Biomarcatori dell'obesità metabolica.

Gli obiettivi principali del lavoro:

1. Analisi della concentrazione di parametri pro-infiammatori selezionati nel siero del sangue e nella saliva di persone con diversa distribuzione del tessuto adiposo sottocutaneo e viscerale.
2. Analisi dei biomarcatori dell'obesità metabolica nella saliva e nel siero del sangue.
3. Valutazione di nuove metodiche diagnostiche per la determinazione precoce del rischio di obesità metabolica e delle sue complicanze.

Il protocollo di studio è stato approvato dal Comitato di Bioetica dell'Università di Medicina, n. R-I-002/647/2019 e APK.002.39.2021. Tutti i partecipanti hanno dato il consenso scritto informato a partecipare allo studio prima del suo inizio. Lo studio è iniziato a gennaio 2020 e si è concluso a maggio 2022.

La ricerca è stata condotta presso il Dipartimento di Dietetica e Nutrizione Clinica (Facoltà di Scienze della Salute dell'Università Medica di Bialystok), Dipartimento di Diagnostica Biochimica (Ospedale Clinico Universitario di Bialystok), nonché presso il Dipartimento di Biotecnologie (Facoltà di Farmacia con la Divisione di Medicina di Laboratorio dell'Università di Medicina di Bialystok).

La prima visita ha avuto luogo presso il Dipartimento di Dietetica e Nutrizione Clinica dell'Università di Medicina di Bialystok. Comprendeva la qualificazione per lo studio in base ai criteri di inclusione ed esclusione, la discussione dello scopo dello studio e la firma del consenso scritto per lo studio da parte dei partecipanti, nonché informazioni sulla protezione dei loro dati personali e sul pieno anonimato. 200 persone si sono offerte volontarie per lo studio. Sulla base dei criteri di inclusione ed esclusione, lo studio osservazionale è stato condotto su 119 persone (79 donne e 41 uomini). Ogni partecipante ha ricevuto un codice individuale (ad es. A01, A02, B01, B02 ecc.), che è stato utilizzato per identificare i partecipanti nelle fasi successive dello studio.

Tutti i partecipanti hanno completato: il sondaggio sulla qualità della vita dell'Organizzazione mondiale della sanità (WHOQOL-BREF), il questionario internazionale sull'attività fisica - IPAQ, il questionario sulle convinzioni e le abitudini alimentari creato dal team sulle condizioni comportamentali della nutrizione, il comitato per la scienza della nutrizione umana, l'Accademia polacca delle scienze e Diario nutrizionale di 3 giorni (i partecipanti hanno descritto i pasti consumati per i tre giorni successivi, inclusi due giorni lavorativi e un giorno libero).

Ai partecipanti allo studio sono stati misurati i parametri antropometrici (peso corporeo, altezza, circonferenza vita e fianchi) ed è stato calcolato il BMI (Body Mass Index). Sulla sua base i partecipanti sono stati divisi nel gruppo di studio e di controllo. Inoltre, sono stati calcolati il ​​rapporto WHR (rapporto vita-fianchi), il rapporto WHtR (rapporto vita-altezza) e il rapporto RFM (massa grassa relativa).

Per determinare la composizione corporea dei partecipanti allo studio, è stata effettuata un'analisi della composizione corporea di bioimpedenza elettrica utilizzando i dispositivi: BioScan 920-2 (Gran Bretagna, Essex) e InBody 270 (Corea del Sud, Seoul). L'esame è stato eseguito al mattino, a digiuno, senza alcuno sforzo fisico intenso.

Nello studio è stato utilizzato anche un test dell'indice caviglia-braccio (MESI, Cracovia, Polonia) che confronta la pressione sanguigna misurata alla caviglia con la pressione sanguigna misurata al braccio. Questa analisi è stata eseguita per valutare il rischio di aterosclerosi degli arti inferiori. Inoltre, per tutti i partecipanti allo studio è stata misurata la pressione sanguigna e la frequenza cardiaca a riposo utilizzando uno sfigmomanometro elettrico.

