Biomarker für metabolische Fettleibigkeit.

Die Hauptziele der Arbeit:

1. Analyse der Konzentration ausgewählter proinflammatorischer Parameter im Blutserum und Speichel von Menschen mit unterschiedlicher Verteilung des subkutanen und viszeralen Fettgewebes.
2. Analyse metabolischer Adipositas-Biomarker in Speichel und Blutserum.
3. Evaluierung neuer diagnostischer Methoden zur Früherkennung des Risikos einer metabolischen Fettleibigkeit und ihrer Komplikationen.

Das Studienprotokoll wurde vom Bioethik-Komitee der Medizinischen Universität Nr. genehmigt. R-I-002/647/2019 und APK.002.39.2021. Alle Teilnehmer gaben vor Beginn der Studie ihre schriftliche Einwilligung zur Teilnahme an der Studie. Die Studie begann im Januar 2020 und endete im Mai 2022.

Die Forschung wurde an der Abteilung für Diätetik und klinische Ernährung (Fakultät für Gesundheitswissenschaften der Medizinischen Universität Bialystok), der Abteilung für biochemische Diagnostik (Klinisches Universitätskrankenhaus in Bialystok) sowie an der Abteilung für Biotechnologie (Fakultät für Pharmazie) durchgeführt der Abteilung für Laboratoriumsmedizin der Medizinischen Universität Bialystok).

Der erste Besuch fand in der Abteilung für Diätetik und klinische Ernährung der Medizinischen Universität Bialystok statt. Dazu gehörten die Qualifizierung für die Studie anhand der Ein- und Ausschlusskriterien, die Besprechung des Studienzwecks und die Unterzeichnung der schriftlichen Einwilligung der Teilnehmer zur Studie sowie Informationen zum Schutz ihrer personenbezogenen Daten und zur vollständigen Anonymität. 200 Personen meldeten sich freiwillig für die Studie. Basierend auf den Einschluss- und Ausschlusskriterien wurde die Beobachtungsstudie mit 119 Personen (79 Frauen und 41 Männer) durchgeführt. Jeder Teilnehmer erhielt einen individuellen Code (z.B. A01, A02, B01, B02 usw.), die zur Identifizierung der Teilnehmer in weiteren Phasen der Studie verwendet wurde.

Alle Teilnehmer haben Folgendes ausgefüllt: Die Umfrage zur Lebensqualität der Weltgesundheitsorganisation (WHOQOL-BREF), den Internationalen Fragebogen zur körperlichen Aktivität – IPAQ, den Fragebogen zu Überzeugungen und Essgewohnheiten, erstellt vom Team für Verhaltensbedingungen der Ernährung, Ausschuss für Humanernährungswissenschaft, Polnische Akademie der Wissenschaften und 3-tägiges Ernährungstagebuch (die Teilnehmer beschrieben die Mahlzeiten, die sie in den nächsten drei Tagen konsumierten, darunter zwei Arbeitstage und einen freien Tag).

Bei den Teilnehmern der Studie wurden anthropometrische Parameter (Körpergewicht, Körpergröße, Taillen- und Hüftumfang) gemessen und der BMI (Body Mass Index) berechnet. Auf dieser Grundlage wurden die Teilnehmer in die Studien- und Kontrollgruppe eingeteilt. Darüber hinaus wurden das WHR-Verhältnis (Waist to Hip Ratio), das WHtR-Verhältnis (Waist to Height Ratio) und das RFM-Verhältnis (Relative Fat Mass) berechnet.

Um die Körperzusammensetzung der Studienteilnehmer zu bestimmen, wurde eine elektrische Bioimpedanz-Körperzusammensetzungsanalyse mit den Geräten BioScan 920-2 (Großbritannien, Essex) und InBody 270 (Südkorea, Seoul) durchgeführt. Die Untersuchung wurde morgens im nüchternen Zustand ohne starke körperliche Anstrengung durchgeführt.

In der Studie wurde auch ein Knöchel-Arm-Index-Test (MESI, Krakau, Polen) verwendet, der den am Knöchel gemessenen Blutdruck mit dem am Arm gemessenen Blutdruck vergleicht. Diese Analyse wurde durchgeführt, um das Risiko einer Arteriosklerose der unteren Extremitäten einzuschätzen. Darüber hinaus wurden bei allen Studienteilnehmern der Blutdruck und die Ruheherzfrequenz mit einem elektrischen Blutdruckmessgerät gemessen.

