Harjoittelu immuunijärjestelmän adjuvanttina allogeenisissa soluterapioissa (Allo-X)

Tausta:

Allogeeniset soluterapiat kattavat erilaisia ​​lähestymistapoja, mukaan lukien luovuttajalymfosyytti-infuusiot (DLI) ja muokatut immuunisolutuotteet, kuten kimeerisen antigeenireseptorin (CAR) T-solut, gamma-delta (γδ) T-solut, sytokiini-indusoidut tappajasolut (CIK) ja sytokiinit -indusoidut muistin kaltaiset luonnolliset tappajasolut (NK). Näitä hoitoja käytetään yleisesti allogeenisen hematopoieettisen solusiirron (alloHCT) jälkeen leukemian uusiutumisen estämiseksi tai hoitamiseksi korkean riskin potilailla. Vaikka nämä hoidot ovat osoittaneet potentiaalia, DLI:n ja laajennettujen solujen tuotteiden onnistumisaste on edelleen rajallinen. Erityisesti DLI:llä on riski saada aikaan graft-versus-host -tauti (GvHD), jossa luovuttajan T-solut hyökkäävät terveitä kudoksia vastaan, mikä johtaa merkittävään sairastumiseen. Lisäksi paisutettu kennotuotteet kohtaavat valmistusaikoihin, tehokkuuteen ja kustannuksiin liittyviä haasteita, jotka voivat rajoittaa niiden saatavuutta ja tehokkuutta. Siksi on kriittinen tarve tehostaa DLI:n graft-versus-leukemia/lymfooma (GvL) -vaikutuksia ja parantaa laajennettujen solujen tuotteiden tehoa, jotta saavutettaisiin parempia tuloksia suuremmalla määrällä potilaita lisäämättä GvHD:n riskiä, ​​mikä laajentaa niiden käyttöä kliinisessä käytännössä.

Harjoittelun on osoitettu vähentävän syöpäriskiä, ​​parantavan syövästä selviytyneiden tuloksia ja toimivan adjuvanttina useissa syöpähoidoissa. Esillä oleva harjoitusmalli sisältää akuutin yksittäisen kohtalaisen tai voimakkaan intensiteetin harjoituksen, joka kestää 20 minuuttia, joka herättää katekoliamiinista riippuvaisen mobilisaation ja efektorilymfosyyttien (esim. luonnolliset tappajasolut, γδ T-solut ja CD8+ T-solut) uudelleenjakautumisen. Tämä vaste voi tehostaa pitkäaikaista immuunivalvontaa parantamalla pahanlaatuisten solujen tunnistamista ja tuhoamista ja myötävaikuttamalla kasvaimen kasvun suppressioon. Kokonaisvaltainen tutkimuskysymys on: Voidaanko lymfosyyttejä kerätä verestä harjoituksen aiheuttaman mobilisaatiovaiheen aikana tuottaakseen parempia solutuotteita syövän immunoterapiaa varten? Kokonaisnäkemys on kehittää harjoitukseen mobilisoituja lymfosyyttejä terapiaksi, joka lisää sekä DLI:n että laajennettujen solujen tuotteiden (esim. CAR T-solut, γδ T-solut, CIK-solut ja sytokiinin aiheuttamat muistin kaltaiset NK-solut) tehoa. leukemian/lymfooman uusiutumisen hoitoon. Tällä uudella lähestymistavalla, jota kutsutaan nimellä "DLI-X", on potentiaalia parantaa olemassa olevaa verisyöpähoitoa minimaalisin kustannuksin.

Tämän ehdotuksen tavoitteena on suorittaa suorat vertailut standardien DLI:n ja DLI-X:n välillä sekä in vitro että ksenogeenisissä hiirimalleissa, joihin on istutettu erilaisia ​​ihmisen hematologisia syöpiä, ja tunnistaa taustalla olevat mekanismit, jotka ohjaavat tehostunutta leukemiaa/ DLI-X:n lymfoomavaste.

Yleinen hypoteesi on, että DLI-X:llä ja näistä harjoitteluun mobilisoiduista lymfosyyteistä valmistetuilla solutuotteilla on tehostettu GvL-vaikutuksia useita hematologisia pahanlaatuisia kasvaimia vastaan ​​verrattuna standardiin DLI:hin. Näitä vaikutuksia ohjaavat β2-adrenergisen reseptorin (β2-AR) välittämät transkriptomiset ja proteomiset muutokset, jotka edistävät kohdesolujen tunnistamista ja sytotoksisuutta. Lisäksi on ehdotettu, että DLI-X parantaa yhdistelmähoitojen, kuten blinatumomabin, bispesifisen T-solun sitoutujan ja monoklonaalisten vasta-aineiden, jotka on suunniteltu lisäämään vasta-aineriippuvaista solusytotoksisuutta (ADCC) tehokkuutta, mikä tehostaa kasvaimen kasvun suppressiota ja DLI:n GvL-vaikutukset.

