运动作为同种异体细胞疗法的免疫佐剂 (Allo-X)

背景：

同种异体细胞疗法包括多种方法，包括供体淋巴细胞输注 (DLI) 和工程免疫细胞产品，如嵌合抗原受体 (CAR) T 细胞、γδ (γδ) T 细胞、细胞因子诱导的杀伤 (CIK) 细胞和细胞因子-诱导记忆样自然杀伤（NK）细胞。 这些疗法通常在同种异体造血细胞移植（alloHCT）后采用，以预防或治疗高危患者的白血病复发。 然而，尽管这些疗法已显示出潜力，但 DLI 和扩增细胞产品的成功率仍然有限。 DLI 尤其具有诱发移植物抗宿主病 (GvHD) 的风险，即供体 T 细胞攻击健康组织，导致严重的发病率。 此外，扩增细胞产品面临与制造时间、功效和成本相关的挑战，这可能限制其可及性和有效性。 因此，迫切需要增强 DLI 的移植物抗白血病/淋巴瘤（GvL）效应并提高扩增细胞产品的功效，以便在不增加 GvHD 风险的情况下为更多患者实现更好的结果，从而扩大它们在临床实践中的应用。

运动已被证明有助于降低癌症风险，改善癌症幸存者的预后，并可作为多种癌症治疗的辅助手段。 目前的运动模型涉及持续 20 分钟的急性单次中等到高强度运动，这会引起效应淋巴细胞（例如自然杀伤细胞、γδ T 细胞和 CD8+ T 细胞）的儿茶酚胺依赖性动员和重新分布。 这种反应可以通过改善癌前细胞的识别和破坏并有助于抑制肿瘤生长来增强长期免疫监视。 最重要的研究问题是：能否在运动诱导的动员阶段从血液中收集淋巴细胞，以产生用于癌症免疫治疗的优质细胞产品？ 总体愿景是将运动动员的淋巴细胞开发成一种疗法，提高 DLI 和扩增细胞产品（例如 CAR T 细胞、γδ T 细胞、CIK 细胞和细胞因子诱导的记忆样 NK 细胞）的功效用于治疗白血病/淋巴瘤复发。 这种被称为“DLI-X”的新方法有可能以最低的成本改进现有的血癌治疗方法。

该提案的目标是在体外和移植了各种人类血液癌症的异种小鼠模型中对标准 DLI 和 DLI-X 进行头对头比较，并确定驱动增强抗白血病/ DLI-X 的淋巴瘤反应。

总体假设是，与标准 DLI 相比，DLI-X 和由这些运动动员的淋巴细胞制造的扩增细胞产品将对多种血液恶性肿瘤表现出增强的 GvL 效应。 这些效应将由 β2-肾上腺素受体 (β2-AR) 介导的转录组和蛋白质组变化驱动，从而促进靶细胞识别和细胞毒性。 此外，建议 DLI-X 将提高联合疗法的疗效，例如双特异性 T 细胞接合剂 blinatumomab 和旨在增加抗体依赖性细胞毒性 (ADCC) 的单克隆抗体，从而增强肿瘤生长抑制和DLI 的 GvL 效应。

具体目标：

1. 评估持续 20 分钟的单次中度至剧烈强度运动对血液中免疫细胞的数量、表型和分子特征的影响。
2. 确定与在静息条件下从同一供体收集的免疫细胞相比，运动后收集的免疫细胞是否能产生更好的治疗产品。
3. 研究肾上腺素能受体信号传导在介导这些效应中的作用

程序：

健康参与者将被招募到本研究的三个不同组（队列）中：（1）运动队列； (2) 运动+β受体阻滞剂队列；和/或 (3) 异丙肾上腺素输注队列。 参与者可以报名参加一个、两个或全部三个研究组。 每个队列的程序概述如下。

演习队列 演习队列的参与者将被安排在 08:00 至 10:00 之间参观实验室，参加三个单独的会议。 每次就诊期间，工作人员将确认是否遵守检测前指南（例如，禁食 8-12 小时且无剧烈体力活动）。 任何不符合这些准则的参与者都将被重新安排。

