동종 세포 치료를 위한 면역 보조제로서의 운동 (Allo-X)

배경:

동종이계 세포 치료법에는 기증자 림프구 주입(DLI)과 키메라 항원 수용체(CAR) T 세포, 감마 델타(γδ) T 세포, 사이토카인 유발 살해(CIK) 세포, 사이토카인과 같은 가공된 면역 세포 제품을 포함한 다양한 접근법이 포함됩니다. -유도된 기억유사 자연살해(NK) 세포. 이러한 치료법은 고위험 환자의 백혈병 재발을 예방하거나 치료하기 위해 동종 조혈 세포 이식(alloHCT) 후에 일반적으로 사용됩니다. 그러나 이러한 치료법은 잠재력을 보였지만 DLI 및 확장 세포 제품의 성공률은 여전히 ​​제한적입니다. 특히 DLI는 기증자 T 세포가 건강한 조직을 공격하여 심각한 질병을 초래하는 이식편대숙주병(GvHD)을 유발할 위험이 있습니다. 더욱이 확장된 세포 제품은 제조 시간, 효능, 비용과 관련된 문제에 직면해 있으며, 이로 인해 접근성과 효율성이 제한될 수 있습니다. 따라서 GvHD의 위험을 증가시키지 않고 더 많은 환자에게 더 나은 결과를 달성하기 위해 DLI의 이식편대백혈병/림프종(GvL) 효과를 강화하고 확장된 세포 제품의 효능을 향상시키는 것이 중요합니다. 임상 실습에서의 사용.

운동은 암 위험을 낮추고, 암 생존자의 결과를 개선하며, 여러 암 치료법의 보조제 역할을 하는 것으로 나타났습니다. 현재 운동 모델은 20분 동안 지속되는 중등도 내지 고강도 운동의 급성 단일 한 차례를 포함하며, 이는 카테콜아민 의존성 동원 및 효과기 림프구(예: 자연 살해 세포, γδ T 세포 및 CD8+ T 세포)의 재분배를 불러일으킵니다. 이 반응은 전암성 세포의 인식 및 파괴를 개선하고 종양 성장 억제에 기여함으로써 장기적인 면역 감시를 향상시킬 수 있습니다. 가장 중요한 연구 질문은 다음과 같습니다. 암 면역치료를 위한 우수한 세포 제품을 생성하기 위해 운동 유도 동원 단계에서 혈액에서 림프구를 수집할 수 있습니까? 전반적인 비전은 운동 동원 림프구를 DLI와 확장된 세포 제품(예: CAR T 세포, γδ T 세포, CIK 세포 및 사이토카인 유발 기억 유사 NK 세포)의 효능을 모두 증가시키는 치료법으로 개발하는 것입니다. 백혈병/림프종 재발 치료용. "DLI-X"라고 불리는 이 새로운 접근법은 최소한의 비용으로 혈액암 치료를 위한 기존 치료법을 개선할 수 있는 잠재력을 가지고 있습니다.

이 제안의 목표는 다양한 인간 혈액암이 이식된 이종 발생 마우스 모델과 시험관 내에서 표준 DLI와 DLI-X를 직접 비교하고 항백혈병/백혈병 예방 효과를 높이는 기본 메커니즘을 확인하는 것입니다. DLI-X의 림프종 반응.

가장 중요한 가설은 DLI-X와 이러한 운동 동원 림프구로 제조된 확장 세포 제품이 표준 DLI에 비해 여러 혈액 악성 종양에 대해 향상된 GvL 효과를 나타낼 것이라는 것입니다. 이러한 효과는 표적 세포 인식 및 세포 독성을 촉진하는 β2-아드레날린 수용체(β2-AR) 매개 전사체 및 단백질체 변화에 의해 유발됩니다. 또한, DLI-X는 이중특이성 T세포 결합제인 블리나투모맙(blinatumomab)과 항체 의존성 세포독성(ADCC)을 증가시키도록 고안된 단일클론항체 등의 병용요법의 효능을 향상시켜 종양 성장 억제를 강화하고, DLI의 GvL 효과.

