Anabolické vlastnosti řepky (ALPACA)

Screening a předběžné testování Abychom posoudili, zda jsou dobrovolníci způsobilí k účasti na této studii, pozveme je na univerzitu na screening. Na začátku screeningu bude vysvětlena celá experimentální studie a budou zodpovězeny případné otázky. Poté jsou dobrovolníci požádáni, aby si přečetli, vyplnili a podepsali formulář informovaného souhlasu. Po podepsání formuláře informovaného souhlasu bude způsobilost účastníka posouzena na základě kritérií pro zařazení a vyloučení. K dalšímu posouzení jejich způsobilosti budou účastníci požádáni o vyplnění lékařského dotazníku k posouzení jejich celkového zdravotního stavu, užívání léků, obvyklého příjmu potravy a fyzické aktivity (Příloha F1.1). Dále bude změřen krevní tlak. Bude stanovena tělesná hmotnost (s přesností 0,1 kg) a výška (s přesností 0,01 m) a tělesná kompozice bude posouzena pomocí skenu duální energetické rentgenové absorptiometrie (DEXA). Skenování DEXA je jednoduchý, neinvazivní postup. Na začátku procedury budou subjekty požádány, aby si lehly na skenovací stůl ve spodním prádle a během měření musí zůstat nehybné. Jak se skener pohybuje, duální energetický paprsek prochází cíleným úsekem kosterního svalstva a je měřen detektorem. Tento postup se opakuje, dokud není naskenováno celé tělo a trvá přibližně 3 minuty.

Screening se bude konat ráno a účastníci jsou instruováni, aby ráno nesnídali, aby se předešlo poruchám při skenování DEXA.

V případě neočekávaného lékařského nálezu během screeningu budou subjekty vždy upozorněny. Pokud si subjekt nepřeje dostávat toto oznámení, nemůže se studie zúčastnit.

Dále budou subjekty seznámeny a testovány na oboustrannou sílu na posilovacích strojích. Nejprve se účastníci zahřejí na cykloergometru po dobu 5 minut při 100W. Subjekty budou poučeny o správné technice vzpírání na každém cvičebním stroji (leg-press a extenze nohou) a vyplní standardizovaný testovací protokol pro stanovení měření maximální síly (1RM) pro každý cvičební stroj. Stručně řečeno, subjekty budou sedět na legpressu a stroji na prodlužování nohou a začnou se zahřátím ve 2 sériích po 10 opakováních s vlastními vahami. Poté bude zátěž zvýšena nad zahřívací váhu. Zatížení se bude zvyšovat po každém úspěšném zdvihu až do selhání, aby se určila maximální síla. Opakování je klasifikováno jako „platné“, pokud je účastník schopen absolvovat celý vlek kontrolovaným způsobem, bez pomoci.

Po úspěšném provedení screeningu bude naplánován testovací den. Aby se předešlo velkému vlivu menstruačního cyklu na měření metabolismu bílkovin, bude testovací den naplánován na prvních 10 dnů folikulární fáze.

Každý subjekt se zúčastní experimentálního testu trvajícího ~9 hodin. Subjekty budou instruovány, aby dorazily na univerzitu v 7:45 v noci na lačno a odpočívaly, což znamená, že účastníci nesmějí jíst a pít (kromě vody) od 22:00 noci před experimentálním pokusem. Budou instruováni, aby přijeli na univerzitu autem nebo veřejnou dopravou. Poté, co subjekty dorazí na univerzitu, požádáme je, aby si oblékli šortky, určili jejich tělesnou hmotnost a přiřadili je k posteli. Subjekty budou odpočívat v poloze na zádech a teflonový katétr bude vložen do vyhřívané dorzální ruční žíly a umístěn do horkého boxu (60 °C) pro odběr arterializované krve. Základní vzorek krve (sérum + plazma = 20 ml) bude odebrán v t= -210 min, aby se určila úroveň obohacení aminokyselinami před intervencí. Po odběru bazálního vzorku krve bude do antekubitální žíly kontralaterálního ramene zaveden druhý teflonový katétr pro stabilní izotopovou infuzi s aminokyselinami 13C6-fenylalanin a 2H2-tyrosin. Na začátku izotopové infuze se plazmatický fenylalanin a tyrosinový roztok naplní jednou dávkou roztoku indikátoru a přímo poté bude zahájena kontinuální infuze indikátoru.

Během celého experimentálního testovacího dne bude ruka s dorzálním ručním katetrem předehřívána po dobu 10 minut před každým odběrem krve v horkém boxu při 60 °C, aby se zvýšil průtok krve. To usnadňuje odběr krve a minimalizuje výměnu živin z krve do jiných tkání. Proto nám umožňuje odebírat z žíly krev bohatou na živiny (arterializovanou). Vzorky arterializované krve (10 ml) budou odebírány v t = -180, -120, -60 a 0 min, aby se vyhodnotilo obohacení plazmatického indikátoru během infuze indikátoru v klidovém období přes noc po vstřebání. Po 30 minutách před infuzí (t = -180), během kterých infuze indikátoru dosáhne ustáleného stavu, bude odebrána první svalová biopsie z m. vastus lateralis k určení obohacení pozadí. V čase t=-45 min bude provedeno cvičení odporového typu (40 minut). Následně, v t=0 min, bude odebrána druhá biopsie ze stejné nohy, aby se vyhodnotila rychlost syntézy bazálního svalového proteinu. Ihned po druhé biopsii subjekty požijí přidělený nápoj (20 g řepky nebo syrovátkového proteinu nebo nekalorické placebo). Subjekty budou instruovány, aby vypily nápoj do ~5 minut.

Po požití nápoje se stopky resetují (t= 0 min) a vzorky arterializované krve (10 ml) budou odebírány v čase t = 30, 60, 90, 120, 180, 240 a 300 min během postprandiálu. období pro vyhodnocení profilů a obohacení aminokyselin v plazmě. Pro stanovení postprandiální syntézy svalových proteinů (MPS) bude provedena další biopsie v t = 300 min po požití jídla z kontralaterální nohy. Svalová biopsie v t = 300 min nám umožňuje získat fyziologicky relevantní informace s ohledem na trvání anabolické odpovědi na příjem bílkovin v běžně používaném 5h postprandiálním období. Souhrnně pomocí získaných biopsií můžeme měřit syntézu svalových bílkovin v klidovém stavu (-180 - 0 min) a celé postprandiální období (0 - 300 min; hlavní výsledek).

Během testovacího dne budou odebrány celkem 3 svalové biopsie prostřednictvím 3 samostatných řezů, 2 biopsie z jedné nohy a 1 biopsie z druhé nohy. Během testovacího dne bude odebráno celkem 12 vzorků krve, první vzorek, který bude odebrán, bude 20 ml, další vzorky 10 ml, celkem 130 ml. Kromě toho budou pomocí dotazníků hodnoceny gastrointestinální (GI) příznaky v t = -60, 30 a 180 minutách a chutnost v t = 15 minut