Terapia genica per malattie granulomatose croniche - Follow-up a lungo termine

Si tratta di uno studio clinico di fase I/II per determinare l'efficacia e la sicurezza di un metodo di terapia genica ex vivo per il trattamento sia della malattia granulomatosa cronica (CGD) con deficit di gp91phox legata all'X sia della CGD con deficit di p47phox autosomica recessiva. La CGD è una deficienza immunitaria ereditaria in cui i neutrofili e i monociti del sangue non riescono a produrre superossido e altri ossidanti antimicrobici e i pazienti contraggono infezioni ricorrenti potenzialmente letali. Possono essere arruolati 30 pazienti con CGD di entrambi i sessi di almeno 5 anni di età in aggiunta ai 5 pazienti arruolati nella prima fase di questo studio. I pazienti di età inferiore a 16 anni devono avere un'infezione attiva o una recente ricaduta dell'infezione al momento dell'arruolamento. I pazienti possono ricevere fino a 6 cicli di mobilizzazione delle cellule staminali per la terapia genica a intervalli di 4 settimane o più. Fino ai primi 3 cicli, un ciclo di mobilizzazione delle cellule staminali per la terapia genica inizierà con 8 iniezioni sottocutanee giornaliere della combinazione di flt3-ligando (flt3L) a 50 micro g/kg/giorno più fattore stimolante le colonie di granulociti-macrofagi (GM -CSF) a 5 micro g/kg/giorno per la mobilizzazione delle cellule CD34+. Per 3 o più dei cicli di mobilizzazione delle cellule CD34+ per la terapia genica (fino a un massimo di 6 cicli totali), la mobilizzazione inizierà con 6 iniezioni giornaliere di fattore stimolante le colonie di granulociti (G-CSF) a 10 micro g/kg /giorno. Negli ultimi due o tre giorni di somministrazione del fattore di crescita del midollo per la mobilizzazione delle cellule CD34+, i pazienti verranno sottoposti a una procedura di aferesi per raccogliere cellule mononucleate del sangue, completando così un ciclo di mobilizzazione e raccolta di cellule staminali. I progenitori CD34+ saranno selezionati dalla collezione di aferesi utilizzando il sistema di selezione dell'anticorpo monoclonale anti-CD34/bead magnetico Isolex (marchio registrato) 300i. Le cellule CD34+ purificate possono essere poste direttamente in coltura o possono essere crioconservate secondo la procedura standard della banca del sangue (congelamento in siero autologo con 10% dimetilsufossido {DMSO}) e conservate congelate alla temperatura dell'azoto liquido fino allo scongelamento per la coltura ex vivo e la trasduzione. Per uno specifico trattamento di terapia genica di cellule staminali geneticamente corrette infuse per via endovenosa, le cellule staminali CD34+ purificate raccolte, purificate e congelate da uno o più cicli di mobilizzazione saranno scongelate e quindi riunite al momento del posizionamento in coltura per la trasduzione con il virus vettore. Le cellule CD34+ saranno coltivate in contenitori di plastica permeabili ai gas PL2417 che sono stati pre-rivestiti con frammento di fibronectina CH-296. Il terreno di coltura sarà X-VIVO 10 (marchio registrato) senza siero integrato con 1% di albumina sierica umana, 100 ng/ml flt3-ligand, 50 ng/ml PIXY321 e 50 ng/ml fattore di cellule staminali (SCF). I progenitori CD34+ in coltura saranno trasdotti ogni 3 o 4 giorni con vettori di retrovirus MFGS-p47phox o MFGS-gp91phox. I vettori di retrovirus sono confezionati con difetto di replicazione in linee di involucro anfotropo progettate con gli elementi di confezionamento CRIP (5' LTR-gag-pol-3'SV40polyA; 5'LTR-AMenv-3'SV40polyA). MFGS-p47phox è confezionato nella linea murina psi-crip, mentre MFGS-gp91phox è confezionato nella linea umana 293-SPA. Il supernato del vettore del retrovirus clinico sarà privo di proteine ​​animali e siero. I test di sicurezza per l'endotossina, la sterilità e l'assenza di retrovirus competenti per la replicazione saranno eseguiti sulle linee produttrici di retrovirus, sui lotti di particelle virali e sulle cellule trasdotte. Le cellule CD34+ trasdotte saranno infuse nel paziente con CGD. Pertanto, ci sarà un totale di fino a sei cicli di mobilizzazione delle cellule staminali, ma poiché le cellule CD34+ provenienti da uno o più cicli di mobilizzazione possono essere crioconservate e successivamente riunite per la coltura per produrre un singolo prodotto di cellule staminali con correzione genica per l'infusione, potrebbero esserci meno di sei cicli (e forse solo un ciclo) di trattamenti di terapia genica per un paziente che partecipa a questo studio. Il sangue sarà testato periodicamente per l'aspetto e la persistenza dei neutrofili che sono funzionalmente corretti dalla terapia genica. L'obiettivo di efficacia per questo studio è consentire ai pazienti affetti da CGD di produrre neutrofili NADPH ossidasi positivi funzionalmente corretti dal gene autologo a un livello di almeno 1 su 1000 neutrofili circolanti per almeno quattro settimane. Ciò può fornire benefici clinici sotto forma di una maggiore difesa dell'ospite contro un'infezione in corso o potenziale. Lo stato clinico dei pazienti sarà monitorato per qualsiasi evidenza di tossicità. Le informazioni ottenute da questo studio forniranno informazioni importanti per raggiungere l'obiettivo finale dello sviluppo della terapia genica per la CGD che sarà una cura permanente per questo disturbo.