Variantes génétiques et susceptibilité aux maladies de la prématurité chez les nourrissons de très faible poids à la naissance (CLD)

La maladie pulmonaire chronique de la prématurité (MPC) est diagnostiquée chez 30 à 40 % des nourrissons de très faible poids à la naissance (TFPN) (<1 500 g) et reste une cause majeure de mortalité et de morbidité à long terme dans cette population. D'autres maladies telles que l'entérocolite nécrosante (NEC), la septicémie, la persistance du canal artériel (PDA) et l'hémorragie intraventriculaire (IVH) contribuent également à la mortalité et à la morbidité dans cette population. Un principe central dans la pathogenèse de la NEC, de la CLD et de la septicémie est l'échec des défenses immunitaires régulées par le génome de l'hôte à surmonter les défis posés par les agents pathogènes microbiens en présence de facteurs de risque qui induisent respectivement des lésions intestinales, pulmonaires et systémiques. Les récepteurs de type péage (TLR) sont des récepteurs de reconnaissance d'agents pathogènes qui servent de bras de reconnaissance et d'effecteur du système immunitaire inné. Étant donné que le nourrisson prématuré dépend principalement du système immunitaire inné pour la défense de l'hôte, notre hypothèse est que les variations génétiques hypomorphiques des TLR augmenteront la sensibilité aux maladies de la prématurité telles que la CLD et la septicémie. Le risque accru d'inflammation, la diminution du potentiel de réparation et de croissance des peut se refléter dans les niveaux de biomarqueurs, tels que les cytokines, les micro-ARN (miARN) ou les peptides qui sont sécrétés dans les fluides biologiques, comme le sang et les aspirations trachéales. Il est probable que les variantes génétiques qui augmentent le risque d'inflammation ou diminuent la réparation et la croissance seront également associées à des niveaux altérés de ces biomarqueurs. La mesure des biomarqueurs et des variantes génétiques ensemble peut augmenter la précision des prédicteurs précoces de ces complications de la prématurité. La mesure des biomarqueurs dans les fluides biologiques peut être effectuée avec un délai d'exécution plus court que le séquençage des gènes à l'heure actuelle. Les biomarqueurs peuvent également fournir des changements longitudinaux dans la gravité de la maladie et la réponse au traitement. De nouveaux tests multiplex permettent de mesurer les niveaux de biomarqueurs dans de très petites quantités de fluides biologiques. Ces atouts complémentaires font du séquençage des gènes et de la détection des biomarqueurs une approche 1-2 idéale pour l'identification précoce et l'évaluation de la progression de la maladie chez les prématurés. Notre hypothèse sera testée chez les nourrissons TLBW dans quatre objectifs spécifiques : (1) Déterminer si la présence de polymorphismes mononucléotidiques (SNP) décrits précédemment dans les gènes TLR4 (Asp299Gly, Thr399Ile) TLR2 (Arg753Gln) et TLR5 (Arg392STOP) est associée à un risque accru de CLD ; (2) pour détecter par séquençage de l'ADN si de nouvelles variations génétiques dans TLR4, TLR2, TLR9, MyD88 et d'autres gènes immunitaires innés augmentent le risque de MPC ou d'autres maladies chez les prématurés ; (3) identifier par une approche de séquence génique si des variants dans d'autres gènes de réparation et de croissance modifient la sensibilité aux maladies affectant les prématurés telles que CLD, NEC ou sepsis ou PDA ou IVH ; et (4) si les altérations des niveaux de cytokines, de miARN et d'autres biomarqueurs dans le sérum des mêmes échantillons de sang peuvent fournir une valeur prédictive supplémentaire pour reconnaître le risque de maladies de la prématurité. Les nourrissons TLBW qui développent une CLD (besoin en oxygène à 36 semaines d'âge postconceptionnel), NEC, septicémie, PDA ou IVH serviront de cas, tandis que les nourrissons TLBW qui ne développent pas les maladies d'intérêt serviront de témoins. Un échantillon de sang de 0,5 cc sera prélevé sur les nourrissons inscrits via un cathéter à demeure ou un bâtonnet au talon pour analyse ADN après obtention du consentement. Les SNP TLR4 (Asp299Gly, Thr399Ile) TLR2 (Arg753Gln) et TLR5 (Arg392STOP) seront évalués à l'aide d'une technique basée sur l'extension de base unique multiplex, en utilisant des amorces disponibles dans le commerce. De nouvelles variations génétiques dans ces gènes d'intérêt et d'autres variantes proposées comme étant liées à NEC seront détectées à l'aide du séquençage conventionnel Sanger ou Next Generation DNA. Le sérum sera séparé du même échantillon de sang obtenu pour l'isolement de l'ADN. Un deuxième échantillon de sang de 0,5 cc sera prélevé pour la mesure des biomarqueurs. Les niveaux de biomarqueurs dans le sérum seront analysés par EIA multiplex pour les cytokines, séquençage pour le profil des miARN et ELISA pour les niveaux de peptides d'intérêt (VEGF, angiopoïétine-2 et peptide Nogo-B). Les avantages comprennent la possibilité de développer des stratégies préventives et thérapeutiques basées sur les risques pour prévenir la CLD, la NEC, la septicémie, la PDA ou l'HIV dans cette population.