구체적인 목표:

1. 20분 동안 지속되는 중등도 내지 고강도 강도의 급성 단일 발작이 혈액 내 면역 세포의 수, 표현형 및 분자 특성에 얼마나 영향을 미치는지 평가합니다.
2. 운동 후 수집된 면역 세포가 동일한 기증자로부터 휴식 조건에서 수집된 면역 세포와 비교하여 우수한 치료 제품을 생산하는지 여부를 확인합니다.
3. 이러한 효과를 중재하는 데 있어 아드레날린 수용체 신호 전달의 역할을 조사합니다.

절차:

건강한 참가자는 본 연구의 세 가지 별개의 부문(코호트)으로 모집됩니다: (1) 운동 코호트; (2) 운동 + 베타 차단제 코호트; 및/또는 (3) 이소프로테레놀 주입 코호트. 참가자는 1개, 2개 또는 3개 연구 부문 모두에 등록할 수 있습니다. 각 코호트에 대한 절차는 아래에 설명되어 있습니다.

운동 코호트(Exercise Cohort) 운동 코호트 참가자는 오전 8시부터 10시 사이에 세 번의 개별 세션을 위해 실험실을 방문할 예정입니다. 방문할 때마다 직원은 사전 테스트 지침(예: 8~12시간 금식 및 격렬한 신체 활동 금지)을 준수하는지 확인합니다. 이 지침을 충족하지 않는 참가자는 일정이 변경됩니다.

운동 코호트 방문 1: 선별 및 등급별 운동 테스트 시간 약속: 60분

1. 사전 동의: 연구팀의 구성원은 참가자로부터 서면 동의를 얻습니다.
2. 사전 심사 설문지: 참가자는 AHA/ACSM 사전 심사 설문지를 작성하여 포함 및 제외 기준이 충족되는지 확인합니다.
3. 인체 측정: 키와 몸무게를 측정합니다.
4. 혈액 샘플: 자동 휴대용 분석기(Cardiocheck)를 사용하여 총 콜레스테롤 및 공복 혈당 정량을 위해 손가락 채혈 모세혈관 혈액 샘플을 수집합니다(멸균 스프링 장착 랜싯 사용).
5. 혈압 측정: 안정시 혈압은 수동 또는 자동 혈압 커프를 사용하여 측정됩니다.
6. 위험 계층화: 심사 후 부적격으로 간주된 참가자는 추가 참여에서 제외됩니다.
7. 등급별 운동 테스트: 참가자는 실내 고정 자전거에서 최대 운동 프로토콜을 수행합니다. 심박수와 호흡 가스를 지속적으로 측정하기 위해 심박수 모니터와 대사 카트에 연결된 안면 마스크를 착용합니다. 테스트는 여성의 경우 50와트, 남성의 경우 75와트에서 시작되며, 지칠 때까지 매분 15와트씩 전력이 증가합니다. 최대 산소 섭취량(VO2max), 환기 역치, 최대 순환력이 결정됩니다.

운동 코호트 방문 2 및 3 시간 약속: 방문당 2시간 참가자는 방문 1 후 3~10일 및 방문 2 후 7~14일에 실험실로 돌아옵니다.

1. 운동 전 절차: 숙련된 채혈 전문의가 IV 카테터를 말초 팔 정맥에 삽입합니다. 운동 전 혈액 샘플(약 120mL)을 수집합니다.
2. 운동 프로토콜: 참가자는 5분간 미리 결정된 최대 산소 섭취량(VO2max)의 50%, 60%, 70%, 80%에 해당하는 출력으로 중간에서 격렬한 사이클링 운동을 20분간 진행합니다. 증분. 참가자는 이러한 시험 중에 지칠 정도로 운동하지 않습니다. 혈압 측정 및 인지된 운동량 평가는 운동 세션 중과 운동 직후 5분마다 수집됩니다.
3. 운동 중 혈액 샘플링: 추가 정맥 혈액 샘플(운동 중 총 용량: 80mL)은 운동 프로토콜의 다양한 단계에서 IV 카테터를 통해 수집됩니다.
4. 운동 후 혈액 채취: 운동 후 1시간 후에 최종 혈액 15mL를 채취합니다.

