Proprietà anaboliche della colza (ALPACA)

Screening e pre-test Per valutare se i volontari sono idonei a partecipare a questo studio, li inviteremo all'Università per uno screening. All'inizio della sessione di screening, verrà spiegato l'intero processo sperimentale e verrà data risposta a qualsiasi potenziale domanda. Successivamente, i volontari sono invitati a leggere, compilare e firmare il modulo di consenso informato. Dopo aver firmato il modulo di consenso informato, l'idoneità del partecipante sarà valutata in base ai criteri di inclusione ed esclusione. Per valutare ulteriormente la loro idoneità, ai partecipanti verrà chiesto di compilare un questionario medico per valutare la loro salute generale, l'uso di farmaci, l'assunzione abituale di cibo e l'attività fisica (Appendice F1.1). Successivamente, verrà valutata la pressione sanguigna. Saranno determinate la massa corporea (con una precisione di 0,1 kg) e l'altezza (con una precisione di 0,01 m) e la composizione corporea sarà valutata tramite una scansione DEXA (Dual Energy X-ray Absorptiometry). Una scansione DEXA è una procedura semplice e non invasiva. All'inizio della procedura, ai soggetti verrà chiesto di sdraiarsi su un tavolo di scansione indossando biancheria intima e dovranno rimanere immobili durante le misurazioni. Mentre lo scanner si muove, un raggio a doppia energia passa attraverso la sezione del muscolo scheletrico mirata e viene misurato da un rilevatore. Questa procedura viene ripetuta fino a quando l'intero corpo viene scansionato e richiede circa 3 minuti.

Le sessioni di screening si svolgeranno al mattino e ai partecipanti viene chiesto di non fare colazione al mattino per evitare perturbazioni nella scansione DEXA.

In caso di riscontro medico imprevisto durante lo screening, i soggetti verranno sempre avvisati. Se un soggetto non desidera ricevere questa notifica, non può partecipare allo studio.

Successivamente, i soggetti saranno familiarizzati e testati per la forza bilaterale sulle macchine per esercizi. Innanzitutto, i partecipanti si riscalderanno su un cicloergometro per 5 minuti a 100 W. I soggetti verranno istruiti sulla corretta tecnica di sollevamento pesi su ciascuna macchina per esercizi (leg-press ed estensione delle gambe) e completeranno un protocollo di test standardizzato per determinare una misurazione della forza massima (1RM) per ciascuna macchina per esercizi. In breve, i soggetti saranno seduti su una macchina leg press e leg extension e inizieranno con un riscaldamento di 2 serie da 10 ripetizioni con pesi scelti autonomamente. Quindi il carico verrà aumentato al di sopra del peso di riscaldamento. Il carico verrà aumentato dopo ogni sollevamento riuscito, fino al fallimento, per determinare la forza massima. Una ripetizione è classificata come "valida" se il partecipante è in grado di completare l'intero sollevamento in modo controllato, senza assistenza.

Quando lo screening sarà eseguito con successo, verrà programmato il giorno del test. Al fine di evitare un impatto maggiore del ciclo mestruale sulle misurazioni del metabolismo proteico, la giornata del test sarà programmata nei primi 10 giorni della fase follicolare.

Ogni soggetto parteciperà a una prova sperimentale della durata di ~9h. I soggetti saranno istruiti ad arrivare all'università alle 7:45 in uno stato notturno a digiuno e riposato, il che significa che i partecipanti non sono autorizzati a mangiare e bere (tranne l'acqua) dalle 22:00 della notte prima della prova sperimentale. Saranno istruiti a venire all'università in auto o con i mezzi pubblici. Dopo che i soggetti sono arrivati ​​all'Università, chiederemo loro di indossare i pantaloncini, determinare la loro massa corporea e assegnarli a un letto. I soggetti riposeranno in posizione supina e un catetere in teflon verrà inserito in una vena dorsale della mano riscaldata e posto in una scatola calda (60°C) per il prelievo di sangue arterializzato. Un campione di sangue di base (siero + plasma = 20 mL) verrà raccolto a t = -210 min per determinare il livello di arricchimento di aminoacidi prima dell'intervento. Dopo la raccolta del campione di sangue basale, un secondo catetere in teflon verrà inserito in una vena antecubitale del braccio controlaterale per l'infusione di isotopi stabili con gli aminoacidi 13C6-fenilalanina e 2H2-tirosina. All'inizio dell'infusione dell'isotopo, i pool plasmatici di fenilalanina e tirosina saranno caricati con una singola dose della soluzione di tracciante, subito dopo inizierà l'infusione continua di tracciante.

Durante l'intera giornata del test sperimentale, la mano con il catetere dorsale verrà preriscaldata per 10 minuti prima di ogni prelievo di sangue in una scatola calda a 60°C per aumentare il flusso sanguigno. Ciò facilita la raccolta del sangue e riduce al minimo lo scambio di nutrienti dal sangue ad altri tessuti. Pertanto, ci consente di raccogliere sangue ricco di sostanze nutritive (arterializzato) da una vena. Campioni di sangue arterializzato (10mL) saranno raccolti a t = -180, -120, -60, e 0 min per valutare gli arricchimenti del tracciante plasmatico durante l'infusione del tracciante nel periodo notturno post-assorbimento. Dopo un periodo di pre-infusione di 30 minuti (t = -180), durante il quale l'infusione del tracciante raggiunge lo stato stazionario, verrà prelevata una prima biopsia muscolare dal m. vastus lateralis per determinare l'arricchimento del fondo. A t=-45 min, verrà eseguita una sessione di esercizi di resistenza (40 minuti). Successivamente, a t= 0 min verrà prelevata una seconda biopsia dalla stessa gamba per valutare il tasso di sintesi proteica del muscolo basale. Immediatamente dopo la seconda biopsia, i soggetti ingeriranno la bevanda assegnata (20 g di colza o proteine ​​del siero di latte o un placebo non calorico). I soggetti saranno istruiti a consumare la bevanda entro ~ 5 min.

Dopo l'ingestione della bevanda, il cronometro verrà azzerato (t= 0 min) e i campioni di sangue arterializzato (10 mL) verranno raccolti a t = 30, 60, 90, 120, 180, 240 e 300 min durante il post-prandiale periodo per valutare i profili di aminoacidi plasmatici e gli arricchimenti. Per determinare la sintesi proteica muscolare postprandiale (MPS), verrà prelevata un'altra biopsia a t = 300 min dopo l'ingestione del pasto dalla gamba controlaterale. La biopsia muscolare a t = 300 min ci consente di ottenere informazioni fisiologiche rilevanti per quanto riguarda la durata della risposta anabolica all'assunzione di proteine ​​in un periodo postprandiale di 5 ore comunemente usato. Collettivamente, con le biopsie ottenute possiamo misurare la sintesi proteica muscolare nello stato di riposo (-180 - 0 min) e l'intero periodo postprandiale (0 - 300 min; risultato principale).

Durante la giornata del test, verranno prelevate un totale di 3 biopsie muscolari attraverso 3 incisioni separate, 2 biopsie da una gamba e 1 biopsia dall'altra gamba. In totale 12 volte verranno prelevati campioni di sangue durante la giornata del test, il primo campione che verrà raccolto sarà di 20 ml i campioni successivi di 10 ml, per un totale di 130 ml. Inoltre, i sintomi gastrointestinali (GI) saranno valutati a t = -60, 30 e 180 minuti e l'appetibilità a t = 15 min mediante questionari