Hiperoxia, Eritropoyesis y Microcirculación en Paciente Críticamente Enfermo

Intervenciones:

Cuarenta pacientes se inscribieron en total. Los primeros 20 pacientes (grupo de hiperoxia) se sometieron a un período de 2 horas de hiperoxia normobárica (FiO2 1,0), según el protocolo aplicado en. No se aplicó ninguna variación en la FiO2 para los otros 20 pacientes (grupo control). Todos los pacientes fueron reclutados por la mañana y la hiperoxia se realizó en el intervalo de tiempo entre las 10 am y las 2 pm para minimizar la variabilidad debida al ritmo circadiano de producción de EPO. No se aplicaron variaciones en la sedación ni en la dosis de vasopresores durante el período de estudio.

Mediciones:

El día del estudio, las mediciones se tomaron a intervalos de 2 horas: línea base (t0), por debajo de 1,0 FiO2 (t1) y después de volver a la línea base FiO2 (t2). Estos incluyeron: temperatura corporal, frecuencia cardíaca (FC), presión arterial media (PAM), saturación arterial de oxígeno (SaO2), presión arterial parcial de oxígeno (PaO2) y dióxido de carbono (PaCO2), PaO2/FiO2, pH arterial, bicarbonato, exceso de bases) y saturación venosa central (ScvO2), gases en sangre, lactatos arteriales, evaluación de la microcirculación sublingual y oxigenación tisular. Las mismas mediciones se realizaron en el grupo de control a intervalos de 2 horas. En 24 pacientes (12 pacientes por grupo), se tomaron muestras de sangre arterial (10 ml) en cada punto de tiempo y se centrifugaron inmediatamente; el plasma y el suero se almacenaron a -70°C para análisis posteriores. La EPO sérica, el recuento de reticulocitos, la hemoglobina (Hb) y el hematocrito se midieron a las 8 am en todos los pacientes el día del estudio, a las 24 y 48 horas.

Mediciones de microcirculación con imágenes de campo oscuro de corriente lateral La microcirculación sublingual se evaluó con videomicroscopía de campo oscuro de corriente lateral (SDF) (Microscan, Microvision Medical, Amsterdam, NL). Esta técnica ha sido descrita en detalle en otra parte.

Las imágenes de mala calidad se descartaron y se seleccionaron y analizaron tres imágenes para cada punto de tiempo utilizando un paquete de software informático (Automated Vascular Analysis Software; Microvision Medical BV). Según el informe de consenso sobre el rendimiento y la evaluación de la microcirculación utilizando imágenes SDF, la densidad total de vasos (TVD), la densidad de vasos perfundidos (PVD), la puntuación de De Backer, la proporción de vasos perfundidos (PPV), el índice de flujo microcirculatorio (MFI), el flujo El índice de heterogeneidad (FHI) y la velocidad del flujo sanguíneo (BFV) se calcularon en vasos pequeños o medianos (diámetro ≤ o > 20 μm, respectivamente), como se describió previamente. Además de las mediciones microvasculares discontinuas a intervalos de 2 horas, los investigadores evaluaron la respuesta temprana de la microcirculación a las variaciones en la FiO2 en un mismo sitio de la mucosa sublingual para detectar incluso cambios mínimos en la densidad y el flujo microvascular. Inmediatamente después de obtener mediciones de 5 sitios diferentes, la sonda SDF se colocó en una posición estable y se manipuló para evitar que cualquier artefacto de presión o secreciones interfirieran con el análisis. Apoyando manualmente el microscopio, se realizó una grabación de video continua durante al menos 2 minutos durante la variación de la FiO2 (inicio o fin de la hiperoxia). Posteriormente, se seleccionaron y analizaron videoclips de 10 s (2 por punto de tiempo) correspondientes al antes (línea base o 2h FiO2 1,0) y después (2 min FiO2 1,0 o 2 min después de volver a la línea base FiO2) de la variación de FiO2.

Evaluación de la oxigenación de tejidos periféricos y reactividad microvascular con espectroscopia de infrarrojo cercano.

Se utilizó espectrofotometría de reflectancia de infrarrojo cercano (NIRS) (InSpectra™ Model 650; Hutchinson Technology Inc., Hutchinson, EE. UU.) para medir la saturación de oxígeno tisular periférico (StO2) y el índice de Hb tisular (THI) al inicio del estudio y durante una prueba de oclusión vascular ( VOTO). Se colocó una sonda de 15 mm de tamaño sobre la piel de la eminencia tenar y se colocó un manguito de esfigmomanómetro alrededor del brazo (superior) para ocluir la arteria braquial. Después de un período de 3 minutos de estabilización de la señal de StO2, el flujo de entrada arterial se detuvo mediante el inflado del manguito a 50 mmHg por encima de la presión arterial sistólica. El manguito se mantuvo inflado hasta que la StO2 disminuyó al 40% y luego se soltó. StO2 se registró continuamente durante la fase de reperfusión hasta la estabilización. La pendiente descendente de StO2 (%/minuto) se calculó a partir de la línea de regresión del primer minuto de disminución de StO2 después de la oclusión, proporcionando un índice de la tasa de consumo de O2. La pendiente ascendente de StO2 (%/minuto) se obtuvo a partir de la línea de regresión del aumento de StO2 en la fase de reperfusión. También se calculó el área bajo la curva (AUC) de la respuesta hiperémica. La pendiente ascendente de StO2 y el AUC de StO2 reflejan la reactividad microvascular. Todos los parámetros se calcularon usando un paquete de software de computadora (versión 3.03 InSpectra Analysis Program; Hutchinson Technology Inc.).

Inmunoensayos:

Los niveles de ROS y GSH se midieron de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Análisis estadístico:

El análisis estadístico se realizó utilizando GraphPad Prism versión 6 (GraphPad Software, EE. UU.). La normalidad de la distribución se comprobó mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Los datos se presentaron como media ± desviación estándar o mediana [1er-3er cuartil], según correspondiera. Se utilizó el análisis de varianza unidireccional (ANOVA) para medidas repetidas con la prueba post-hoc de Bonferroni o la prueba de Friedman con la prueba de comparación múltiple de Dunn para evaluar los cambios a lo largo del tiempo en el mismo grupo. Se utilizó ANOVA de dos vías para medidas repetidas con la prueba post-hoc de Bonferroni para evaluar las diferencias entre los dos grupos, cuando correspondía. Para las variables que no se distribuyen normalmente, se aplicó la prueba U de Mann-Whitney para evaluar la diferencia entre los dos grupos en el mismo punto de tiempo. Se calculó un coeficiente de correlación de Spearman para evaluar las correlaciones entre variables. El nivel alfa de significación se fijó a priori en 0,05.