La seconda visita ha avuto luogo presso il Dipartimento di Diagnostica Biochimica (University Clinical Hospital di Bialystok). Sono stati raccolti 10 ml di sangue venoso da tutti i partecipanti allo studio. È stato eseguito il test di tolleranza al glucosio orale (OGTT) e, sulla base di esso, è stata determinata la concentrazione di glucosio e insulina (a digiuno e dopo 60 e 120 minuti dal test). Le concentrazioni di colesterolo totale, colesterolo LDL, colesterolo HDL, trigliceridi, proteina C-reattiva, glucosio, insulina, urea sierica, creatinina sierica, acido urico sierico, alanina aminotransferasi (ALT) e aspartato aminotransferasi (AST) sono state valutate su ALINITY ci, Abbott .

I campioni di sangue sono stati prelevati dai pazienti e congelati a -80 °C. Livelli sierici di adiponectina totale (Quantikine ELISA Human Total Adiponectin/Acrp30 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), resistina (Quantikine ELISA Human Resistin Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL-6 (Quantikine ELISA Human IL-6 Immunoassay , R&D Systems, Abingdon, UK), TNFα (Quantikine ELISA Human TNFα Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL-1β (Quantikine ELISA Human IL-1β/IL-1F2 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL -23 (Quantikine ELISA Human IL-23 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), MMP-9 (Quantikine ELISA Human MMP-9 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK) e MMP-2 totale (Quantikine ELISA Human MMP-2 Total MMP-2 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK) sono stati valutati con il saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) secondo le istruzioni del produttore.

La terza visita ha avuto luogo presso il Dipartimento di Biotecnologie (Facoltà di Farmacia con la Divisione di Medicina di Laboratorio dell'Università di Medicina di Bialystok).

La saliva è stata raccolta utilizzando un metodo standard. I campioni dei soggetti sono stati raccolti tra le 9:00 e le 11:00. Tutti i soggetti si sono astenuti dal mangiare e dal bere per 2 ore. I soggetti si sono sciacquati la bocca con acqua deionizzata ed erano seduti in una posizione comoda con gli occhi aperti e la testa inclinata leggermente in avanti. La saliva intera non stimolata è stata raccolta per 10 minuti sputando descritta da Navazesh. I campioni di saliva sono stati omogeneizzati e chiarificati mediante centrifugazione a 1200 RPMI per 15 minuti a 4°C. Le aliquote dei surnatanti chiarificati sono state conservate a -70 °C per le misurazioni ELISA.

Sono stati utilizzati kit di analisi altamente sensibili (R&D Systems, Minneapolis, USA) per determinare le concentrazioni di IL-6, IL-1β, IL-23, resistina, MMP-9, MMP-2 e TNF-α nei campioni salivari del partecipanti allo studio. I test sono stati eseguiti secondo i protocolli del produttore. La micropiastra fornita nei kit è stata pre-rivestita con anticorpo monoclonale specifico per la proteina analizzata. Standard e campioni sono stati aggiunti ai pozzetti appropriati della piastra per microtitolazione. Dopo l'incubazione a temperatura ambiente, è stato aggiunto l'anticorpo policlonale legato all'enzima. Quindi, i pozzetti della micropiastra sono stati aspirati e lavati quattro volte. Successivamente, è stata aggiunta una soluzione di substrato a ciascun pozzetto. La reazione enzima-substrato è stata interrotta mediante l'aggiunta di una soluzione di arresto e il cambiamento di colore è stato misurato spettrofotometricamente a 450 nm ± 2 nm. La concentrazione di antigene nei campioni è stata determinata confrontando la D.O. alla curva standard. La concentrazione di antigene nei campioni è stata determinata confrontando la D.O. alla curva standard.