Hyvin alhaisen syntymäpainon vauvojen geneettiset muunnelmat ja alttius keskosten sairauksille (CLD)

Krooninen keskosten keuhkosairaus (CLD) diagnosoidaan 30–40 prosentilla erittäin alhaisen syntymäpainon (VLBW) vauvoista (<1500 g), ja se on edelleen johtava kuolleisuuden ja pitkäaikaisen sairastuvuuden syy tässä populaatiossa. Muut sairaudet, kuten nekrotisoiva enterokoliitti (NEC), sepsis, avoin valtimotiehyt (PDA) ja intraventrikulaarinen verenvuoto (IVH), vaikuttavat myös kuolleisuuteen ja sairastumiseen tässä populaatiossa. Keskeinen periaate NEC:n, CLD:n ja sepsiksen patogeneesissä on isännän genomin säätelemän immuunipuolustuksen epäonnistuminen voittamaan mikrobipatogeenien aiheuttamia haasteita, kun läsnä on riskitekijöitä, jotka aiheuttavat suoliston, keuhkojen ja systeemisen vaurion. Toll like reseptorit (TLR) ovat patogeenin tunnistusreseptoreita, jotka toimivat synnynnäisen immuunijärjestelmän tunnistus- ja efektorivarttana. Koska keskosen isännän puolustus on pääasiassa riippuvainen synnynnäisestä immuunijärjestelmästä, hypoteesimme on, että hypomorfiset geneettiset vaihtelut TLR:issä lisäävät herkkyyttä keskosten sairauksille, kuten CLD ja sepsis. keuhko voi heijastua biomarkkerien, kuten sytokiinien, mikro-RNA:iden (miRNA) tai peptidien tasoissa, jotka erittyvät biologisiin nesteisiin, kuten vereen ja henkitorven aspiraatteihin. On todennäköistä, että geneettiset variantit, jotka lisäävät tulehduksen riskiä tai vähentynyttä korjausta ja kasvua, liittyvät myös näiden biomarkkerien muuttuneisiin tasoihin. Biomarkkerien ja geneettisten varianttien mittaaminen yhdessä voi lisätä näiden keskosten komplikaatioiden varhaisten ennustajien tarkkuutta. Biomarkkerien mittaus biologisista nesteistä voidaan tehdä lyhyemmällä läpimenoajalla kuin geenisekvensointi tällä hetkellä. Biomarkkerit voivat myös tarjota pitkittäisiä muutoksia taudin vakavuudessa ja vasteessa hoitoon. Uudemmilla multipleksimäärityksillä on mahdollista mitata biomarkkerien tasoja hyvin pienissä määrissä biologisia nesteitä. Nämä toisiaan täydentävät vahvuudet tekevät geenisekvensoinnista ja biomarkkerien havaitsemisesta ihanteellisen 1-2-menetelmän keskosten varhaiseen tunnistamiseen ja taudin etenemisen arviointiin. Hypoteesimme testataan VLBW-vauvoilla neljällä erityisellä tavoitteella: (1) Sen määrittämiseksi, liittyykö aiemmin kuvattujen yhden nukleotidin polymorfismien (SNP) esiintyminen TLR4 (Asp299Gly, Thr399Ile) TLR2 (Arg753Gln) ja TLR5 (Arg392STOP) geeneihin. lisääntynyt CLD:n riski; (2) havaita DNA-sekvensoinnilla, lisäävätkö TLR4:n, TLR2:n, TLR9:n, MyD88:n ja muiden synnynnäisten immuunigeenien uudet geneettiset muunnelmat CLD:n tai muun taudin riskiä keskosilla; (3) tunnistaa geenisekvenssilähestymistavan avulla, muuttavatko muiden korjaus- ja kasvugeenien variantit herkkyyttä keskosten sairauksille, kuten CLD, NEC tai sepsis tai PDA tai IVH; ja (4) voivatko muutokset sytokiinien, miRNA:n ja muiden biomarkkeritasojen seerumissa samoista verinäytteistä tarjota lisäarvoa ennenaikaisten sairauksien riskin tunnistamisessa. VLBW-lapset, joille kehittyy CLD (hapen tarve 36 viikon hedelmöittymisen jälkeen), NEC, sepsis, PDA tai IVH toimivat tapauksina, kun taas VLBW-lapset, joille ei kehity kiinnostavia sairauksia, toimivat kontrollina. Ilmoittautuneilta imeväisiltä otetaan 0,5 cc:n verinäyte kestokatetrin tai kantapään avulla DNA-analyysiä varten, kun suostumus on saatu. TLR4 (Asp299Gly, Thr399Ile) TLR2 (Arg753Gln) ja TLR5 (Arg392STOP) SNP:t arvioidaan käyttämällä multiplex Single Base -laajennukseen perustuvaa tekniikkaa käyttäen kaupallisesti saatavia alukkeita. Uudet geneettiset muunnelmat näissä kiinnostavissa geeneissä ja muut variantit, joiden on ehdotettu liittyvän NEC:hen, havaitaan käyttämällä tavanomaista Sangerin tai seuraavan sukupolven DNA-sekvensointia. Seerumi erotetaan samasta verinäytteestä, joka on otettu DNA-eristystä varten. Toinen 0,5 cm3 verinäyte otetaan biomarkkerimittausta varten. Biomarkkeritasot seerumissa analysoidaan käyttämällä multipleksistä EIA:ta sytokiinien osalta, sekvensoimalla miRNA-profiilia ja ELISA:lla kiinnostavia peptiditasoja (VEGF, angiopoietiini-2 ja Nogo-B-peptidi). Etuihin kuuluu mahdollisuus kehittää riskiin perustuvia ehkäiseviä ja terapeuttisia strategioita CLD:n, NEC:n, sepsiksen, PDA:n tai IVH:n ehkäisemiseksi tässä populaatiossa.