Biomarkører for metabolisk fedme.

Hovedformål med arbejdet:

1. Analyse af koncentrationen af ​​udvalgte pro-inflammatoriske parametre i blodserum og spyt hos personer med forskellig fordeling af subkutant og visceralt fedtvæv.
2. Analyse af biomarkører for metabolisk fedme i spyt og blodserum.
3. Evaluering af nye diagnostiske metoder til tidlig bestemmelse af risikoen for metabolisk fedme og dens komplikationer.

Studieprotokollen blev godkendt af Bioethics Committee of Medical University, no. R-I-002/647/2019 og APK.002.39.2021. Alle deltagere gav informeret skriftligt samtykke til at deltage i undersøgelsen før dens påbegyndelse. Undersøgelsen begyndte i januar 2020 og sluttede i maj 2022.

Forskningen er udført på Institut for Diætetik og Klinisk Ernæring (Fakultet for Sundhedsvidenskab ved Medicinsk Universitet i Bialystok), Afdeling for Biokemisk Diagnostik (Klinisk Universitetshospital i Bialystok), samt ved Institut for Bioteknologi (Farmaceutisk Fakultet med bl.a. afdelingen for laboratoriemedicin ved det medicinske universitet i Bialystok).

Det første besøg fandt sted i afdelingen for diætetik og klinisk ernæring på det medicinske universitet i Bialystok. Det omfattede kvalificering til undersøgelsen baseret på inklusions- og eksklusionskriterierne, diskussion af formålet med undersøgelsen og underskrift af deltagernes skriftlige samtykke til undersøgelsen, samt information om beskyttelse af deres persondata og fuld anonymitet. 200 personer meldte sig frivilligt til undersøgelsen. Baseret på inklusions- og eksklusionskriterierne blev observationsstudiet udført blandt 119 personer (79 kvinder og 41 mænd). Hver deltager modtog en individuel kode (f. A01, A02, B01, B02 osv.), som blev brugt til at identificere deltagerne i yderligere faser af undersøgelsen.

Alle deltagere gennemførte: World Health Organization Quality of Life (WHOQOL-BREF) undersøgelse, International Physical Activity Questionnaire - IPAQ, Beliefs and Eating Habits Questionnaire oprettet af Behavioral Conditions of Nutrition Team, Committee of Human Nutrition Science, Polish Academy of Science, og 3-dages ernæringsdagbog (deltagerne beskrev måltider indtaget i de næste tre dage, inklusive to arbejdsdage og en fridag).

Deltagerne i undersøgelsen havde målinger af antropometriske parametre (kropsvægt, højde, talje og hofteomkreds), og BMI (Body Mass Index) blev beregnet. På baggrund heraf blev deltagerne opdelt i undersøgelses- og kontrolgruppen. Desuden blev WHR-forholdet (talje til hofteforhold), WHtR-forhold (talje til højdeforhold) og RFM-forhold (Relativ fedtmasse) beregnet.

For at bestemme kropssammensætningen af ​​studiedeltagerne blev der udført en elektrisk bioimpedanskropssammensætningsanalyse ved hjælp af enhederne: BioScan 920-2 (Storbritannien, Essex) og InBody 270 (Sydkorea, Seoul). Undersøgelsen blev udført om morgenen, fastende, uden nogen intens fysisk anstrengelse.

En ankel-brachial indekstest (MESI, Cracow, Polen) sammenligner blodtrykket målt ved anklen med blodtrykket målt ved armen blev også brugt i undersøgelsen. Denne analyse blev udført for at vurdere risikoen for aterosklerose i underekstremiteterne. Desuden blev blodtryk og hvilepuls ved hjælp af et elektrisk blodtryksmåler målt for alle undersøgelsens deltagere.

Det andet besøg fandt sted på den biokemiske diagnostiske afdeling (University Clinical Hospital i Bialystok). 10 ml veneblod blev indsamlet fra alle deltagere i undersøgelsen. Oral glucosetolerancetest (OGTT) blev udført, og på basis heraf blev koncentrationen af ​​glucose og insulin bestemt (fastende og efter 60 og 120 minutter af testen). Koncentrationer af totalkolesterol, LDL-kolesterol, HDL-kolesterol, triglycerid, C-reaktivt protein, glucose, insulin, serumurinstof, serumkreatinin, serumurinsyre, alaninaminotransferase (ALT) og aspartataminotransferase (AST) blev vurderet på ALINITY ci, Abbott .

Blodprøver blev taget fra patienter og frosset ved -80 °C. Serumniveauer af total adiponectin (Quantikine ELISA Human Total Adiponectin/Acrp30 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), resistin (Quantkine ELISA Human Resistin Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL-6 (Quantkine ELISA Human IL-6 , R&D Systems, Abingdon, UK), TNFα (Quantikine ELISA Human TNFα Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL-1β (Quantikine ELISA Human IL-1β/IL-1F2 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL -23 (Quantikine ELISA Human IL-23 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), MMP-9 (Quantikine ELISA Human MMP-9 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK) og total MMP-2 (Quantikine ELISA Total MMP-2) Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK) blev vurderet med det enzym-forbundne immunosorbent assay (ELISA) i henhold til fabrikantens instruktioner.

Det tredje besøg fandt sted på Institut for Bioteknologi (Fakultet for Farmaceutisk Fakultet med afdelingen for Laboratoriemedicin ved det medicinske universitet i Bialystok).

Spyt blev opsamlet ved hjælp af en standardmetode. Prøver fra forsøgspersonerne blev indsamlet mellem 9:00 og 11:00. Alle forsøgspersoner undlod at spise og drikke i 2 timer. Forsøgspersonerne skyllede deres mund med deioniseret vand og sad i en behagelig stilling med åbne øjne og hovedet let fremad. Ustimuleret hel spyt blev opsamlet i 10 minutter ved at spytte beskrevet af Navazesh. Spytprøver blev homogeniseret og klaret ved centrifugering ved 1200 RPMI i 15 minutter ved 4°C. Prøverne af klarede supernatanter blev opbevaret ved -70 °C til ELISA-målingerne.

Meget følsomme analysesæt (R&D Systems, Minneapolis, USA) blev brugt til at bestemme koncentrationerne af IL-6, IL-1β, IL-23, resistin, MMP-9, MMP-2 og TNF-α i spytprøverne fra studiedeltagere. Testene blev udført i henhold til producentens protokoller. Mikrotiterpladen tilvejebragt i kits var præ-coatet med monoklonalt antistof specifikt for analyseret protein. Standarder og prøver blev tilsat til de passende mikrotiterpladebrønde. Efter inkubationen ved stuetemperatur blev enzymbundet polyklonalt antistof tilsat. Derefter blev mikropladebrøndene aspireret og vasket fire gange. Derefter blev en substratopløsning tilsat til hver brønd. Enzym-substratreaktionen blev afsluttet ved tilsætning af en stopopløsning, og farveændringen blev målt spektrofotometrisk ved 450 nm ±2 nm. Antigenkoncentrationen i prøverne blev bestemt ved at sammenligne O.D. til standardkurven. Antigenkoncentrationen i prøverne blev bestemt ved at sammenligne O.D. til standardkurven.