Biomarkery otyłości metabolicznej.

Główne cele pracy:

1. Analiza stężeń wybranych parametrów prozapalnych w surowicy krwi i ślinie osób z różnym rozmieszczeniem podskórnej i trzewnej tkanki tłuszczowej.
2. Analiza metabolicznych biomarkerów otyłości w ślinie i surowicy krwi.
3. Ocena nowych metod diagnostycznych wczesnego określania ryzyka otyłości metabolicznej i jej powikłań.

Protokół badania został zatwierdzony przez Komisję Bioetyczną Uniwersytetu Medycznego nr. R-I-002/647/2019 i APK.002.39.2021. Wszyscy uczestnicy wyrazili świadomą pisemną zgodę na udział w badaniu przed jego rozpoczęciem. Badanie rozpoczęło się w styczniu 2020 r., a zakończyło w maju 2022 r.

Badania prowadzono w Zakładzie Dietetyki i Żywienia Klinicznego (Wydział Nauk o Zdrowiu Uniwersytetu Medycznego w Białymstoku), Zakładzie Diagnostyki Biochemicznej (Uniwersytecki Szpital Kliniczny w Białymstoku), a także w Zakładzie Biotechnologii (Wydział Farmaceutyczny im. Zakład Medycyny Laboratoryjnej Uniwersytetu Medycznego w Białymstoku).

Pierwsza wizyta odbyła się w Zakładzie Dietetyki i Żywienia Klinicznego Uniwersytetu Medycznego w Białymstoku. Obejmował on kwalifikację do badania na podstawie kryteriów włączenia i wyłączenia, omówienie celu badania i podpisanie przez uczestników pisemnej zgody na badanie, a także informację o ochronie ich danych osobowych i pełnej anonimowości. Do badania zgłosiło się 200 osób. Na podstawie kryteriów włączenia i wyłączenia przeprowadzono badanie obserwacyjne wśród 119 osób (79 kobiet i 41 mężczyzn). Każdy uczestnik otrzymał indywidualny kod (np. A01, A02, B01, B02 itd.), który posłużył do identyfikacji uczestników w dalszych etapach badania.

Wszyscy uczestnicy wypełnili: Ankieta Jakości Życia Światowej Organizacji Zdrowia (WHOQOL-BREF), Międzynarodowy Kwestionariusz Aktywności Fizycznej - IPAQ, Kwestionariusz Przekonań i Nawyków Odżywiania opracowany przez Zespół ds. Warunków Zachowania Żywieniowego Komitetu Nauk o Żywieniu Człowieka Polskiej Akademii Nauk oraz 3-dniowy Dzienniczek Odżywiania (uczestnicy opisali posiłki spożywane przez kolejne trzy dni, w tym dwa dni robocze i jeden dzień wolny).

U uczestników badania dokonano pomiarów parametrów antropometrycznych (masy ciała, wzrostu, obwodu talii i bioder) oraz obliczono BMI (Body Mass Index). Na jej podstawie uczestników podzielono na grupę badawczą i kontrolną. Ponadto obliczono wskaźnik WHR (stosunek talii do bioder), wskaźnik WHtR (stosunek talii do wzrostu) oraz wskaźnik RFM (względna masa tkanki tłuszczowej).

W celu określenia składu ciała badanych przeprowadzono analizę bioimpedancji elektrycznej ciała za pomocą urządzeń: BioScan 920-2 (Wielka Brytania, Essex) oraz InBody 270 (Korea Południowa, Seul). Badanie wykonano rano, na czczo, bez intensywnego wysiłku fizycznego.

W badaniu wykorzystano również test wskaźnika kostka-ramię (MESI, Kraków, Polska) porównujący ciśnienie krwi mierzone na kostce z ciśnieniem krwi mierzonym na ramieniu. Analizę przeprowadzono w celu oceny ryzyka wystąpienia miażdżycy tętnic kończyn dolnych. Ponadto u wszystkich uczestników badania zmierzono ciśnienie krwi i tętno spoczynkowe za pomocą sfigmomanometru elektrycznego.

Druga wizyta odbyła się w Zakładzie Diagnostyki Biochemicznej Uniwersyteckiego Szpitala Klinicznego w Białymstoku. Od wszystkich uczestników badania pobrano 10 ml krwi żylnej. Wykonano doustny test tolerancji glukozy (OGTT) i na jego podstawie oznaczono stężenie glukozy i insuliny (na czczo oraz po 60 i 120 minutach testu). Stężenia cholesterolu całkowitego, cholesterolu LDL, cholesterolu HDL, triglicerydów, białka C-reaktywnego, glukozy, insuliny, mocznika w surowicy, kreatyniny w surowicy, kwasu moczowego w surowicy, aminotransferazy alaninowej (ALT) i aminotransferazy asparaginianowej (AST) oceniono na ALINITY ci, Abbott .

Próbki krwi pobierano od pacjentów i zamrażano w temperaturze -80°C. Poziomy adiponektyny całkowitej w surowicy (Quantikine ELISA Human Total Adiponectin/Acrp30 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), rezystyny ​​(Quantikine ELISA Human Resistin Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL-6 (Quantikine ELISA Human IL-6 Immunoassay , R&D Systems, Abingdon, Wielka Brytania), TNFα (Quantikine ELISA Human TNFα Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, Wielka Brytania), IL-1β (Quantikine ELISA Human IL-1β/IL-1F2 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, Wielka Brytania), IL -23 (Quantikine ELISA Human IL-23 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, Wielka Brytania), MMP-9 (Quantikine ELISA Human MMP-9 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK) i całkowita MMP-2 (Quantikine ELISA Total MMP-2 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, Wielka Brytania) oceniano za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA) zgodnie z instrukcjami producenta.

Trzecia wizyta odbyła się w Zakładzie Biotechnologii (Wydział Farmaceutyczny z Oddziałem Medycyny Laboratoryjnej Uniwersytetu Medycznego w Białymstoku).

Ślina została pobrana standardową metodą. Próbki od osób badanych pobierano w godzinach od 9:00 do 11:00. Wszyscy badani powstrzymywali się od jedzenia i picia przez 2 godziny. Badani wypłukiwali usta wodą dejonizowaną i siedzieli w wygodnej pozycji z otwartymi oczami i głową lekko pochyloną do przodu. Niestymulowaną całą ślinę zbierano przez 10 minut przez plucie opisane przez Navazesha. Próbki śliny homogenizowano i klarowano przez wirowanie przy 1200 obr./min przez 15 min w 4°C. Porcje sklarowanych supernatantów przechowywano w temperaturze -70°C do pomiarów ELISA.

Do określenia stężeń IL-6, IL-1β, IL-23, rezystyny, MMP-9, MMP-2 i TNF-α w próbkach śliny z uczestnicy badania. Badania przeprowadzono zgodnie z protokołami producenta. Płytka do mikromiareczkowania dostarczona w zestawach została wstępnie pokryta przeciwciałem monoklonalnym specyficznym dla analizowanego białka. Standardy i próbki dodano do odpowiednich studzienek płytki do mikromiareczkowania. Po inkubacji w temperaturze pokojowej dodano przeciwciało poliklonalne połączone z enzymem. Następnie studzienki mikropłytki odessano i przemyto cztery razy. Następnie do każdego dołka dodano roztwór substratu. Reakcję enzym-substrat zakończono przez dodanie roztworu zatrzymującego i zmianę barwy zmierzono spektrofotometrycznie przy 450 nm ± 2 nm. Stężenie antygenu w próbkach określono przez porównanie OD. do krzywej standardowej. Stężenie antygenu w próbkach określono przez porównanie OD. do krzywej standardowej.