Genterapi for kroniske granulomatøse sygdomme - Langtidsopfølgning

Dette er et fase I/II klinisk forsøg for at bestemme effektiviteten og sikkerheden af ​​en metode til ex vivo genterapi til behandling af både X-bundet gp91phox-deficient Chronic Granulomatous Disease (CGD) og autosomal recessiv p47phox-deficient CGD. CGD er en arvelig immundefekt, hvor neutrofiler og monocytter i blodet ikke formår at producere superoxid og andre antimikrobielle oxidanter, og patienter får tilbagevendende livstruende infektioner. 30 CGD-patienter af begge køn på mindst 5 år kan tilmeldes ud over de 5 patienter, der er inkluderet i første fase af dette forsøg. Patienter under 16 år skal have en aktiv infektion eller et nyligt tilbagefald af infektion på tidspunktet for indskrivningen. Patienter kan modtage op til 6 cyklusser af stamcellemobilisering til genterapi med intervaller på 4 uger eller længere. I op til de første 3 cyklusser vil en cyklus med stamcellemobilisering til genterapi begynde med 8 daglige subkutane injektioner af kombinationen af ​​flt3-ligand (flt3L) ved 50 mikrog/kg/dag plus granulocyt-makrofag kolonistimulerende faktor (GM -CSF) ved 5 mikrog/kg/dag til mobilisering af CD34+-celler. For 3 eller flere af cyklusserne med mobilisering af CD34+-celler til genterapi (op til maksimalt 6 cyklusser i alt), vil mobiliseringen begynde med 6 daglige injektioner af granulocytkolonistimulerende faktor (G-CSF) ved 10 mikrog/kg /dag. På de sidste to eller tre dage med marvvækstfaktoradministration til mobilisering af CD34+-celler vil patienterne have en afereseprocedure for at høste mononukleære blodceller, hvorved en cyklus med mobilisering og stamcellehøst afsluttes. CD34+ progenitorer vil blive udvalgt fra aferesesamlingen ved hjælp af Isolex (registreret varemærke) 300i anti-CD34 monoklonalt antistof/magnetisk perleselektionssystem. De oprensede CD34+-celler kan enten placeres direkte i kultur eller kan kryokonserveres i henhold til standard blodbankprocedure (frysning i autologt serum med 10% dimethylsufoxid {DMSO}) og opbevares frosset ved flydende nitrogentemperatur indtil optøning til ex vivo dyrkning og transduktion. Til en specifik genterapibehandling af intravenøst ​​infunderede, genkorrigerede stamceller vil de oprensede CD34+-stamceller, der er opsamlet, renset og frosset fra en eller flere mobiliseringscyklusser, blive optøet og derefter samlet på tidspunktet for placering i kultur til transduktion med virussen. vektor. CD34+-celler vil blive dyrket i PL2417 gaspermeable plastikbeholdere, der er blevet præcoatet med fibronectinfragment CH-296. Vækstmediet vil være serumfrit X-VIVO 10 (registreret varemærke) suppleret med 1 % humant serumalbumin, 100 ng/ml flt3-ligand, 50 ng/ml PIXY321 og 50 ng/ml stamcellefaktor (SCF). Dyrkede CD34+ progenitorer vil blive transduceret på hver af 3 eller 4 dage med enten MFGS-p47phox eller MFGS-gp91phox retrovirusvektorer. Retrovirusvektorerne er replikationsdefekte pakket i amfotropiske kappelinjer, der er konstrueret med CRIP-pakningselementerne (5' LTR-gag-pol-3'SV40polyA; 5'LTR-AMenv-3'SV40polyA). MFGS-p47phox er pakket i den murine psi-crip linje, mens MFGS-gp91phox er pakket i den humane 293-SPA linje. Den kliniske retrovirusvektorsupernatant vil være animalsk proteinfri og serumfri. Sikkerhedstestning for endotoksin, sterilitet og fravær af replikationskompetent retrovirus vil blive udført på retrovirus-producerende linier, viruspartikelpartier og transducerede celler. Transducerede CD34+-celler vil blive infunderet i CGD-patienten. Der vil således være i alt op til seks cyklusser med stamcellemobilisering, men fordi CD34+-cellerne fra en eller flere mobiliseringscyklusser kan kryokonserveres og derefter samles til dyrkning for at producere et enkelt genkorrigeret stamcelleprodukt til infusion, der kan være færre end seks omgange (og muligvis kun én runde) genterapibehandlinger for en patient, der deltager i denne undersøgelse. Blod vil blive testet med jævne mellemrum for udseende og persistens af neutrofiler, som er funktionelt korrigeret af genterapien. Effektivitetsmålet for denne undersøgelse er at tillade CGD-patienter at producere autologe genkorrigerede funktionelt normale NADPH-oxidase-positive neutrofiler til et niveau på mindst 1 ud af 1000 cirkulerende neutrofiler i mindst fire uger. Dette kan give kliniske fordele i form af øget værtsforsvar mod en igangværende eller potentiel infektion. Patienternes kliniske status vil blive overvåget for tegn på toksicitet. Information opnået fra denne undersøgelse vil give information, der er vigtig for at nå det endelige mål med udviklingen af ​​genterapi for CGD, som vil være en permanent kur mod denne lidelse.