Účinek terapie rázovou vlnou bez biologické a imunohistochemické analýzy. (ESWT)
Mechanický a fyziologický účinek netělesné terapie rázovou vlnou bez biologického stresu - histologická a imunohistochemická analýza
Informativní shrnutí: Extracorporeal shockwave therapy (ESWT) je nová metoda léčby estetických poruch v oblasti estetické medicíny, její mechanismy působení a fyziologické účinky slibují boj proti lokalizované akumulaci tuku, zlepšení vzhledu kůže, podporu neokolageneze a neovaskularizaci. V současné době existuje jen málo studií o ESWT, které mohou tvrdit tento přínos, ale léčba se ukázala jako bezpečná a nezpůsobuje u jednotlivců nežádoucí reakce.
Cíl: Pomocí experimentální studie zhodnotit fyziologické účinky a mechanismy ESWT působící na podkožní tukovou tkáň a přilehlé struktury.
Metodika: Randomizovaná experimentální klinická studie bude provedena u 30 žen s obezitou I., II. a III. stupně, které se účastnily multidisciplinární předoperační přípravné skupiny na bariatrickou operaci s předem naplánovanou operací. Účastníci obdrží aplikaci ESWT během několika hodin po operaci, nebo v týdnech před bariatrickou operací, během chirurgického výkonu bude odebrán malý vzorek podkožní tukové tkáně pro histologickou a imunohistochemickou analýzu.
Hypotézy: Pomocí histologické a imunohistochemické analýzy vzorku podkožní tukové tkáně mohou vyšetřovatelé identifikovat, jaký skutečný fyziologický účinek a mechanismus účinku má ESWT na podkožní tukovou tkáň, epidermis a přilehlé struktury, čímž se potvrdí přínos terapie.
Statistická analýza: Nejprve bude provedena deskriptivní analýza výsledků získaných při histologické analýze s frekvenčními tabulkami pro kategorické a popisné proměnné (průměr, směrodatná odchylka, medián, minimální a maximální hodnoty) pro spojité nebo numerické proměnné. Aby bylo možné porovnat hlavní proměnné mezi skupinami a počtem sezení, bude pro opakovaná měření použita analýza rozptylu (ANOVA). Pro srovnání mezi skupinami bude použit Tukeyův test. Hladina významnosti přijatá pro statistické testy bude 5 % nebo p < 0,05.
Přehled studie
Detailní popis
Procedury ESWT Účastníci absolvovali sedm terapeutických sezení ESWT dvakrát týdně, přičemž poslední sezení bylo asi dvacet minut před chirurgickým zákrokem bariatrické chirurgie, terapie byla provedena v oblasti 150 cm² na levé straně břišní oblasti, po bílé linka, často 15 Hz, se 4 000 000 ranami s energií 180 mJ a 15 mm nerezovou špičkou a 2 000 000 ranami s energií 100 mJ s 15 mm plastovou špičkou, pro skluz špičky bylo použito pleťové mléko Thork ® Essential Cosmetics Industry Lotion LTDA4925MED Anvis.05 / 2017-95.
Pro terapii bylo použito zařízení THORK Shock Wave® - IBRAMED-Industria Brasileira de Equipamentos Electromédicos EIRELI, schválené společností Anvisa nº 10360310036.
Přímá strana břicha účastníků byla použita jako kontrola a nedostala terapii ESWT.
Chirurgický zásah
Po provedení anestetického výkonu na začátku chirurgického zákroku bariatrické chirurgie odpovědný chirurg odebral dva úlomky kožní tkáně o průměrné velikosti 4 cm v průměru, jeden vzorek z oblasti předem ohraničené na levé straně břicha a druhý vzorek na straně kontralaterální, kde nebyla žádná hranice, považován za kontrolu.
Histologický postup Po odběru byl materiál uložen v nádobě s 10% formaldehydem po dobu 48 hodin. Vzorky byly zpracovány histotechnicky, zality do parafínu a poté nařezány rotačním mikrotomem na řezy o tloušťce 3-5 μm.
