Efeitos da interrupção do ritmo circadiano na inalação de fumaça

Participantes: Homens saudáveis ​​em idade universitária (n = 15), livres de distúrbios do sono e sem viagens transmeridianas recentes (nas últimas 2 semanas) serão recrutados para este estudo. Os participantes preencherão questionários de cronotipo (Questionário de matutino-vespertino; MEQ, Questionário de cronotipo de Munique; MCTQ) para estabelecer cronotipos intermediários. Isso minimizará o efeito da preferência circadiana na exposição matinal ao fumo. Posteriormente, os participantes serão equipados com monitores de atividade (ActiCal) para monitorar o sono e a atividade física durante toda a duração do experimento. Os participantes serão solicitados a manter um horário normal de sono por pelo menos 3 dias antes dos testes experimentais e manter um registro de sono para verificar.

Ensaios Experimentais: Os participantes serão submetidos a 2 ensaios experimentais em um design cruzado aleatório, com pelo menos 1 semana de intervalo entre os ensaios; 1) NS-250: Sono Normal com exposição a fumaça de lenha a 250 µg/m^3, e RS-250: Sono Restrito com exposição a fumaça de lenha a 250 µg/m^3. Os participantes terão uma oportunidade de dormir 8 horas em sua própria casa durante os testes NS (22:00-06:00) e uma oportunidade de sono de 4 horas durante os testes RS (00:00-04:00). Em todos os ensaios, os participantes se apresentarão no laboratório às 07h30 da manhã após a noite de sono experimental. A exposição à PM ocorrerá das 08:00 às 08:45, durante o ciclismo a 70% da reserva de frequência cardíaca (HRR) para simular as demandas físicas do combate a incêndios.

Condensado de ar exalado (EBC): O EBC será coletado usando técnicas de coleta padronizadas de 10 minutos. A fim de preservar a integridade da amostra para biomarcadores potencialmente instáveis ​​(por exemplo, estresse oxidativo), o pH da amostra será medido imediatamente antes da alíquota em vários criotubos (500-700µl), congelamento rápido e armazenamento a -80 graus C até análise posterior. Painéis de biomarcadores padronizados para estresse oxidativo e inflamação serão realizados usando uma única abordagem de descongelamento.

Análise de biomarcadores inflamatórios: O sangue será coletado em vacutainers heparinizados antes (PRÉ) e imediatamente após (PÓS) exposição a PM2.5 e centrifugado para coleta de plasma. O plasma será testado para biomarcadores inflamatórios (interleucina (IL)-6, fator de necrose tumoral (TNF)-α, pentraxina-3 e proteína C-reativa (CRP)) usando ensaios padrão de imunoabsorção enzimática (ELISA).

Avaliação do Ritmo Circadiano: Ao longo do protocolo experimental, os ritmos circadianos serão avaliados de duas formas; 1) Actigrafia e 2) Expressão do gene Clock em zaragatoas de células bucais. Acticals será usado para coletar variáveis ​​de sono (tempo, duração, qualidade). A expressão gênica do relógio (CLOCK, BMAL1, PER2) será medida em swabs retirados da bochecha em intervalos de 6 horas (00:00, 06:00, 12:00, 18:00) para avaliar os efeitos da privação de sono no ritmo circadiano. Os swabs de bochecha serão imediatamente colocados em tampão de estabilização de RNA até o isolamento. Os swabs colhidos às 00:00 serão realizados com exposição mínima à luz para evitar a interrupção do sono. Esses métodos foram usados ​​anteriormente para avaliar o sono normal e interrompido.