Mikrobiaineenvaihdunta ja raskaustutkimuksen tulokset (MMOPS)

OPINTUSUUNNITTELU

Kokonaissuunnitelma: Arvioida äidin aineenvaihdunnan markkereita, mukaan lukien äidin mikrobien metaboliitti, TMAO, koko raskauden ajan ja sen yhteys raskauden hypertensiivisten häiriöiden kehittymiseen.

Tutkimussuunnittelu ja menetelmät:

Tämä mahdollinen pitkittäinen kohortti ottaa mukaan raskaana olevia potilaita heidän ensimmäisen raskauskolmanneksen aikana (10–14 raskausviikkoa). Ilmoittautumisen yhteydessä kerätään plasma-, seerumi-, veren RNA- ja virtsanäytteet sekä ruokavalion arviointi ja omat väestötiedot. Veren kokonaistilavuus tutkimuslaboratoriotarkoituksiin on 22,5 cc (yksi 10 ml EDTA-putki, yksi 10 ml:n seerumierotinputki ja yksi 2,5 ml PAXgene-veri-RNA-putki). Jos tutkimuslaboratoriot otetaan koordinoidusti muiden tarvittavien synnytystä edeltävien laboratorioiden kanssa, odotettu enimmäismäärä veressä on 42-50 cm3 verta riippuen yleisesti tilattujen synnytystä edeltävien laboratorioiden yhdistelmästä. Raskaana olevilta koehenkilöiltä otetun veren kokonaismäärä (kliiniset ja tutkimustulokset mukaan lukien) ei saa ylittää 50 ml:aa kahden viikon aikana. Plasma-, seerumi-, veren RNA- ja virtsanäytteet otetaan jälleen toisella raskauskolmanneksella, viikolla 24-28. Lisäksi synnytyksen yhteydessä kerätään äidin plasmaa, seerumia, veren RNA:ta ja virtsaa. Synnytyksen jälkeen otetaan 10 cc:n napanuoraverinäyte ja istukka lähetetään patologiaan arvioitavaksi. Mittaamme TMAO-tasot ja muut aineenvaihduntamerkit kaikista kolmesta äidin näytteestä ja napanuoraverestä. DNA:ta plasmakeräyksen buffy coatista ja RNA:ta PAXgene-veriputkesta saadaan metabolisten biomarkkerien molekyylitestausta varten. Istukka tutkitaan patologisesti ottaen huomioon verisuonipatologia. Lisäksi jokaisessa ajankohtana hankitaan ravintohistoria käyttämällä haastattelijan ohjaamaa ASA24:ää (Automated self-administred 24-hour dietary assessment tool) – verkkopohjaista kyselyä, joka tarjotaan maksutta National Institutes of Healthin verkkosivuston kautta vain tutkijoille tarkoitettu salasanasuojattu tili (https://epi.grants.cancer.gov/asa24/).

Kelpoisuuskriteerit Tutkimuspopulaatio sisältää 18-45-vuotiaat raskaana olevat henkilöt, jotka saavat synnytyksen hoitoa ja suunnittelevat synnytystä Cleveland Clinicissä (Ohion paikat). Potilaiden on kyettävä puhumaan ja lukemaan englantia, heillä on oltava yksi elinkelpoinen kohdunsisäinen raskaus ilman tunnettuja sikiön poikkeavuuksia ilmoittautumisajankohtana. Potilaat, joiden sikiöillä on diagnosoitu monisikiö, kromosomipoikkeavuuksia, vakavia synnynnäisiä epämuodostumia tai synnynnäisiä infektioita, suljetaan pois.

Kohteiden tunnistaminen ja rekrytointi Tutkimusryhmä tarkastelee ultraääniaikatauluja valituille tutkimuskohteille rekrytointia varten. Tarkistamme heidän sähköisen sairauskertomuksensa (EMR) kelpoisuuden varalta. Jos hänet tunnistetaan sopiviksi ehdokkaiksi, heidät merkitään, jotta heihin voidaan ottaa yhteyttä tutkimukseen liittyen. Jos potilas haluaa kuulla lisää tutkimuksestamme, hän tapaa tutkimushenkilöstön tarkastelemaan kelpoisuutta ja tietoista suostumusta, jossa kerrotaan eduista, haitoista ja mahdollisista haitoista, tutkimuksen aikataulusta ja potilaan odotuksista. Jos potilas ja suostumushenkilökunta haluavat osallistua, he allekirjoittavat tietoisen suostumusasiakirjan. Osallistumisen jälkeen potilaalle annetaan tutkimustunnus, joka tallennetaan REDCap-tietokantaan. Tällä käynnillä suoritetaan itse ilmoittamat demografiset tiedot, ravitsemushistoria ja ensimmäinen verenotto/virtsanotto.