Der zweite Besuch fand in der Abteilung für biochemische Diagnostik (Klinisches Universitätskrankenhaus in Bialystok) statt. Von allen Teilnehmern der Studie wurden 10 ml venöses Blut entnommen. Es wurde ein oraler Glukosetoleranztest (OGTT) durchgeführt und auf dieser Grundlage die Konzentration von Glukose und Insulin bestimmt (nüchtern und nach 60 und 120 Minuten des Tests). Die Konzentrationen von Gesamtcholesterin, LDL-Cholesterin, HDL-Cholesterin, Triglycerid, C-reaktivem Protein, Glukose, Insulin, Serumharnstoff, Serumkreatinin, Serumharnsäure, Alaninaminotransferase (ALT) und Aspartataminotransferase (AST) wurden auf ALINITY ci, Abbott, bewertet .

Den Patienten wurden Blutproben entnommen und bei -80 °C eingefroren. Serumspiegel von Gesamtadiponektin (Quantikine ELISA Human Total Adiponectin/Acrp30 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), Resistin (Quantikine ELISA Human Resistin Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL-6 (Quantikine ELISA Human IL-6 Immunoassay , R&D Systems, Abingdon, UK), TNFα (Quantikine ELISA Human TNFα Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL-1β (Quantikine ELISA Human IL-1β/IL-1F2 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), IL -23 (Quantikine ELISA Human IL-23 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK), MMP-9 (Quantikine ELISA Human MMP-9 Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK) und Gesamt-MMP-2 (Quantikine ELISA Total MMP-2). Immunoassay, R&D Systems, Abingdon, UK) wurden mit dem Enzymimmunoassay (ELISA) gemäß den Anweisungen des Herstellers bewertet.

Der dritte Besuch fand in der Abteilung für Biotechnologie (Fakultät für Pharmazie mit der Abteilung für Laboratoriumsmedizin der Medizinischen Universität Bialystok) statt.

Speichel wurde mit einer Standardmethode gesammelt. Die Probenentnahme der Probanden erfolgte zwischen 9:00 und 11:00 Uhr. Alle Probanden verzichteten 2 Stunden lang auf Essen und Trinken. Die Probanden spülten ihren Mund mit entionisiertem Wasser und saßen in einer bequemen Position mit offenen Augen und leicht nach vorne geneigtem Kopf. Nicht stimulierter Vollspeichel wurde 10 Minuten lang durch Ausspucken gesammelt, wie von Navazesh beschrieben. Speichelproben wurden homogenisiert und durch 15-minütige Zentrifugation bei 1200 RPMI und 4 °C geklärt. Die Aliquots der geklärten Überstände wurden für die ELISA-Messungen bei -70 °C gelagert.

Hochempfindliche Assay-Kits (R&D Systems, Minneapolis, USA) wurden verwendet, um die Konzentrationen von IL-6, IL-1β, IL-23, Resistin, MMP-9, MMP-2 und TNF-α in den Speichelproben zu bestimmen Studienteilnehmer. Die Tests wurden gemäß den Protokollen des Herstellers durchgeführt. Die in den Kits enthaltenen Mikrotiterplatten waren mit monoklonalen Antikörpern vorbeschichtet, die für das analysierte Protein spezifisch sind. Standards und Proben wurden in die entsprechenden Vertiefungen der Mikrotiterplatte gegeben. Nach der Inkubation bei Raumtemperatur wurde ein enzymgebundener polyklonaler Antikörper hinzugefügt. Anschließend wurden die Vertiefungen der Mikrotiterplatte abgesaugt und viermal gewaschen. Als nächstes wurde jeder Vertiefung eine Substratlösung zugesetzt. Die Enzym-Substrat-Reaktion wurde durch Zugabe einer Stopplösung beendet und der Farbumschlag spektrophotometrisch bei 450 nm ±2 nm gemessen. Die Antigenkonzentration in den Proben wurde durch Vergleich der O.D. zur Standardkurve. Die Antigenkonzentration in den Proben wurde durch Vergleich der O.D. zur Standardkurve.