Terapia genowa w przewlekłych chorobach ziarniniakowych - obserwacja długoterminowa

Jest to badanie kliniczne fazy I/II mające na celu określenie skuteczności i bezpieczeństwa metody terapii genowej ex vivo w leczeniu zarówno przewlekłej choroby ziarniniakowej (CGD) z niedoborem gp91phox sprzężonej z chromosomem X, jak i CGD dziedziczonej autosomalnie recesywnie z niedoborem p47phox. CGD jest dziedzicznym niedoborem odporności, w którym neutrofile i monocyty krwi nie wytwarzają nadtlenków i innych przeciwdrobnoustrojowych utleniaczy, a pacjenci mają nawracające, zagrażające życiu infekcje. Oprócz 5 pacjentów włączonych do pierwszej fazy tego badania można włączyć 30 pacjentów z CGD obojga płci w wieku co najmniej 5 lat. Pacjenci w wieku poniżej 16 lat muszą mieć czynne zakażenie lub niedawny nawrót zakażenia w momencie włączenia do badania. Pacjenci mogą otrzymać do 6 cykli mobilizacji komórek macierzystych do terapii genowej w odstępach 4 tygodni lub dłuższych. Przez maksymalnie 3 pierwsze cykle cykl mobilizacji komórek macierzystych do terapii genowej rozpocznie się od 8 codziennych wstrzyknięć podskórnych kombinacji ligandu flt3 (flt3L) w dawce 50 mikrog/kg mc./dobę plus czynnika stymulującego tworzenie kolonii granulocytów i makrofagów (GM -CSF) w dawce 5 mikrogramów/kg/dzień w celu mobilizacji komórek CD34+. W przypadku 3 lub więcej cykli mobilizacji komórek CD34+ do terapii genowej (łącznie do maksymalnie 6 cykli) mobilizacja rozpocznie się od 6 codziennych wstrzyknięć czynnika stymulującego tworzenie kolonii granulocytów (G-CSF) w dawce 10 mikrog/kg /dzień. W ostatnich dwóch lub trzech dniach podawania czynnika wzrostu szpiku kostnego w celu mobilizacji komórek CD34+ pacjenci będą poddani zabiegowi aferezy w celu pobrania jednojądrzastych komórek krwi, kończąc tym samym cykl mobilizacji i pobrania komórek macierzystych. Progenitory CD34+ zostaną wybrane z kolekcji z aferezy przy użyciu systemu selekcji przeciwciała monoklonalnego anty-CD34/kulek magnetycznych Isolex (zarejestrowany znak towarowy) 300i. Oczyszczone komórki CD34+ można albo umieścić bezpośrednio w hodowli, albo można je kriokonserwować zgodnie ze standardową procedurą banku krwi (zamrażanie w autologicznej surowicy z 10% dimetylosulfotlenkiem {DMSO}) i przechowywać zamrożone w temperaturze ciekłego azotu do rozmrożenia w celu hodowli ex vivo i transdukcji. W przypadku specyficznej terapii genowej poddanych infuzji dożylnej komórkom macierzystym z korekcją genów, oczyszczone komórki macierzyste CD34+ pobrane, oczyszczone i zamrożone z jednego lub więcej cykli mobilizacji zostaną rozmrożone, a następnie połączone w momencie umieszczenia w hodowli w celu transdukcji z wirusem wektor. Komórki CD34+ będą hodowane w przepuszczalnych dla gazu plastikowych pojemnikach PL2417, które zostały wstępnie pokryte fragmentem fibronektyny CH-296. Pożywką wzrostową będzie pozbawiona surowicy X-VIVO 10 (zarejestrowany znak towarowy) uzupełniona 1% albuminą surowicy ludzkiej, 100 ng/ml ligandu flt3, 50 ng/ml PIXY321 i 50 ng/ml czynnika komórek macierzystych (SCF). Hodowane prekursory CD34+ będą transdukowane co 3 lub 4 dni wektorami retrowirusowymi MFGS-p47phox lub MFGS-gp91phox. Wektory retrowirusowe są upakowane z defektem replikacji w amfotropowych liniach otoczki zaprojektowanych za pomocą elementów upakowania CRIP (5'LTR-gag-pol-3'SV40polyA; 5'LTR-AMenv-3'SV40polyA). MFGS-p47phox jest pakowany w mysią linię psi-crip, podczas gdy MFGS-gp91phox jest pakowany w ludzką linię 293-SPA. Supernatant wektora retrowirusa klinicznego nie będzie zawierał białka zwierzęcego ani surowicy. Testy bezpieczeństwa pod kątem endotoksyny, sterylności i braku zdolnego do replikacji retrowirusa zostaną przeprowadzone na liniach produkcyjnych retrowirusów, partiach cząstek wirusa i transdukowanych komórkach. Transdukowane komórki CD34+ zostaną podane pacjentowi z CGD. Tak więc będzie łącznie do sześciu cykli mobilizacji komórek macierzystych, ale ponieważ komórki CD34+ z jednego lub więcej cykli mobilizacji mogą być kriokonserwowane, a następnie łączone w pule do hodowli w celu wytworzenia produktu komórek macierzystych z jednym poprawionym genem do infuzji, może być mniej niż sześć rund (i prawdopodobnie tylko jedna runda) terapii genowej dla pacjenta biorącego udział w tym badaniu. Krew będzie okresowo badana pod kątem pojawiania się i utrzymywania się neutrofili, które są funkcjonalnie korygowane przez terapię genową. Celem skuteczności tego badania jest umożliwienie pacjentom z CGD wytwarzania autologicznych, skorygowanych genetycznie, funkcjonalnie prawidłowych neutrofili dodatnich pod względem oksydazy NADPH do poziomu co najmniej 1 na 1000 krążących neutrofili przez co najmniej cztery tygodnie. Może to zapewnić korzyść kliniczną w postaci zwiększonej obrony gospodarza przed trwającą lub potencjalną infekcją. Stan kliniczny pacjentów będzie monitorowany pod kątem jakichkolwiek oznak toksyczności. Informacje uzyskane z tego badania dostarczą informacji ważnych dla osiągnięcia ostatecznego celu, jakim jest rozwój terapii genowej dla CGD, która będzie trwałym lekarstwem na to zaburzenie.