运动队列访问 1：筛选和分级运动测试 时间承诺：60 分钟

1. 知情同意：研究团队成员将获得参与者的书面知情同意。
2. 预筛选问卷：参与者将完成 AHA/ACSM 预筛选问卷，以验证是否符合纳入和排除标准。
3. 人体测量：将测量身高和体重。
4. 血液样本：使用自动手持式分析仪（Cardiocheck）采集指尖毛细血管血样（使用无菌弹簧采血针）进行总胆固醇和空腹血糖定量。
5. 血压测量：将使用手动或自动血压袖带测量静息血压。
6. 风险分层：筛选后被视为不合格的参与者将被排除在进一步的参与之外。
7. 分级运动测试：参与者将在室内固定自行车上执行最大运动方案。 他们将佩戴心率监测器和连接到代谢车的面罩，以连续测量心率和呼吸气体。 测试开始时，女性功率为 50 瓦，男性功率为 75 瓦，功率每分钟增加 15 瓦，直至耗尽。 将确定最大摄氧量 (VO2max)、通气阈值和峰值循环功率。

练习队列访问 2 和 3 时间承诺：每次访问 2 小时 参与者将在访问 1 后 3-10 天和访问 2 后 7-14 天返回实验室。

1. 运动前程序：训练有素的抽血医生会将静脉注射导管插入手臂外周静脉。 将收集运动前的血样（约 120 mL）。
2. 锻炼方案：参与者将进行 20 分钟的中度至剧烈自行车运动，功率输出相当于预定最大摄氧量 (VO2max) 的 50%、60%、70% 和 80%，持续 5 分钟增量。 在这些试验期间，参与者不会被锻炼到筋疲力尽。 在运动期间和运动结束后，将每 5 分钟收集一次血压测量值和感知运动评级。
3. 运动期间的血液采样：将在运动方案的各个阶段通过 IV 导管收集额外的静脉血样本（运动期间的总体积：80 mL）。
4. 运动后抽血：运动后 1 小时最终抽取 15 mL 血。

总血量：参与者每次就诊总共捐献 215 毫升血液（运动前 120 毫升、运动期间 80 毫升、运动后 15 毫升），两次就诊总共捐献 430 毫升。 此外，在第 1 次访视期间将收集几滴毛细血管血（约 10-20 µL）用于筛查目的。

第 2 次和第 3 次访视的程序相同。 两次就诊的理由是从同一捐献者获得足够的血液以产生多种治疗细胞产品。 该队列的总时间约为 5 小时。

运动 + β 受体阻滞剂队列

时间承诺：21 小时 练习 + β 受体阻滞剂队列的参与者将安排在 08:00 至 10:00 之间参观实验室，进行六次单独的会议，这将持续 6-10 周。 每次访视期间，研究人员将确认是否遵守测试前指南（例如，禁食 8-12 小时且无剧烈体力活动）。 任何不符合这些准则的参与者都将被重新安排。

运动 + β 受体阻滞剂队列访问 1 - 分级运动测试时间承诺：60 分钟。 参与者将在室内固定自行车上完成分级运动测试，以确定他们的最大摄氧量 (VO2max) 和峰值骑行功率。 该测试将确保后续运动试验的适当强度水平。

锻炼 + β 受体阻滞剂队列访问 2-6 - 锻炼试验时间承诺：20 小时

剩下的五次访问将包括主要的演习试验，参与者将接受以下程序。 每次运动试验访问之间将有 7-10 天的时间，以便恢复并最大程度地减少所用药物的潜在残留影响：

1. 药物管理：药物试验将在分组、随机双盲环境中进行，以确保实验者和参与者都不知道正在进行哪项试验。 随机化将由未参与进行运动试验的研究团队成员计算。 给药时间基于每种药物的血浆峰浓度。 在每次运动试验前 3 小时、2 小时和 1 小时，参与者将根据以下概述服用药物或安慰剂药丸：