Erityiset tavoitteet:

1. Arvioi, kuinka akuutit, yksittäiset kohtalaisen tai voimakkaan intensiteetin harjoitukset, jotka kestävät 20 minuuttia, vaikuttavat veren immuunisolujen määrään, fenotyyppiin ja molekyyliominaisuuksiin.
2. Selvitä, tuottavatko harjoituksen jälkeen kerätyt immuunisolut parempia terapeuttisia tuotteita verrattuna samalta luovuttajalta lepo-olosuhteissa kerättyihin.
3. Tutki adrenergisen reseptorin signaloinnin roolia näiden vaikutusten välittämisessä

Toimenpiteet:

Terveet osallistujat rekrytoidaan kolmeen erilliseen tämän tutkimuksen haaraan (kohorttiin): (1) Harjoituskohortti; (2) Harjoitus + beetasalpaajan kohortti; ja/tai (3) Isoproterenoli-infuusiokohortti. Osallistujat voivat ilmoittautua yhteen, kahteen tai kaikkiin kolmeen tutkimusryhmään. Kunkin kohortin menettelyt on kuvattu alla.

Harjoituskohortti Harjoituskohortin osallistujien on määrä vierailla laboratoriossa kolmella erillisellä istunnolla klo 8.00-10.00. Jokaisen käynnin aikana henkilökunta vahvistaa testausta edeltävien ohjeiden noudattamisen (esim. 8-12 tunnin paasto ja ei voimakasta fyysistä aktiivisuutta). Jokainen osallistuja, joka ei täytä näitä ohjeita, ajoitetaan uudelleen.

Harjoituskohorttikäynti 1: seulonta ja arvosteltu harjoitustesti Aikasitoumus: 60 minuuttia

1. Tietoinen suostumus: Tutkimusryhmän jäsen saa kirjallisen suostumuksen osallistujalta.
2. Esiseulonnan kyselylomake: Osallistujat täyttävät AHA/ACSM-esitarkastuskyselylomakkeen varmistaakseen, että osallistumis- ja poissulkemiskriteerit täyttyvät.
3. Antropometriset mittaukset: Pituus ja paino mitataan.
4. Verinäytteet: Sormenpään kapillaariverinäyte kerätään (käyttäen steriiliä jousikuormitettua lansettia) kokonaiskolesterolin ja paastoglukoosin kvantifiointia varten käyttämällä automaattista kädessä pidettävää analysaattoria (Cardiocheck).
5. Verenpaineen mittaus: Lepoverenpaine mitataan manuaalisella tai automaattisella verenpainemansetilla.
6. Riskien jakautuminen: Osallistujat, joiden katsotaan kelpaamattomiksi seulonnan jälkeen, suljetaan pois jatkosta.
7. Arvosteltu harjoitustesti: Osallistujat suorittavat maksimaalisen harjoitusprotokollan kiinteällä sisäpyörällä. He käyttävät sykevyötä ja aineenvaihduntakärryyn kytkettyä kasvomaskia sykkeen ja hengityskaasujen jatkuvaa mittausta varten. Testi alkaa 50 watilla naisilla ja 75 watilla miehillä ja tehoa lisätään 15 wattia minuutissa uupumukseen asti. Maksimaalinen hapenottokyky (VO2max), hengityskynnys ja huippukierrosteho määritetään.

Harjoituskohorttivierailut 2 ja 3 Aikasitoumus: 2 tuntia käyntiä kohden Osallistujat palaavat laboratorioon 3-10 päivää käynnin 1 jälkeen ja 7-14 päivää käynnin 2 jälkeen.

1. Harjoitusta edeltävät toimenpiteet: Koulutettu flebotomisti asettaa IV-katetrin ääreiskäsivarren laskimoon. Ennen harjoittelua otetaan verinäyte (noin 120 ml).
2. Harjoitusprotokolla: Osallistujat harjoittelevat 20 minuutin istuntoa kohtalaista tai voimakasta pyöräilyä tehoilla, jotka vastaavat 50 %, 60 %, 70 % ja 80 % heidän ennalta määritetystä maksimaalisesta hapenottokyvystä (VO2max) 5 minuutin ajan. lisäyksiä. Osallistujia ei harjoiteta uupumukseen näiden kokeiden aikana. Verenpainemittaukset ja koetun rasituksen arvosanat kerätään 5 minuutin välein harjoituksen aikana ja välittömästi sen jälkeen.
3. Verinäytteet harjoituksen aikana: Laskimoverinäytteet (kokonaistilavuus harjoituksen aikana: 80 ml) otetaan IV-katetrin kautta harjoitusprotokollan eri vaiheissa.
4. Harjoituksen jälkeinen verenotto: Lopullinen 15 ml:n verenotto otetaan 1 tunti harjoituksen jälkeen.