총 혈액량: 참가자는 방문당 총 215mL(운동 전 120mL, 운동 중 80mL, 운동 후 15mL)의 혈액을 기증하며, 두 번의 방문에서 총 430ml를 기부합니다. 또한, 1차 방문 동안 스크리닝 목적으로 몇 방울의 모세혈관 혈액(약 10-20μL)을 수집합니다.

2차 방문과 3차 방문의 절차는 동일합니다. 두 번의 방문에 대한 이론적 근거는 동일한 기증자로부터 여러 치료용 세포 제품을 생성하기에 충분한 혈액을 확보하는 것입니다. 이 코호트에 할당된 총 시간은 약 5시간입니다.

운동 + 베타 차단제 코호트

시간 약속: 21시간 운동 + 베타 차단제 코호트 참가자는 6~10주에 걸쳐 오전 8시부터 10시 사이에 6개의 개별 세션을 위해 실험실을 방문할 예정입니다. 방문할 때마다 연구 직원은 사전 테스트 지침(예: 8~12시간 금식 및 격렬한 신체 활동 없음)을 준수하는지 확인합니다. 이 지침을 충족하지 않는 참가자는 일정이 변경됩니다.

운동 + 베타 차단제 코호트 방문 1 - 등급별 운동 테스트 시간 약속: 60분. 참가자는 최대 산소 섭취량(VO2max)과 최대 사이클링 파워를 결정하기 위해 실내 고정 자전거에서 등급별 운동 테스트를 완료하게 됩니다. 이 테스트는 후속 운동 시도에 적합한 강도 수준을 보장합니다.

운동 + 베타 차단제 코호트 방문 2-6 - 운동 시험 시간 약속: 20시간

나머지 5회 방문은 주요 운동 시험으로 구성되며 참가자는 다음 절차를 거칩니다. 회복을 허용하고 투여된 약물의 잠재적인 이월 효과를 최소화하기 위해 각 운동 시험 방문 사이에 7-10일의 기간이 있습니다.

1. 약물 관리: 약물 시험은 실험자나 참가자 모두 어떤 시험이 진행되고 있는지 알 수 없도록 블록, 무작위 이중 맹검 설정으로 수행됩니다. 무작위 배정은 운동 시험 수행에 참여하지 않은 연구팀 구성원이 계산합니다. 약물 투여 시기는 각 약물의 최고 혈장 농도에 따라 결정됩니다. 각 운동 시험 3시간, 2시간, 1시간 전에 참가자에게는 다음 개요에 따라 약물 또는 위약 알약이 투여됩니다.

   시험 1: 모든 시점에서 위약 시험 2: 3시간 Nadolol 2시간 및 1시간 위약 시험 3: Bisoprolol 3시간 2시간 및 1시간 위약 시험 4: 3시간 및 1시간 위약, Carvedilol 2 시험 5: Bisoprolol 3시간, 위약 2시간, Roflumilast 1시간

2. 약물 전 절차: 약물이나 위약을 섭취하기 전에 숙련된 정맥절개 전문의가 IV 카테터를 말초 팔 정맥에 삽입합니다. 약물 투여 전 혈액 샘플을 수집합니다.
3. 약물 후, 운동 전 혈액 샘플: 약물 또는 위약을 섭취한 후 운동 시작 30분 전, 약물 후, 운동 전 혈액 샘플을 수집합니다.
4. 운동 프로토콜: 참가자는 미리 결정된 VO2max의 50%, 60%, 70%, 80%에 해당하는 출력에서 ​​5분 단위로 중간에서 격렬한 사이클링 운동을 20분간 진행합니다. 참가자는 이러한 시험 중에 지칠 정도로 운동하지 않습니다. 혈압 측정 및 인지된 운동량 평가는 운동 세션 중과 운동 직후 5분마다 수집됩니다.
5. 운동 중 혈액 샘플링: 운동 프로토콜 전반에 걸쳐 다양한 시점에 IV 카테터를 통해 추가 정맥 혈액 샘플이 수집됩니다.
6. 운동 후 회복 혈액 샘플: 회복 단계 동안 운동 후 5~60분 범위의 다양한 시점에서 추가 혈액 샘플을 수집합니다.

