Effetto della terapia ad onde d'urto senza analisi biologica e immunoistochimica. (ESWT)
Effetto meccanico e fisiologico della terapia con onde d'urto non corporee senza stress biologico-analisi istologica e immunoistochimica
Riepilogo Informativo: La terapia con onde d'urto extracorporee (ESWT) è una nuova metodica per il trattamento dei disturbi estetici nell'ambito della medicina estetica, i suoi meccanismi d'azione e gli effetti fisiologici promettono di combattere l'accumulo di grasso localizzato, migliorare l'aspetto della pelle, favorire la neocolagenesi e la neovascolarizzazione. Attualmente ci sono pochi studi sull'ESWT che possono rivendicare questo beneficio, ma la terapia ha dimostrato di essere sicura e non genera reazioni avverse nei singoli individui.
Obiettivo: valutare gli effetti fisiologici ei meccanismi dell'ESWT che agiscono sul tessuto adiposo sottocutaneo e sulle strutture adiacenti attraverso uno studio sperimentale.
Metodi: verrà eseguito uno studio clinico sperimentale randomizzato su 30 donne con obesità di grado I, II e III che hanno partecipato al gruppo di preparazione preoperatoria multidisciplinare per la chirurgia bariatrica con intervento chirurgico precedentemente programmato. I partecipanti riceveranno l'applicazione ESWT entro ore dall'intervento chirurgico, o nelle settimane precedenti alla chirurgia bariatrica, durante la procedura chirurgica verrà prelevato un piccolo campione di tessuto adiposo sottocutaneo per l'analisi istologica e immunoistochimica.
Ipotesi: attraverso l'analisi istologica e immunoistochimica del campione di tessuto adiposo sottocutaneo, i ricercatori possono identificare quale reale effetto fisiologico e meccanismo d'azione l'ESWT ha sul tessuto adiposo sottocutaneo, sull'epidermide e sulle strutture adiacenti, confermando così i benefici della terapia.
Analisi statistica: Verrà inizialmente eseguita un'analisi descrittiva dei risultati ottenuti nell'analisi istologica, con tabelle di frequenza per variabili categoriali e descrittive (media, deviazione standard, mediana, valori minimi e massimi) per variabili continue o numeriche. Per confrontare le principali variabili tra gruppi e numero di sessioni, verrà utilizzata l'analisi della varianza (ANOVA) per misure ripetute. Per il confronto tra i gruppi verrà utilizzato il Tukey test. Il livello di significatività adottato per i test statistici sarà del 5% o p<0,05.
Panoramica dello studio
Descrizione dettagliata
Procedure ESWT I partecipanti hanno ricevuto sette sessioni di terapia ESWT due volte a settimana, l'ultima sessione circa venti minuti prima della procedura chirurgica di chirurgia bariatrica, la terapia è stata eseguita in un'area di 150 cm² sul lato sinistro della regione addominale, seguendo il bianco linea, frequentemente 15Hz, con 4.000.000 di scatti con energia 180mJ e punta in acciaio inossidabile da 15mm e 2.000.000 di colpi con energia 100mJ con puntale in plastica da 15mm, per il tip slip è stata utilizzata una Thork ® Essential Cosmetics Industry Lotion LTDA- MED Anvisa nº 25351.419510 / 2017-95.
Per la terapia è stata utilizzata l'apparecchiatura THORK Shock Wave® - IBRAMED- Industria Brasileira de Equipamentos Electromédicos EIRELI, approvata da Anvisa nº 10360310036.
Il lato diretto dell'addome dei partecipanti è stato utilizzato come controllo e non ha ricevuto la terapia ESWT.
Operazione chirurgica
Dopo aver eseguito la procedura anestetica all'inizio dell'atto chirurgico di chirurgia bariatrica, il chirurgo responsabile ha rimosso due frammenti di tessuto cutaneo con una dimensione media di 4 cm di diametro, un campione dalla regione precedentemente delimitata sul lato sinistro dell'addome e l'altro campione sul lato controlaterale dove non c'era demarcazione considerato come controllo.
Procedura istologica Dopo la raccolta, il materiale è stato conservato in un contenitore con formaldeide al 10% per 48 ore. I campioni sono stati processati istotecnicamente, inclusi in paraffina e poi tagliati con un microtomo rotante in sezioni di 3-5 μm di spessore.