Kokonaisveren tilavuus: Osallistujat luovuttavat yhteensä 215 ml verta (120 ml ennen harjoittelua, 80 ml harjoituksen aikana ja 15 ml harjoituksen jälkeen), eli yhteensä 430 ml molemmilla käynneillä. Lisäksi käynnin 1 aikana kerätään useita kapillaariveripisaroita (noin 10-20 µL) seulontatarkoituksiin.

Käyntien 2 ja 3 menettelyt ovat samat. Kahden käynnin perusteena on saada riittävästi verta useiden terapeuttisten solutuotteiden tuottamiseksi samalta luovuttajalta. Tämän kohortin kokonaisaika on noin 5 tuntia.

Harjoitus + beetasalpaaja -kohortti

Aikasitoumus: 21 tuntia Harjoitus + beetasalpaaja -kohortin osallistujat vierailevat laboratoriossa kuudella erillisellä istunnolla klo 8.00-10.00, jotka jakautuvat 6-10 viikolle. Jokaisen vierailun aikana tutkimushenkilöstö vahvistaa testausta edeltävien ohjeiden noudattamisen (esim. 8-12 tunnin paasto ja ei voimakasta fyysistä aktiivisuutta). Jokainen osallistuja, joka ei täytä näitä ohjeita, ajoitetaan uudelleen.

Harjoitus + beetasalpaajan kohorttikäynti 1 - Arvioitu harjoitustesti Aikasitoumus: 60 minuuttia. Osallistujat suorittavat asteittaisen harjoitustestin kiinteällä sisäpyörällä määrittääkseen maksimaalisen hapenottonsa (VO₂max) ja huippupyöräilytehonsa. Tämä testi varmistaa asianmukaiset intensiteettitasot myöhempiä harjoituskokeita varten.

Harjoitus + beetasalpaajan kohorttikäynnit 2–6 - Harjoituskokeet Aikasitoumus: 20 tuntia

Loput viisi käyntiä koostuvat pääharjoituskokeista, joissa osallistujat käyvät läpi seuraavat toimenpiteet. Jokaisen harjoituskokeilukäynnin välissä on 7-10 päivän tauko palautumisen mahdollistamiseksi ja annettavien lääkkeiden mahdollisten siirtymävaikutusten minimoimiseksi:

1. Lääkehoito: Lääkekokeet suoritetaan satunnaistetussa kaksoissokkoutetussa järjestelmässä sen varmistamiseksi, että kokeen tekijä tai osallistuja ei tiedä, mikä tutkimus tapahtuu. Satunnaistuksen laskee tutkimusryhmän jäsen, joka ei ole mukana harjoituskokeiden suorittamisessa. Lääkkeen antamisen ajoitus perustuu kunkin lääkkeen huippupitoisuuteen plasmassa. 3 tuntia, 2 tuntia ja 1 tunti ennen jokaista harjoituskoetta osallistujille annetaan joko lääkettä tai lumelääkettä seuraavan kaavan mukaisesti:

   Koe 1: Plasebo kaikkina aikoina Koe 2: Nadolol 3 tunnin kohdalla Placebo 2 tunnin ja 1 tunnin kohdalla Koe 3: Bisoprololi 3 tunnin kohdalla Plasebo 2 tunnin ja 1 tunnin kohdalla Koe 4: lumelääke 3 tunnin ja 1 tunnin kohdalla, karvediloli 2 tunnin kohdalla tuntia Koe 5: bisoprololi 3 tunnin kohdalla, lumelääke 2 tunnin kohdalla, roflumilasti 1 tunnin kohdalla

2. Lääkehoitoa edeltävät toimenpiteet: Ennen lääkkeen tai lumelääkkeen nauttimista koulutettu flebotomisti asettaa IV-katetrin perifeeriseen käsilaskimoon. Ennen lääkitystä otetaan verinäyte.
3. Verinäyte lääkkeen ja harjoituksen jälkeen: Lääkkeen tai lumelääkkeen nauttimisen jälkeen ja 30 minuuttia ennen harjoituksen alkamista otetaan verinäyte lääkkeen ottamisen jälkeen ennen harjoittelua.
4. Harjoitusprotokolla: Osallistujat harjoittelevat 20 minuutin istunnon kohtalaista tai voimakasta pyöräilyä tehoilla, jotka vastaavat 50 %, 60 %, 70 % ja 80 % heidän ennalta määritetystä VO₂maxistaan ​​5 minuutin välein. Osallistujia ei harjoiteta uupumukseen näiden kokeiden aikana. Verenpainemittaukset ja koetun rasituksen arvosanat kerätään 5 minuutin välein harjoituksen aikana ja välittömästi sen jälkeen.
5. Verinäytteiden otto harjoituksen aikana: Laskimoverinäytteet otetaan lisää IV-katetrin kautta eri ajankohtina harjoitusprotokollan aikana.
6. Harjoituksen jälkeiset toipumisverinäytteet: Lisää verinäytteitä kerätään toipumisvaiheen aikana eri ajankohtina, jotka vaihtelevat 5–60 minuuttia harjoituksen jälkeen.