   试验 1：所有时间点的安慰剂 试验 2：纳多洛尔 3 小时 安慰剂 2 小时和 1 小时 试验 3：比索洛尔 3 小时 安慰剂 2 小时和 1 小时 试验 4：安慰剂 3 小时和 1 小时，卡维地洛 2 小时试验 5：比索洛尔 3 小时、安慰剂 2 小时、罗氟司特 1 小时

2. 药物前程序：在摄入药物或安慰剂之前，训练有素的抽血医生会将静脉导管插入手臂外周静脉。 将收集药物前的血液样本。
3. 服药后、运动前血样：服用药物或安慰剂后，运动开始前 30 分钟，将采集服药后、运动前血样。
4. 锻炼方案：参与者将进行 20 分钟的中度至剧烈自行车锻炼，功率输出相当于预定最大摄氧量的 50%、60%、70% 和 80%，每次增量为 5 分钟。 在这些试验期间，参与者不会被锻炼到筋疲力尽。 在运动期间和运动结束后，将每 5 分钟收集一次血压测量值和感知运动评级。
5. 运动期间的血液采样：在整个运动方案的不同时间点，将通过 IV 导管收集额外的静脉血样本。
6. 运动后恢复血液样本：在恢复阶段，运动后 5 至 60 分钟的不同时间点将收集额外的血液样本。

总血量：该队列的参与者每次就诊总共将捐献约 220 mL 的血液。 该队列在所有六次就诊中的累计总血量约为 1,320 mL。

异丙肾上腺素队列 异丙肾上腺素队列的参与者将安排在 08:00 至 10:00 之间参观实验室，参加三个单独的会议。 每次访视期间，研究人员将确认是否遵守测试前指南（例如，禁食 8-12 小时且无剧烈体力活动）。 任何不符合这些准则的参与者都将被重新安排。

异丙肾上腺素队列访视 1：筛查和异丙肾上腺素输注时间承诺：2 小时

1. 知情同意：研究团队成员将获得参与者的书面知情同意。
2. 预筛选问卷：参与者将完成 AHA/ACSM 预筛选问卷，以验证是否符合纳入和排除标准。
3. 人体测量：将测量身高和体重。
4. 血液样本：使用自动手持式分析仪（Cardiocheck）采集指尖毛细血管血样（使用无菌弹簧采血针）进行总胆固醇和空腹血糖定量。
5. 血压测量：将使用手动或自动血压袖带测量静息血压。
6. 风险分层：筛选后被视为不合格的参与者将被排除在进一步的参与之外。
7. 输注前程序：参与者将配备连接心电图（ECG；12 导联）的电极，并将收到静息心电图读数，该读数将由心脏病专家进行监测。 心脏病专家将决定是否继续输注或将参与者排除在研究之外。 由训练有素的抽血医生将两根静脉导管插入双侧手臂外周静脉。 一根导管将用于输送异丙肾上腺素，一根导管将用于收集血液样本。 将收集输注前血样（约 120 mL）。
8. 异丙肾上腺素输注方案：参与者将以 50ng/min/kg 的浓度连续输注异丙肾上腺素 20 分钟。 输注期间每 5 分钟收集一次血压测量结果，并持续监测心电图活动。 心脏病专家将监测整个输注过程。
9. 输注期间的血液采样：在输注方案的最后 5 分钟内，将通过 IV 导管收集额外的静脉血样本（运动期间的总体积：80 mL）。
10. 输注后抽血：运动后 1 小时最终抽取 15 mL 血。

总血量：参与者在本次访视期间将捐献总计 215 mL 的血液（输注前 120 mL、输注期间 80 mL、输注后 15 mL）。 此外，在第 1 次访视期间将收集几滴毛细血管血（约 10-20 µL）用于筛查目的。

结果措施：

所有三个队列的结果测量将与本方案“结果测量”部分中所述的相同