vért heparinizált vakutainerbe gyűjtik a PM2.5 expozíció előtt (PRE) és közvetlenül azt követően (POST), és centrifugálják a plazmagyűjtéshez. A plazmát gyulladásos biomarkerekre (interleukin (IL)-6, tumor nekrózis faktor (TNF)-α, pentraxin-3 és C-reaktív fehérje (CRP)) vizsgálják standard enzimhez kötött immunszorbens vizsgálattal (ELISA).

A cirkadián ritmus értékelése: A kísérleti protokoll során a cirkadián ritmusokat kétféleképpen értékelik; 1) Actigraphia és 2) Óragén expressziója bukkális sejttamponokban. Az alvási változók (időzítés, időtartam, minőség) összegyűjtése érdekében az aktuálokat végig viselik. Az óragén expresszióját (CLOCK, BMAL1, PER2) az arcról 6 órás időközönként (00:00, 06:00, 12:00, 18:00) vett tamponokban mérik, hogy értékeljék az alvásmegvonás molekuláris hatását. cirkadián ritmus. Az arctamponokat azonnal RNS-stabilizáló pufferbe helyezzük az izolálásig. A 00:00-kor levett tamponokat minimális fényhatás mellett kell elvégezni, hogy elkerüljük az alvászavarokat. Ezeket a módszereket korábban használták a normális és zavart alvás értékelésére.