Hyperoxie, erytropoéza a mikrocirkulace u kriticky nemocných pacientů

Zásahy:

Celkem bylo zařazeno čtyřicet pacientů. Prvních 20 pacientů (skupina s hyperoxií) podstoupilo 2hodinové období normobarické hyperoxie (FiO2 1,0) podle protokolu použitého v. U ostatních 20 pacientů (kontrolní skupina) nebyla aplikována žádná změna FiO2. Všichni pacienti byli zařazeni ráno a hyperoxie byla provedena v časovém rozmezí 10-14 hodin, aby se minimalizovala variabilita způsobená cirkadiánním rytmem produkce EPO. Během období studie nebyly aplikovány žádné změny sedace nebo dávky vasopresoru.

Měření:

V den studie byla měření prováděna ve 2hodinových intervalech: výchozí hodnota (t0), pod 1,0 FiO2 (t1) a po návratu na výchozí hodnotu FiO2 (t2). Ty zahrnovaly: tělesnou teplotu, srdeční frekvenci (HR), střední arteriální tlak (MAP), saturaci arteriálního kyslíku (SaO2), arteriální parciální tlak kyslíku (PaO2) a oxidu uhličitého (PaCO2), PaO2/FiO2, arteriální pH, hydrogenuhličitan, bazický nadbytek) a centrální žilní saturace (ScvO2) krevní plyny, arteriální laktáty, hodnocení sublingvální mikrocirkulace a okysličení tkání. Stejná měření byla provedena v kontrolní skupině ve 2hodinových intervalech. U 24 pacientů (12 pacientů na skupinu) byly v každém časovém bodě odebrány vzorky arteriální krve (10 ml) a okamžitě centrifugovány; plazma a sérum byly skladovány při -70 °C pro následné analýzy. EPO v séru, počet retikulocytů, hemoglobin (Hb) a hematokrit byly měřeny u všech pacientů v den studie v 8 hodin ráno, ve 24 a 48 hodin.

Měření mikrocirkulace se zobrazením v tmavém poli v bočním proudu Sublingvální mikrocirkulace byla hodnocena pomocí videomikroskopie v bočním proudu v tmavém poli (SDF) (Microscan, Microvision Medical, Amsterdam, NL). Tato technika byla podrobně popsána jinde.

Snímky nízké kvality byly vyřazeny a byly vybrány tři snímky pro každý časový bod a analyzovány pomocí počítačového softwarového balíčku (Automated Vascular Analysis Software; Microvision Medical BV). Podle konsensuální zprávy o výkonu a hodnocení mikrocirkulace pomocí zobrazení SDF, celková hustota cév (TVD), hustota perfundovaných cév (PVD), De Backerovo skóre, podíl perfundovaných cév (PPV), index mikrocirkulačního průtoku (MFI), průtok index heterogenity (FHI) a rychlost průtoku krve (BFV) byly vypočteny v malých nebo středních cévách (průměr ≤ nebo >20 μm, v tomto pořadí), jak bylo popsáno dříve. Kromě diskontinuálních mikrovaskulárních měření ve 2hodinových intervalech vyšetřovatelé hodnotili časnou odpověď mikrocirkulace na změny FiO2 na jednom a tom samém místě sublingvální sliznice, aby detekovali i nepatrné změny v mikrovaskulární hustotě a průtoku. Přímo po získání měření z 5 různých míst byla sonda SDF umístěna do stabilní polohy a manipulována, aby se zabránilo jakýmkoli tlakovým artefaktům nebo sekretům, které by rušily analýzu. Ruční podporou mikroskopu bylo prováděno nepřetržité nahrávání videa po dobu alespoň 2 minut během změny FiO2 (začátek nebo konec hyperoxie). Následně byly vybrány a analyzovány videoklipy o délce 10 s (2 na časový bod) odpovídající před (základní hodnota nebo 2h FiO2 1,0) a po (2 min FiO2 1,0 nebo 2 min po návratu na výchozí hodnotu FiO2) variace FiO2.

Hodnocení okysličení periferních tkání a mikrovaskulární reaktivity pomocí blízké infračervené spektroskopie.

Reflexní spektrofotometrie v blízké infračervené oblasti (NIRS) (InSpectra™ Model 650; Hutchinson Technology Inc., Hutchinson, USA) byla použita k měření saturace periferní tkáně kyslíkem (StO2) a tkáňového Hb indexu (THI) na začátku a během testu vaskulární okluze ( HLASOVÁNÍ). Na kůži eminence thenaru byla umístěna sonda o velikosti 15 mm a manžeta sfygmomanometru byla umístěna kolem (horní) paže, aby se uzavřela brachiální tepna. Po 3 minutách stabilizace signálu StO2 byl arteriální přítok zastaven nafouknutím manžety na 50 mmHg nad systolický arteriální tlak. Manžeta byla udržována nafouknutá, dokud se StO2 nesnížil na 40 %, a poté byla uvolněna. StO2 byl nepřetržitě zaznamenáván během reperfuzní fáze až do stabilizace. StO2 downslope (%/min) byl vypočítán z regresní přímky první minuty poklesu StO2 po okluzi, poskytující index rychlosti spotřeby O2. Upslope StO2 (%/minutu) byl získán z regresní přímky zvýšení StO2 v reperfuzní fázi. Byla také vypočtena plocha pod křivkou (AUC) hyperemické odpovědi. Upslope StO2 a AUC StO2 odrážejí mikrovaskulární reaktivitu. Všechny parametry byly vypočteny za použití počítačového softwarového balíčku (verze 3.03 InSpectra Analysis Program; Hutchinson Technology Inc.).

Imunologické testy:

Hladiny ROS a GSH byly měřeny v souladu s pokyny výrobce.

Statistická analýza:

Statistická analýza byla provedena pomocí GraphPad Prism verze 6 (GraphPad Software, USA). Normálnost distribuce byla ověřena pomocí Kolmogorova-Smirnovova testu. Data byla prezentována jako průměr ± standardní odchylka nebo medián [1.-3. kvartil], podle potřeby. K vyhodnocení změn v čase ve stejné skupině byla použita jednosměrná analýza rozptylu (ANOVA) pro opakovaná měření s Bonferroniho post-hoc testem nebo Friedmanův test s Dunnovým vícenásobným srovnávacím testem. Dvoucestná ANOVA pro opakovaná měření s Bonferroniho post-hoc testem byla použita k vyhodnocení rozdílů mezi těmito dvěma skupinami, kde to bylo vhodné. Pro nenormálně rozložené proměnné byl použit Mann-Whitney U test k vyhodnocení rozdílu mezi dvěma skupinami ve stejném časovém bodě. Pro posouzení korelací mezi proměnnými byl vypočten Spearmanův korelační koeficient. Hladina významnosti alfa byla stanovena a priori na 0,05.