Per la valutazione morfologica del tessuto cutaneo e delle cellule di collagene, i vetrini sono stati colorati con Hematoxylin and Eosin (HE) e Masson's Trichrome (ab150686, Abcam, Cambridge, Regno Unito). I vetrini sono stati valutati mediante microscopia ottica con un microscopio binoculare (Nikon YS 100, Giappone) adattato con un oculare WSCF 10X/18 e lenti Nikon 4X/0.10, 10X/0.25, 40X/0.65 e 100X/1, 25.
Per differenziare i tipi di fibre di collagene, è stata utilizzata la colorazione Picrosirius Red (ab150681, Abcam). Dopo la colorazione, i vetrini sono stati analizzati sotto luce polarizzata con un microscopio DMR (Leica) e sono state scattate fotografie a 400 ingrandimenti, le fibre di collagene sono state differenziate mediante la loro colorazione e le fibre di collagene di tipo I erano di colore giallo-arancio. alcuni casi anche rossi e di tipo III con colorazione verde, per quantificare le analisi è stato utilizzato il software ImageJ® (NIH, Bethesda, USA).
Tutti i preparati sono stati realizzati seguendo il protocollo degli anticorpi e standardizzati dal laboratorio di analisi patologiche dell'Hospital de Clinicas da Unicamp.
Procedure immunoistochimiche Per eseguire reazioni immunoistochimiche, i blocchi di paraffina con i campioni di pelle sono stati tagliati a uno spessore di 3 μm e posizionati su vetrini firmati (3-amminopropil-trietossisilano, Sigma-Aldrich, USA). Controlli positivi e negativi sono stati eseguiti in tutte le reazioni. Le reazioni sono state condotte secondo i protocolli precedentemente pubblicati
In breve, i tessuti sono stati sottoposti a processi di deparaffinazione, reidratazione e blocco della perossidasi endogena. Il recupero antigenico è stato eseguito con una soluzione di acido etilendiammina tetraacetico (EDTA), pH 9,0, in una pentola a pressione elettrica per 15 minuti.
Per l'analisi immunoistochimica sono stati utilizzati i seguenti anticorpi, marcatori di fattori di crescita dei fibroblasti (FGF) e i rispettivi recettori: FGF1 (Anticorpo sc-55520, Santa Cruz Biotechnology, USA), FGF2 (Anticorpo sc-365106, Santa Cruz Biotechnology), FGFR1 (Anticorpo sc-121, Santa Cruz Biotechnology), FGFR2 (Anticorpo sc-122, Santa Cruz Biotechnology) e per valutare la proliferazione cellulare è stato utilizzato il marcatore Ki67 (Anticorpo ab92742, Abcam).
La reazione antigene-anticorpo è stata sviluppata utilizzando il substrato cromogenico (3.3 diaminobenzidine-DAB, Sigma-Aldrich). Quindi i vetrini sono stati scansionati e analizzati digitalmente anche secondo i protocolli precedenti
Tipo di studio
Iscrizione (Effettivo)
Fase
- Non applicabile
Contatti e Sedi
Luoghi di studio
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SP
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Campinas, SP, Brasile, 13083-872
- UNICAMP
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Criteri di partecipazione
Criteri di ammissibilità
Età idonea allo studio
Accetta volontari sani
Sessi ammissibili allo studio
Descrizione
Criterio di inclusione:
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Lo studio includerà pazienti:
- genere femminile, di età superiore ai 18 anni;
- Con obesità di grado I, II e III;
- Paziente con indicazione chirurgica per chirurgia bariatrica;
- Procedura chirurgica di bypass gastrico tipo Roux-en-Y;
- Accettare di partecipare e firmare il modulo di consenso;
Criteri di esclusione:
- Genere maschile;
- fumare;
- limiti cognitivi
- Portatori di diabete mellito;
- Eseguito trattamento estetico sull'addome nell'ultimo mese;
- Pazienti con lesioni cutanee come dermatiti e dermatosi;
- Pazienti con trombosi venosa profonda acuta (TVP);
- Intorno o vicino a lesioni cancerose;
- Pazienti con pacemaker cardiaci o altri dispositivi elettronici impiantati.