총 혈액량: 이 코호트의 참가자는 방문당 총 약 220mL의 혈액을 기증합니다. 6회 방문 전체에 걸쳐 이 코호트의 누적 총 혈액량은 약 1,320mL입니다.

이소프로테레놀 코호트 이소프로테레놀 코호트 참가자는 08:00부터 10:00까지 세 번의 개별 세션을 위해 실험실을 방문할 예정입니다. 방문할 때마다 연구 직원은 사전 테스트 지침(예: 8~12시간 금식 및 격렬한 신체 활동 없음)을 준수하는지 확인합니다. 이 지침을 충족하지 않는 참가자는 일정이 변경됩니다.

이소프로테레놀 집단 방문 1: 선별 및 이소프로테레놀 주입 시간 약속: 2시간

1. 사전 동의: 연구팀의 구성원은 참가자로부터 서면 동의를 얻습니다.
2. 사전 심사 설문지: 참가자는 AHA/ACSM 사전 심사 설문지를 작성하여 포함 및 제외 기준이 충족되는지 확인합니다.
3. 인체 측정: 키와 몸무게를 측정합니다.
4. 혈액 샘플: 자동 휴대용 분석기(Cardiocheck)를 사용하여 총 콜레스테롤 및 공복 혈당 정량을 위해 손가락 채혈 모세혈관 혈액 샘플을 수집합니다(멸균 스프링 장착 랜싯 사용).
5. 혈압 측정: 안정시 혈압은 수동 또는 자동 혈압 커프를 사용하여 측정됩니다.
6. 위험 계층화: 심사 후 부적격으로 간주된 참가자는 추가 참여에서 제외됩니다.
7. 주입 전 절차: 참가자는 심전도(ECG, 12-리드)에 부착된 전극을 장착하고 휴식 중인 ECG 판독값을 받게 되며 이를 심장전문의가 모니터링합니다. 심장 전문의는 주입을 진행할지 아니면 연구에서 참가자를 제외할지 결정을 내릴 것입니다. 두 개의 IV 카테터는 숙련된 사혈 전문의에 의해 양측 말초 팔 정맥에 삽입됩니다. 하나의 카테터는 이소프로테레놀을 전달하는 데 사용되고 다른 하나는 혈액 샘플을 수집하는 데 사용됩니다. 주입 전 혈액 샘플(약 120mL)을 수집합니다.
8. 이소프로테레놀 주입 프로토콜: 참가자는 50ng/min/kg의 농도로 20분 동안 이소프로테레놀을 지속적으로 주입받게 됩니다. 주입 중 5분마다 혈압 측정을 수집하고 ECG 활동을 지속적으로 모니터링합니다. 의사 심장 전문의가 전체 주입 절차를 모니터링합니다.
9. 주입 중 혈액 샘플링: 주입 프로토콜의 마지막 5분 동안 IV 카테터를 통해 추가 정맥 혈액 샘플(운동 중 총 용량: 80mL)을 수집합니다.
10. 주입 후 혈액 채취: 운동 후 1시간 후에 최종 혈액 15mL를 채취합니다.

총 혈액량: 참가자는 이번 방문 동안 총 215mL의 혈액(주입 전 120mL, 주입 중 80mL, 주입 후 15mL)을 기증합니다. 또한, 1차 방문 동안 스크리닝 목적으로 몇 방울의 모세혈관 혈액(약 10-20μL)을 수집합니다.

결과 측정:

세 코호트 모두에 대한 결과 측정은 이 프로토콜의 '결과 측정' 섹션에 설명된 대로 동일합니다.