Pro morfologické hodnocení kožní tkáně a kolagenových buněk byla sklíčka obarvena hematoxylinem a eosinem (HE) a Massonovým trichromem (ab150686, Abcam, Cambridge, Spojené království). Sklíčka byla vyhodnocena světelnou mikroskopií s binokulárním mikroskopem (Nikon YS 100, Japonsko) upraveným s okulárem WSCF 10X / 18 a objektivy Nikon 4X / 0,10, 10X / 0,25, 40X / 0,65 a 100X / 1, 25.
Pro rozlišení typů kolagenových vláken bylo použito barvení Picrosirius Red (ab150681, Abcam). Po obarvení byla sklíčka analyzována pod polarizovaným světlem pomocí DMR mikroskopu (Leica) a byly pořízeny fotografie při 400násobném zvětšení, kolagenová vlákna byla odlišena pomocí jejich barvení a kolagenová vlákna typu I měla žlutooranžovou barvu. v některých případech dokonce červená a typ III se zeleným zbarvením, ke kvantifikaci analýz byl použit software ImageJ® (NIH, Bethesda, USA).
Všechny přípravky byly vyrobeny podle protokolu protilátek a standardizovány laboratoří patologické analýzy v Hospital de Clinicas da Unicamp.
Imunohistochemické postupy K provedení imunohistochemických reakcí byly parafinové bloky se vzorky kůže nařezány na tloušťku 3 μm a umístěny na podepsané sklíčka (3-aminopropyl-triethoxysilan, Sigma-Aldrich, USA). U všech reakcí byly provedeny pozitivní a negativní kontroly. Reakce byly prováděny podle dříve publikovaných protokolů
Stručně řečeno, tkáně byly podrobeny procesu odparafínování, rehydrataci a procesu blokování endogenní peroxidázy. Antigenní izolace byla prováděna s roztokem kyseliny ethylendiamintetraoctové (EDTA), pH 9,0, v elektrickém tlakovém hrnci po dobu 15 minut.
Pro imunohistochemickou analýzu byly použity následující protilátky, markery fibroblastových růstových faktorů (FGF) a jejich příslušné receptory: FGF1 (protilátka sc-55520, Santa Cruz Biotechnology, USA), FGF2 (protilátka sc-365106, Santa Cruz Biotechnology), FGFR1 (protilátka sc-121, Santa Cruz Biotechnology), FGFR2 (protilátka sc-122, Santa Cruz Biotechnology) a pro hodnocení buněčné proliferace byl použit marker Ki67 (protilátka ab92742, Abcam).
Reakce antigen-protilátka byla vyvinuta pomocí chromogenního substrátu (3,3 diaminobenzidin-DAB, Sigma-Aldrich). Poté byla sklíčka naskenována a digitálně analyzována také podle předchozích protokolů
Typ studie
Zápis (Aktuální)
Fáze
- Nelze použít
Kontakty a umístění
Studijní místa
-
-
SP
-
Campinas, SP, Brazílie, 13083-872
- UNICAMP
-
-
Kritéria účasti
Kritéria způsobilosti
Věk způsobilý ke studiu
Přijímá zdravé dobrovolníky
Pohlaví způsobilá ke studiu
Popis
Kritéria pro zařazení:
-
Studie bude zahrnovat pacienty:
- ženské pohlaví, starší 18 let;
- S obezitou I., II. a III. stupně;
- Pacient s chirurgickou indikací k bariatrické operaci;
- chirurgický zákrok typu bypass žaludku Roux-en-Y;
- Souhlaste s účastí a podepište formulář souhlasu;
Kritéria vyloučení:
- Mužské pohlaví;
- kouření;
- kognitivní omezení
- Přenašeči diabetes mellitus;
- Provedeno estetické ošetření břicha v posledním měsíci;
- Pacienti s kožními lézemi, jako je dermatitida a dermatóza;
- Pacienti s akutní hlubokou žilní trombózou (DVT);
- O rakovinových lézích nebo v jejich blízkosti;
- Pacienti s kardiostimulátory nebo jinými implantovanými elektronickými zařízeními.
Studijní plán
Jak je studie koncipována?
