Variantes genéticas e susceptibilidade a doenças da prematuridade em recém-nascidos de muito baixo peso (CLD)

A doença pulmonar crônica da prematuridade (CLD) é diagnosticada em 30-40% dos recém-nascidos de muito baixo peso (MBP) (<1500g) e continua sendo uma das principais causas de mortalidade e morbidade a longo prazo nessa população. Outras doenças, como enterocolite necrosante (NEC), sepse, persistência do canal arterial (PDA) e hemorragia intraventricular (IVH) também contribuem para a mortalidade e morbidade nessa população. Um princípio central na patogênese da ECN, CLD e sepse é a falha das defesas imunes reguladas pelo genoma do hospedeiro em superar os desafios impostos por patógenos microbianos na presença de fatores de risco que induzem lesões intestinais, pulmonares e sistêmicas, respectivamente. Receptores do tipo Toll (TLRs) são receptores de reconhecimento de patógenos que servem como o braço efetor e de reconhecimento do sistema imune inato. Uma vez que o bebê prematuro é predominantemente dependente do sistema imunológico inato para defesa do hospedeiro, nossa hipótese é que variações genéticas hipomórficas em TLRs aumentarão a suscetibilidade a doenças da prematuridade, como CLD e sepse. pulmonar pode se refletir nos níveis de biomarcadores, como citocinas, micro-RNAs (miRNA) ou peptídeos que são secretados em fluidos biológicos, como sangue e aspirados traqueais. É provável que as variantes genéticas que aumentam o risco de inflamação ou diminuem o reparo e o crescimento também estejam associadas a níveis alterados desses biomarcadores. A medição dos biomarcadores e das variantes genéticas em conjunto pode aumentar a precisão dos preditores precoces dessas complicações da prematuridade. A medição de biomarcadores em fluidos biológicos pode ser feita com um tempo de resposta mais curto do que o sequenciamento de genes no momento. Os biomarcadores também podem fornecer mudanças longitudinais na gravidade da doença e na resposta à terapia. Ensaios multiplex mais recentes tornam possível medir os níveis de biomarcadores em quantidades muito pequenas de fluidos biológicos. Essas forças complementares tornam o sequenciamento de genes e a detecção de biomarcadores uma abordagem 1-2 ideal para a identificação precoce e avaliação da progressão da doença em bebês prematuros. Nossa hipótese será testada em RNMBP com quatro objetivos específicos: (1) Determinar se a presença de polimorfismos de nucleotídeo único (SNPs) previamente descritos nos genes TLR4 (Asp299Gly, Thr399Ile) TLR2 (Arg753Gln) e TLR5 (Arg392STOP) está associada a um risco aumentado de CLD; (2) detectar por sequenciamento de DNA se novas variações genéticas em TLR4, TLR2, TLR9, MyD88 e outros genes imunes inatos aumentam o risco de CLD ou outra doença em bebês prematuros; (3) identificar por abordagem de sequência gênica se variantes em outros genes de reparo e crescimento alteram a suscetibilidade a doenças que afetam bebês prematuros, como CLD, NEC ou sepse ou PDA ou IVH; e (4) se as alterações nos níveis de citocinas, miRNA e outros biomarcadores no soro das mesmas amostras de sangue podem fornecer valor preditivo adicional no reconhecimento do risco de doenças da prematuridade. Bebês VLBW que desenvolvem CLD (exigência de oxigênio em 36 semanas de idade pós-concepcional), NEC, sepse, PDA ou IVH servirão como casos, enquanto bebês VLBW que não desenvolverem as doenças de interesse servirão como controles. Uma amostra de sangue de 0,5 cc será coletada de bebês inscritos por meio de cateter permanente ou punção de calcanhar para análise de DNA após a obtenção do consentimento. Os SNPs TLR4 (Asp299Gly, Thr399Ile), TLR2 (Arg753Gln) e TLR5 (Arg392STOP) serão avaliados usando uma técnica baseada em extensão multiplex de base única, usando primers disponíveis comercialmente. Novas variações genéticas nesses genes de interesse e outras variantes propostas como relacionadas à NEC serão detectadas usando o sequenciamento de DNA Sanger convencional ou Next Generation. O soro será separado da mesma amostra de sangue obtida para isolamento de DNA. Uma segunda amostra de sangue de 0,5 cc será coletada para medição de biomarcadores. Os níveis de biomarcadores no soro serão analisados ​​usando multiplex EIA para citocinas, sequenciamento para perfil de miRNA e ELISA para níveis de peptídeos de interesse (VEGF, angiopoietina-2 e peptídeo Nogo-B). Os benefícios incluem a possibilidade de desenvolvimento de estratégias preventivas e terapêuticas baseadas no risco para prevenir CLD, NEC, sepse, PDA ou IVH nesta população.