Vanad u preeklampsie s pozdním nástupem (Vanadium PE)

Tato observační případová-kontrolní studie byla provedena na oddělení porodnictví a gynekologie, Cengiz Gokcek Public Hospital, Gaziantep, Turecko, mezi březnem 2018 a červnem 2019. Protokol byl schválen Etickou komisí pro klinický výzkum Univerzity Gaziantep (referenční číslo: 2019/36). Studie se striktně držela zásad Helsinské deklarace. Všechny subjekty zahrnuté do studie poskytly ústní a písemný informovaný souhlas. Do studie bylo zařazeno 92 žen ve dvou skupinách.

Sběr dat a studijní intervence:

Diagnóza L-PrE, jak je definována Výborem pro terminologii American College of Obstetricians and Gynecologists (ACOG), je stanovena na základě přítomnosti proteinurie (vylučování bílkovin močí ≥ 300 mg ve vzorku moči za 24 hodin, nebo proteinurie ≥1+ v měrce) a hladina krevního tlaku ≥90/140 mmHg (dvě měření krevního tlaku s odstupem 6 hodin), ke které dochází po 34 týdnech těhotenství u dříve normotenzní ženy. Diastolický a/nebo systolický krevní tlak <110/160 mm Hg, byl akceptován jako mírný; a v případě, že tyto hodnoty překročily tuto úroveň, byl akceptován jako závažný. Každá žena ve sledované populaci podstoupila porodnické ultrazvukové vyšetření a fetální-materské vyšetření bylo provedeno jedním z autorů. Od všech subjektů byla získána porodnická anamnéza. Byly zaznamenány dempograické údaje jako věk, gravidita, parita, index tělesné hmotnosti (BMI) a gestační věk. Gestační věk byl stanoven výpočtem z poslední menstruace a podpořen ultrasonografickým měřením v prvním trimestru gestace. Po diagnóze L-PrE v ambulanci byly odebrány vzorky mateřské žilní plazmy pro měření hladin kadmia, olova a vanadu. Tyto vzorky se rychle centrifugovaly při 1500 g po dobu 10 minut, vzorky plazmy se oddělily a skladovaly při -80 °C až do dne měření. Všechny pacientky s L-PrE byly také hospitalizovány a jejich těhotenství bylo ukončeno. Vzorky kontrolních skupin byly získány při rutinním vyšetření v porodnické péči ve třetím trimestru těhotenství. Poté byly tyto těhotné ženy sledovány až do porodu. Obě skupiny byly porovnány z hlediska věku matky, BMI, týdne těhotenství, gravidity, parity, živě narozených, systolického/diastolického krevního tlaku, celkového proteinu ve vzorku moči, hemoglobinu, hematokritu, počtu krevních destiček, počtu bílých krvinek, močoviny, kyselina močová, albumin, dusík močoviny v krvi, kreatinin, jaterní testy (AST, ALT), dehydrogenáza kyseliny mléčné, koncentrace kadmia, olova a vanadu a hmotnost kojence při porodu. Malý pro gestační věk (SGA) novorozenec byl definován jako porodní hmotnost <10. percentil pro gestační věk s tureckým národním nomogramem jako referenční pro růst plodu. Vzorky byly přeneseny v krabicích ve formách na led do vědeckého a technologického aplikačního a výzkumného centra Yozgat Bozok University (Laboratoř pracovní a environmentální toxikologie) pro měření hladin těžkých kovů a stopových prvků. Frekvence konzumace mořských plodů byla rozdělena do čtyř kategorií: 2-3 za týden, 1-2 za týden, 1-2 za měsíc a vzácné. Kouření bylo rozděleno do 3 skupin (žádné, dříve kuřák a aktivní kouření). Pasivní kouření bylo také rozděleno do 2 skupin (ne a ano). Stupně vzdělání byly rozděleny do 4 skupin (negramotní, základní vzdělání, střední škola a vysoká škola). Obydlí žen byla klasifikována jako venkovská a městská. Kromě toho se bydliště žen rozdělilo buď na bydlení v blízkosti rušné ulice (kolem 100 metrů), nebo ne. Novorozenec malý pro gestační věk (SGA) byl definován jako porodní hmotnost <10. percentil pro gestační věk s tureckým národním nomogramem jako referenčním pro plod. růst.

Metoda vyvinutá Alijevem a kol. byl použit pro přípravu vzorků pro analýzu Jeden mililitr vzorků plazmy byl umístěn do vysokoteplotně odolných teflonových zkumavek v mikrovlnné troubě a 5 ml Suprapur® (Merck, Darmstadt, Německo) kyseliny dusičné (HNO3) a 5 ml ultra- byla přidána čistá voda. Všechny vzorky plazmy byly štěpeny pomocí mikrovlnného digesčního systému (Start D; Milestone, MD, USA). Po digesci byl každý vzorek upraven na celkový objem 20 ml s 9 ml ultračisté vody v 50 ml polypropylenové zkumavce. Kyselina dusičná (Suprapur®, 65 %) byla použita pro digesci vzorků a standardního referenčního materiálu. Pro ředění standardu (víceprvkový standard Chem-Lab, Zedelgem, Belgie) a přípravy vzorků byla použita ultračistá voda (Direct-Q®; Millipore, Darmstadt, Německo).

Tři kovy (kadmium, olovo a vanad) byly měřeny pomocí hmotnostní spektrometrie s indukčně vázaným plazmatem (Thermo Scientific ICAPQc, USA). Provozní parametry byly nastaveny následovně: radiofrekvenční výkon 1550 W, nebulizační plyn 0,96 l/min, plazmový plyn 0,88 l/min, tlak nebulizátoru 3,01 bar, doba prodlevy 0,01 milisekundy a teplota rozprašovací komory 3,7 °C. Vzorkovací sonda byla mezi injekcemi promývána oplachem ultračistou vodou po dobu 30 s, následně promýváním 2% HNO3 po dobu 45 s a nakonec oplachováním ultračistou vodou po dobu 45 sekund. Po promývacích krocích přístroj automaticky spustil další vzorek. K měření hladiny každého prvku byla použita 11bodová kalibrační křivka (0,5-500 ug/l). Byly vypočteny hodnoty r2 kalibračních křivek všech kovů a minimální hodnota byla 0,9994. Pro zajištění přesnosti výsledků bylo každé měření vzorků a standardů třikrát opakováno. Výsledky těchto měření ukázaly, že relativní směrodatná odchylka (RSD) nepřesáhla 5 %. Pro metodu validace byl použit certifikovaný referenční materiál (CRM-Seronorm™ Trace Elements Full Blood L-2, Sero AS, Billingstad, Norsko). Pro kontrolu stability a citlivosti přístroje byla použita směs vnitřních standardů (Hf) a byly také vypočteny střední a RSD hodnoty kovů. Odchylky každého měření kontroly kvality byly < 15 %. Relativní procentuální rozdíly v opakovaných analýzách byly < 5 % ve vzorcích a standardech.