Detaily designu
- Primární účel: ZÁKLADNÍ_VĚDA
- Přidělení: NON_RANDOMIZED
- Intervenční model: SINGLE_GROUP
- Maskování: ŽÁDNÝ
Zbraně a zásahy
Skupina účastníků / Arm |
Intervence / Léčba |
|---|---|
|
ACTIVE_COMPARATOR: Léčebná skupina Thorck Shock Wave Ibramed (terapie ESWT) – smrt tukových buněk
Léčba rázovou vlnou byla provedena na levé straně břicha
|
Účastníci obdrželi léčebný protokol stanovený výrobcem zařízení Thork Shock Wave®, IBRAMED-Industria Brasileira de Equipamentos Electromédicos, Amparo, São Paulo schválený Anvisa č. 10360310036.
(Obrázek 1).
Parametry byly 4000 tisíc výstřelů s energií 180mJ a frekvencí 15Hz s 15mm nerezovou špičkou a 2000 výstřelů s energií 100mJ a frekvencí 15Hz s 15mm plastovou špičkou a pro skluz špičky byl použit Neutral Thork® Lotion, RMC .
Proběhlo sedm sezení ESWT, průměrná doba každého byla sedm minut, dvakrát týdně a sedmé sezení se konalo minut před chirurgickým zákrokem bariatrické chirurgie, terapie byla provedena v oblasti 150 cm² na levé straně břišní oblasti po střední čára.
Pravá strana břicha účastníků nedostala ESWT a byla označena jako kontrola.
|
|
NO_INTERVENTION: Bez zásahu.
nebyla provedena léčba rázovou vlnou na pravé straně břicha, která byla specifikována jako kontrolní skupina, nebyla provedena léčba rázovou vlnou na pravé straně břicha, která byla specifikována jako kontrolní skupina bez intervence.
|
Co je měření studie?
Primární výstupní opatření
Měření výsledku |
Popis opatření |
Časové okno |
|---|---|---|
|
Imunohistochemické postupy
Časové okno: jeden měsíc
|
Imunohistochemické reakce byly provedeny na řezech o tloušťce 3 μm, uspořádaných na silanizovaných sklíčkách. Použité protilátky byly: polyklonální anti-kaspáza3, monoklonální anti-štěpená kaspáza 3; monoklonální anti-CD68, monoklonální antihormonálně citlivá lipáza - HSL - a adipofilin. Po přípravě preparátů byly preparáty analyzovány DMR mikroskopem (Leica) a fotografie byly pořízeny při 400x zvětšení. Pro kvantifikaci analýz byl použit software ImageJ® (NIH, Bethesda, USA). Všechny reakce byly provedeny podle protokolu výrobce a všechny byly standardizovány laboratoří patologické analýzy Hospital de Clínicas da Unicamp. Kvantifikace imunobarvení byla provedena s ohledem na počet pozitivních buněk a intenzitu, s konečným skóre v rozmezí 0-300 |
jeden měsíc
|
Spolupracovníci a vyšetřovatelé
Vyšetřovatelé
- Vrchní vyšetřovatel: Debora Modena, Dr, University of Campinas, Brazil
Termíny studijních záznamů
Hlavní termíny studia
Začátek studia (AKTUÁLNÍ)
Primární dokončení (AKTUÁLNÍ)
Dokončení studie (AKTUÁLNÍ)
Termíny zápisu do studia
První předloženo
První předloženo, které splnilo kritéria kontroly kvality
První zveřejněno (AKTUÁLNÍ)
Aktualizace studijních záznamů
Poslední zveřejněná aktualizace (AKTUÁLNÍ)
Odeslaná poslední aktualizace, která splnila kritéria kontroly kvality
Naposledy ověřeno
Více informací
Termíny související s touto studií
Klíčová slova
Další relevantní podmínky MeSH
Další identifikační čísla studie
- shock wave
Informace o lécích a zařízeních, studijní dokumenty
Studuje lékový produkt regulovaný americkým FDA
Studuje produkt zařízení regulovaný americkým úřadem FDA
Tyto informace byly beze změn načteny přímo z webu clinicaltrials.gov. Máte-li jakékoli požadavky na změnu, odstranění nebo aktualizaci podrobností studie, kontaktujte prosím register@clinicaltrials.gov. Jakmile bude změna implementována na clinicaltrials.gov, bude automaticky aktualizována i na našem webu .