Piano di studio
Come è strutturato lo studio?
Dettagli di progettazione
- Scopo principale: SCIENZA BASILARE
- Assegnazione: NON_RANDOMIZZATO
- Modello interventistico: SINGOLO_GRUPPO
- Mascheramento: NESSUNO
Armi e interventi
Gruppo di partecipanti / Arm |
Intervento / Trattamento |
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ACTIVE_COMPARATORE: Gruppo di trattamentoThorck Shock Wave Ibramed (terapia ESWT)- morte delle cellule adipose
Il trattamento con onde d'urto è stato eseguito sul lato sinistro dell'addome
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I partecipanti hanno ricevuto il protocollo di trattamento stabilito dal produttore del dispositivo Thork Shock Wave®, IBRAMED- Industria Brasileira de Equipamentos Electromédicos, Amparo, São Paulo approvato da Anvisa No. 10360310036.
(Figura 1).
I parametri erano 4.000 colpi con energia di 180 mJ e frequenza di 15 Hz con punta in acciaio inossidabile da 15 mm e 2.000 colpi con energia di 100 mJ e frequenza di 15 Hz con punta in plastica da 15 mm, e per lo slittamento della punta è stata utilizzata Neutral Thork® Lotion, RMC .
Si sono svolte sette sessioni di ESWT, il tempo medio di ciascuna era di sette minuti, due volte alla settimana e la settima sessione si è svolta pochi minuti prima dell'intervento chirurgico di chirurgia bariatrica, la terapia è stata eseguita in un'area di 150 cm² sul lato sinistro della regione addominale seguendo la linea mediana.
Il lato destro dell'addome dei partecipanti non ha ricevuto ESWT ed è stato definito come controllo.
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NESSUN_INTERVENTO: Senza intervento.
nessun trattamento con onde d'urto è stato eseguito sul lato destro dell'addome, che è stato specificato come gruppo di controllo nessun trattamento con onde d'urto è stato eseguito sul lato destro dell'addome, che è stato specificato come gruppo di controllo senza intervento.
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Cosa sta misurando lo studio?
Misure di risultato primarie
Misura del risultato |
Misura Descrizione |
Lasso di tempo |
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Procedure immunoistochimiche
Lasso di tempo: un mese
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Le reazioni immunoistochimiche sono state eseguite su sezioni spesse 3μm, disposte su vetrini silanizzati. Gli anticorpi utilizzati sono stati: policlonale anti-Caspase3, monoclonale anti-Cleaved Caspase 3; anti-CD68 monoclonale, lipasi monoclonale anti-ormone sensibile - HSL - e adipofilina. Dopo aver preparato i vetrini, sono stati analizzati con un microscopio DMR (Leica) e sono state scattate fotografie a 400 ingrandimenti. Per quantificare le analisi è stato utilizzato il software ImageJ® (NIH, Bethesda, USA). Tutte le reazioni sono state eseguite seguendo il protocollo dei produttori e tutte sono state standardizzate dal laboratorio di analisi patologica dell'Hospital de Clínicas da Unicamp. La quantificazione dell'immunocolorazione è stata eseguita considerando il numero di cellule positive e l'intensità, con punteggi finali compresi tra 0 e 300 |
un mese
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Collaboratori e investigatori
Investigatori
- Investigatore principale: Debora Modena, Dr, University of Campinas, Brazil
Studiare le date dei record
Studia le date principali
Inizio studio (EFFETTIVO)
Completamento primario (EFFETTIVO)
Completamento dello studio (EFFETTIVO)
Date di iscrizione allo studio
Primo inviato
Primo inviato che soddisfa i criteri di controllo qualità
Primo Inserito (EFFETTIVO)
Aggiornamenti dei record di studio
Ultimo aggiornamento pubblicato (EFFETTIVO)
Ultimo aggiornamento inviato che soddisfa i criteri QC
Ultimo verificato
Maggiori informazioni
Termini relativi a questo studio
Parole chiave
Termini MeSH pertinenti aggiuntivi
Altri numeri di identificazione dello studio
- shock wave
Informazioni su farmaci e dispositivi, documenti di studio
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