Effekt av sjokkbølgeterapi uten biologisk og immunhistokjemisk analyse. (ESWT)

ESWT-prosedyrer Deltakerne fikk syv ESWT-terapisesjoner to ganger i uken, den siste økten var omtrent tjue minutter før den kirurgiske prosedyren for fedmekirurgi, terapien ble utført i et område på 150 cm² på venstre side av mageregionen, etter den hvite linje, ofte 15Hz, med 4 000 000 skudd med 180 mJ energi og 15 mm tupp i rustfritt stål og 2 000 000 skudd med 100 mJ energi med 15 mm plastspiss, for tuppen ble det brukt en Thork ® Essential Cosmetics Industry Lotion 25150n º 25150n. / 2017- 95.

For terapi ble THORK Shock Wave®-utstyret - IBRAMED- Industria Brasileira de Equipamentos Electromédicos EIRELI, godkjent av Anvisa nr. 10360310036, brukt.

Den direkte siden av deltakernes mage ble brukt som kontroll og fikk ikke ESWT-behandling.

Kirurgisk prosedyre

Etter å ha utført bedøvelsesprosedyren i begynnelsen av den kirurgiske handlingen av fedmekirurgi, fjernet den ansvarlige kirurgen to fragmenter av kutant vev med en gjennomsnittlig størrelse på 4 cm i diameter, en prøve fra regionen tidligere avgrenset på venstre side av magen og den andre prøven på den kontralaterale siden hvor det ikke var noen avgrensning ansett som kontroll.

Histologisk prosedyre Etter oppsamling ble materialet lagret i en beholder med 10 % formaldehyd i 48 timer. Prøvene ble behandlet histoteknisk, innstøpt i parafin og deretter kuttet med en roterende mikrotom i seksjoner på 3-5 μm tykke.

For morfologisk evaluering av det kutane vevet og kollagencellene ble objektglassene farget med Hematoxylin og Eosin (HE) og Masson's Trichrome (ab150686, Abcam, Cambridge, Storbritannia). Objektglassene ble evaluert ved lysmikroskopi med et kikkertmikroskop (Nikon YS 100, Japan) tilpasset med et WSCF 10X / 18 okular og Nikon 4X / 0.10, 10X / 0.25, 40X / 0.65 og 100X / 1 linser, 2.

For å differensiere typene kollagenfibre ble Picrosirius Red-farging (ab150681, Abcam) brukt. Etter farging ble objektglassene analysert under polarisert lys med et DMR-mikroskop (Leica) og fotografier ble tatt med 400 × forstørrelse, kollagenfibrene ble differensiert ved hjelp av farging og type I kollagenfibre var guloransje i fargen. noen tilfeller til og med rød og type III med grønnfarging, for å kvantifisere analysene ble ImageJ®-programvaren (NIH, Bethesda, USA) brukt.

Alle preparater ble gjort etter protokollen for antistoffer og standardisert av laboratoriet for patologisk analyse ved Hospital de Clinicas da Unicamp.

Immunhistokjemiske prosedyrer For å utføre immunhistokjemiske reaksjoner ble parafinblokkene med hudprøvene kuttet til en tykkelse på 3 μm og plassert på signerte objektglass (3-aminopropyl-triethoxysilane, Sigma-Aldrich, USA). Positive og negative kontroller ble utført i alle reaksjoner. Reaksjonene ble utført i henhold til tidligere publiserte protokoller

Kort fortalt ble vevene utsatt for avvoksing, rehydrering og endogene peroksidaseblokkeringsprosesser. Antigenutvinning ble utført med en løsning av etylendiamintetraeddiksyre (EDTA), pH 9,0, i en elektrisk trykkoker i 15 minutter.

For immunhistokjemisk analyse ble følgende antistoffer, markører for fibroblastvekstfaktorer (FGF) og deres respektive reseptorer brukt: FGF1 (Antibody sc-55520, Santa Cruz Biotechnology, USA), FGF2 (Antibody sc-365106, Santa Cruz Biotechnology), FGFR1 (Antibody sc-121, Santa Cruz Biotechnology), FGFR2 (Antibody sc-122, Santa Cruz Biotechnology) og for å evaluere celleproliferasjon ble markøren Ki67 (Antibody ab92742, Abcam) brukt.

Antigen-antistoff-reaksjonen ble utviklet ved bruk av det kromogene substratet (3,3 diaminobenzidin-DAB, Sigma-Aldrich). Deretter ble lysbildene skannet og digitalt analysert også i henhold til tidligere protokoller