Kokonaisveren määrä: Tämän kohortin osallistujat luovuttavat yhteensä noin 220 ml verta käyntiä kohden. Tämän kohortin kumulatiivinen kokonaisveren tilavuus kaikilla kuudella käynnillä on noin 1 320 ml.

Isoproterenolikohortti Isoproterenolikohortin osallistujat vierailevat laboratoriossa kolmessa erillisessä istunnossa klo 8.00-10.00. Jokaisen vierailun aikana tutkimushenkilöstö vahvistaa testausta edeltävien ohjeiden noudattamisen (esim. 8-12 tunnin paasto ja ei voimakasta fyysistä aktiivisuutta). Jokainen osallistuja, joka ei täytä näitä ohjeita, ajoitetaan uudelleen.

Isoproterenolikohorttikäynti 1: seulonta ja isoproterenoli-infuusioaika: 2 tuntia

1. Tietoinen suostumus: Tutkimusryhmän jäsen saa kirjallisen suostumuksen osallistujalta.
2. Esiseulonnan kyselylomake: Osallistujat täyttävät AHA/ACSM-esitarkastuskyselylomakkeen varmistaakseen, että osallistumis- ja poissulkemiskriteerit täyttyvät.
3. Antropometriset mittaukset: Pituus ja paino mitataan.
4. Verinäytteet: Sormenpään kapillaariverinäyte kerätään (käyttäen steriiliä jousikuormitettua lansettia) kokonaiskolesterolin ja paastoglukoosin kvantifiointia varten käyttämällä automaattista kädessä pidettävää analysaattoria (Cardiocheck).
5. Verenpaineen mittaus: Lepoverenpaine mitataan manuaalisella tai automaattisella verenpainemansetilla.
6. Riskien jakautuminen: Osallistujat, joiden katsotaan kelpaamattomiksi seulonnan jälkeen, suljetaan pois jatkosta.
7. Infuusiota edeltävät toimenpiteet: Osallistuja varustetaan elektrodeilla, jotka on kiinnitetty EKG:hen (EKG; 12-kytkentäinen), ja hän saa lepo-EKG-lukeman, jota lääkärin kardiologi tarkkailee. Kardiologi päättää, jatketaanko infuusiota vai jätetäänkö osallistuja pois tutkimuksesta. Koulutettu flebotomisti asettaa kaksi IV-katetria kahdenvälisiin ääreislaskimoihin. Yhtä katetria käytetään isoproterenolin annosteluun ja yhtä verinäytteiden keräämiseen. Ennen infuusiota otetaan verinäyte (noin 120 ml).
8. Isoproterenoli-infuusioprotokolla: Osallistujat saavat jatkuvan isoproterenoli-infuusion 20 minuutin ajan pitoisuudella 50 ng/min/kg. Verenpainemittaukset kerätään 5 minuutin välein infuusion aikana ja EKG-aktiivisuutta seurataan jatkuvasti. Lääkäri kardiologi valvoo koko infuusioprosessia.
9. Verinäytteet infuusion aikana: Lisää laskimoverinäytteitä (kokonaistilavuus harjoituksen aikana: 80 ml) otetaan IV-katetrin kautta infuusioprotokollan viimeisen 5 minuutin aikana.
10. Infuusion jälkeinen verenotto: Lopullinen 15 ml:n verinäyte otetaan 1 tunti harjoituksen jälkeen.

Kokonaisveren tilavuus: Osallistujat luovuttavat yhteensä 215 ml verta (120 ml ennen infuusiota, 80 ml infuusion aikana ja 15 ml infuusion jälkeen) tämän vierailun aikana. Lisäksi käynnin 1 aikana kerätään useita kapillaariveripisaroita (noin 10-20 µL) seulontatarkoituksiin.

Tulostoimenpiteet:

Kaikkien kolmen kohortin tulosmittaukset ovat identtisiä tämän pöytäkirjan "Tulosmittaukset"-osiossa kuvatulla tavalla.