Hiperóxia, Eritropoiese e Microcirculação em Pacientes Críticos

Intervenções:

Quarenta pacientes foram inscritos no total. Os primeiros 20 pacientes (grupo hiperóxia) foram submetidos a um período de 2 horas de hiperóxia normobárica (FiO2 1,0), conforme protocolo aplicado em. Nenhuma variação na FiO2 foi aplicada para os outros 20 pacientes (grupo controle). Todos os pacientes foram incluídos no período da manhã e a hiperóxia foi realizada no intervalo de tempo entre 10h e 14h, a fim de minimizar a variabilidade devido ao ritmo circadiano de produção de EPO. Nenhuma variação na dose de sedação ou vasopressor foi aplicada durante o período do estudo.

Medidas:

No dia do estudo, as medições foram feitas em intervalos de 2 horas: basal (t0), abaixo de 1,0 FiO2 (t1) e após retornar à linha de base FiO2 (t2). Estes incluíram: temperatura corporal, frequência cardíaca (FC), pressão arterial média (PAM), saturação arterial de oxigênio (SaO2), pressão arterial parcial de oxigênio (PaO2) e dióxido de carbono (PaCO2), PaO2/FiO2, pH arterial, bicarbonato, excesso de base) e saturação venosa central (ScvO2) gasometria, lactato arterial, avaliação da microcirculação sublingual e oxigenação tecidual. As mesmas medidas foram realizadas no grupo controle em intervalos de 2 horas. Em 24 pacientes (12 pacientes por grupo), amostras de sangue arterial (10 mL) foram colhidas a cada momento e imediatamente centrifugadas; o plasma e o soro foram armazenados a -70°C para análises subsequentes. A EPO sérica, a contagem de reticulócitos, a hemoglobina (Hb) e o hematócrito foram medidos às 8h em todos os pacientes no dia do estudo, às 24 e 48 horas.

Medições da microcirculação com imagens de campo escuro de fluxo lateral A microcirculação sublingual foi avaliada com videomicroscopia de campo escuro (SDF) de fluxo lateral (Microscan, Microvision Medical, Amsterdam, NL). Esta técnica foi descrita em detalhes em outro lugar.

As imagens de baixa qualidade foram descartadas e três imagens para cada ponto de tempo foram selecionadas e analisadas usando um pacote de software de computador (Automated Vascular Analysis Software; Microvision Medical BV). De acordo com o relatório de consenso sobre o desempenho e avaliação da microcirculação usando imagens SDF, densidade total de vasos (TVD), densidade de vasos perfundidos (PVD), pontuação de De Backer, proporção de vasos perfundidos (PPV), índice de fluxo microcirculatório (MFI), fluxo o índice de heterogeneidade (FHI) e a velocidade do fluxo sanguíneo (VSF) foram calculados em vasos pequenos ou médios (diâmetro ≤ ou >20 μm, respectivamente), conforme descrito anteriormente. Além de medições microvasculares descontínuas em intervalos de 2 horas, os pesquisadores avaliaram a resposta precoce da microcirculação a variações na FiO2 em um único local da mucosa sublingual, a fim de detectar alterações mínimas na densidade e no fluxo microvascular. Logo após a obtenção das medições de 5 locais diferentes, a sonda SDF foi colocada em uma posição estável e manipulada para evitar quaisquer artefatos de pressão ou secreções que interferissem na análise. Apoiando manualmente o microscópio, foi realizada gravação contínua em vídeo por pelo menos 2 minutos durante a variação da FiO2 (início ou fim da hiperóxia). Clipes de vídeo de 10 s (2 por ponto de tempo) correspondentes a antes (linha de base ou 2h FiO2 1,0) e depois (2 min FiO2 1,0 ou 2 min após retornar à linha de base FiO2) a variação de FiO2 foram posteriormente selecionados e analisados.

Avaliação da oxigenação tecidual periférica e reatividade microvascular com espectroscopia de infravermelho próximo.

A espectrofotometria de reflectância de infravermelho próximo (NIRS) (InSpectra™ Modelo 650; Hutchinson Technology Inc., Hutchinson, EUA) foi usada para medir a saturação de oxigênio tecidual periférico (StO2) e o índice de Hb tecidual (THI) no início e durante um teste de oclusão vascular ( VOTO). Uma sonda de 15 mm foi colocada na pele da eminência tenar e um manguito de esfigmomanômetro foi colocado ao redor do braço (superior) para ocluir a artéria braquial. Após um período de 3 minutos de estabilização do sinal StO2, o influxo arterial foi interrompido pela insuflação do manguito até 50 mmHg acima da pressão arterial sistólica. O manguito foi mantido inflado até que o StO2 diminuísse para 40% e então liberado. A StO2 foi registrada continuamente durante a fase de reperfusão até a estabilização. O downslope do StO2 (%/minuto) foi calculado a partir da linha de regressão do primeiro minuto de queda do StO2 após a oclusão, fornecendo um índice da taxa de consumo de O2. O upslope do StO2 (%/minuto) foi obtido a partir da linha de regressão do aumento do StO2 na fase de reperfusão. A área sob a curva (AUC) da resposta hiperêmica também foi calculada. A subida de StO2 e a AUC de StO2 refletem a reatividade microvascular. Todos os parâmetros foram calculados usando um pacote de software de computador (versão 3.03 InSpectra Analysis Program; Hutchinson Technology Inc.).

Imunoensaios:

Os níveis de ROS e GSH foram medidos de acordo com as instruções do fabricante.

Análise estatística:

A análise estatística foi realizada usando GraphPad Prism versão 6 (GraphPad Software, EUA). A normalidade da distribuição foi verificada por meio do teste de Kolmogorov-Smirnov. Os dados foram apresentados como média ± desvio padrão ou mediana [1º-3º quartil], conforme apropriado. A análise de variância (ANOVA) de uma via para medidas repetidas com o teste post-hoc de Bonferroni ou o teste de Friedman com o teste de comparações múltiplas de Dunn foram usadas para avaliar as mudanças ao longo do tempo no mesmo grupo. ANOVA two-way para medidas repetidas com teste post-hoc de Bonferroni foi usado para avaliar as diferenças entre os dois grupos, quando aplicável. Para variáveis ​​não normalmente distribuídas, o teste Mann-Whitney U foi aplicado para avaliar a diferença entre os dois grupos no mesmo ponto de tempo. Um coeficiente de correlação de Spearman foi calculado para avaliar as correlações entre as variáveis. O nível alfa de significância foi estabelecido a priori em 0,05.