Gentherapie für chronische granulomatöse Erkrankungen – Langzeit-Follow-up

Dies ist eine klinische Studie der Phase I/II zur Bestimmung der Wirksamkeit und Sicherheit einer Methode der Ex-vivo-Gentherapie zur Behandlung sowohl der X-chromosomalen gp91phox-defizienten chronischen granulomatösen Erkrankung (CGD) als auch der autosomal-rezessiven p47phox-defizienten CGD. CGD ist eine erbliche Immunschwäche, bei der Neutrophile und Monozyten im Blut kein Superoxid und andere antimikrobielle Oxidantien produzieren und die Patienten wiederkehrende lebensbedrohliche Infektionen bekommen. 30 CGD-Patienten beiderlei Geschlechts im Alter von mindestens 5 Jahren können zusätzlich zu den 5 Patienten, die in die erste Phase dieser Studie aufgenommen wurden, aufgenommen werden. Patienten unter 16 Jahren müssen zum Zeitpunkt der Aufnahme eine aktive Infektion oder einen kürzlichen Rückfall der Infektion haben. Die Patienten können bis zu 6 Zyklen der Stammzellmobilisierung für die Gentherapie in Abständen von 4 Wochen oder länger erhalten. Für bis zu den ersten 3 Zyklen beginnt ein Zyklus der Stammzellenmobilisierung für die Gentherapie mit 8 täglichen subkutanen Injektionen der Kombination aus flt3-Ligand (flt3L) mit 50 Mikrogramm/kg/Tag plus Granulozyten-Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (GM -CSF) mit 5 Mikrogramm/kg/Tag zur Mobilisierung von CD34+-Zellen. Bei 3 oder mehr Mobilisierungszyklen von CD34+-Zellen für die Gentherapie (bis zu einem Maximum von insgesamt 6 Zyklen) beginnt die Mobilisierung mit 6 täglichen Injektionen von Granulozyten-Kolonie-stimulierendem Faktor (G-CSF) mit 10 Mikrogramm/kg /Tag. An den letzten zwei oder drei Tagen der Verabreichung des Knochenmarkswachstumsfaktors zur Mobilisierung von CD34+-Zellen werden die Patienten einem Aphereseverfahren unterzogen, um mononukleäre Blutzellen zu entnehmen, wodurch ein Zyklus aus Mobilisierung und Stammzellenentnahme abgeschlossen wird. CD34+-Vorläufer werden aus der Apherese-Sammlung unter Verwendung des Isolex (eingetragenes Warenzeichen) 300i Anti-CD34-monoklonaler Antikörper/Magnetkügelchen-Selektionssystem selektiert. Die gereinigten CD34+-Zellen können entweder direkt in Kultur gegeben oder gemäß Standard-Blutbankverfahren (Einfrieren in autologem Serum mit 10 % Dimethylsulfoxid {DMSO}) kryokonserviert und bis zum Auftauen für die Ex-vivo-Kultur und -Transduktion bei flüssigem Stickstoff gefroren gelagert werden. Für eine spezifische gentherapeutische Behandlung von intravenös infundierten, genkorrigierten Stammzellen werden die gereinigten CD34+-Stammzellen, die aus einem oder mehreren Mobilisierungszyklen gesammelt, gereinigt und eingefroren wurden, aufgetaut und dann zum Zeitpunkt der Platzierung in Kultur zur Transduktion mit dem Virus gepoolt Vektor. CD34+-Zellen werden in gasdurchlässigen PL2417-Kunststoffbehältern kultiviert, die mit dem Fibronectin-Fragment CH-296 vorbeschichtet wurden. Das Wachstumsmedium ist serumfreies X-VIVO 10 (eingetragenes Warenzeichen), ergänzt mit 1 % Humanserumalbumin, 100 ng/ml flt3-Ligand, 50 ng/ml PIXY321 und 50 ng/ml Stammzellfaktor (SCF). Kultivierte CD34+-Vorläufer werden an jedem der 3 oder 4 Tage entweder mit MFGS-p47phox- oder MFGS-gp91phox-Retrovirusvektoren transduziert. Die Retrovirus-Vektoren sind replikationsdefekt verpackt in amphotropen Hülllinien, die mit den CRIP-Verpackungselementen konstruiert wurden (5' LTR-gag-pol-3'SV40polyA; 5'LTR-AMenv-3'SV40polyA). MFGS-p47phox ist in der murinen Psi-Crip-Linie verpackt, während MFGS-gp91phox in der humanen 293-SPA-Linie verpackt ist. Der Überstand des klinischen Retrovirus-Vektors ist frei von tierischem Protein und Serum. Sicherheitstests auf Endotoxin, Sterilität und Abwesenheit von replikationsfähigem Retrovirus werden an den Retrovirus-Erzeugerlinien, Viruspartikelchargen und transduzierten Zellen durchgeführt. Transduzierte CD34+-Zellen werden dem CGD-Patienten infundiert. Somit wird es insgesamt bis zu sechs Zyklen der Stammzellmobilisierung geben, aber da die CD34+-Zellen aus einem oder mehreren Mobilisierungszyklen kryokonserviert und dann später für die Kultur gepoolt werden können, um ein einzelnes Gen-korrigiertes Stammzellprodukt für die Infusion herzustellen, es kann weniger als sechs Runden (und möglicherweise nur eine Runde) von Gentherapiebehandlungen für einen Patienten geben, der an dieser Studie teilnimmt. Das Blut wird regelmäßig auf das Auftreten und die Persistenz von Neutrophilen getestet, die durch die Gentherapie funktionell korrigiert werden. Das Wirksamkeitsziel dieser Studie besteht darin, CGD-Patienten zu ermöglichen, autologe, genkorrigierte, funktionell normale NADPH-Oxidase-positive Neutrophile auf einem Niveau von mindestens 1 von 1000 zirkulierenden Neutrophilen für mindestens vier Wochen zu produzieren. Dies kann einen klinischen Vorteil in Form einer erhöhten Wirtsabwehr gegen eine laufende oder potenzielle Infektion bieten. Der klinische Zustand der Patienten wird auf Anzeichen von Toxizität überwacht. Die aus dieser Studie gewonnenen Informationen werden wichtige Informationen liefern, um das ultimative Ziel der Entwicklung einer Gentherapie für CGD zu erreichen, die eine dauerhafte Heilung dieser Störung sein wird.