Lähetämme myös alustavan esitteen MyChartin kautta mahdollisille osallistujille tarkastettavaksi ennen ultraääniaikaa. Saapuessaan häneltä kysytään, haluaisiko hän kuulla lisää tutkimuksesta, ja rekrytointiprotokollan loppuosaa noudatetaan aiemmin kuvatulla tavalla. Rekrytoinnin onnistumista arvioidaan jatkuvasti, ja protokollaa muutetaan, jos siinä on kaava (kuten aika ei riitä tutkimustietojen ja tietoisen suostumuksen tarkistamiseen).

Tulosten määritelmä

1. Raskauden hypertensiivisiin häiriöihin kuuluvat 1) raskausajan hypertensio, joka määritellään verenpaineeksi ilman proteinuriaa tai muita preeklampsiaan liittyvän loppuelimen toimintahäiriön merkkejä/oireita, jotka kehittyvät 20 raskausviikon jälkeen, 2) Preeklampsia, joka määritellään uudeksi hypertension ja proteinurian puhkeamiseksi tai uudeksi puhkeamiseksi. verenpainetauti ja merkittävä pää-elinten toimintahäiriö (proteinurian kanssa tai ilman), joka kehittyy tyypillisesti 20 raskausviikon jälkeen aiemmin normotensiivisellä potilaalla, 3) Kroonisen verenpainetaudin päälle kertynyt preeklampsia määritellään pahenevaksi tai vastustuskykyiseksi verenpaineeksi, uudeksi proteinurian puhkeamiseksi ja /tai merkittävä uusi elimen toimintahäiriö 20 viikon raskausviikon jälkeen potilaalla, jolla on krooninen verenpainetauti.
2. Raskausdiabetes: 1) ≥ 2 glukoosiarvoa vähintään Carpenter/Coustanin raskausdiabeteksen diagnostisissa kriteereissä kolmen tunnin 100 gramman suun glukoosinsietotestissä tai 2) ≥ 200 mg/dl yhden tunnin 50 grammassa suun glukoositoleranssitesti.
3. Spontaani ennenaikainen synnytys: Spontaani synnytys alle 37 viikkoa 0 raskauspäivää.
4. Alhainen syntymäpaino: Syntymäpaino alle 2500 grammaa.

Määritykset: Plasma-, seerumi-, virtsa- ja napanuoraverinäytteet analysoidaan TMAO:n suhteen Hazen-laboratoriossa käyttämällä vakiintuneita stabiileja isotooppilaimennus-LC-MS/MS-menetelmiä.

TIETOJEN ANALYYSISUUNNITELMA

Tietojen ja näytteenotto Flebotomia ja virtsan itsekeräys suoritetaan ennalta määrättyinä ajankohtina (10-14 viikkoa, 24-28 viikkoa ja toimitushetkellä). Istukka- ja napanuoraverinäytteet otetaan toimituksen jälkeen toimituksen jälkeen. Veri- ja virtsanäytteet kuljettaa Lerner Research Institute -laboratorioon S. Graves, joka on saanut Hazmat-koulutuksen ja sertifikaatin liikenneministeriön kautta. Istukkanäytteet kuljetetaan vastaavasti asianmukaisen protokollan mukaisesti pääkampuksen patologian osastolle käsittelyä varten. Ruokavalion arviointitiedot kerätään verkkopohjaisella NIH Automated Self-Administred 24-hour (ASA24) Dietary Assessment Tool -tutkijan salasanalla suojatulla tilillä. Potilaan kliiniset ominaisuudet, tulokset sekä indeksiraskauden ja vastasyntyneiden tulokset kerätään potilaan sairauskertomuksesta.

Tietojen ja näytteiden säilytys Tietoturva varmistetaan rajoittamalla pääsy potilastietojen keräämiseen ja analysointiin osallistuviin tiimin jäseniin. Sairauskertomustiedot tallennetaan turvallisesti CCF REDCap -tietokannan kautta. Ruokavalion arviointitiedot tallennetaan samalla tavalla verkkopohjaiseen NIH Automated Self-Administred 24-hour (ASA24) Dietary Assessment Tool -tutkijan salasanalla suojattuun tiliin. Turvallisuusseuranta sisältää turvallisen ja puhtaan kliinisen ympäristön varmistamisen näytteenottoa varten, asianmukaisen suonenpunktion turvallisuusprotokollan noudattamisen ja tarvikkeiden asianmukaisen hävittämisen nimetyille kliinisille alueille. Tunnistamattomat verinäytteet tallennetaan ja analysoidaan Stanley Hazen -laboratoriossa Lerner Research Institutessa. Tunnistamattomat istukat varastoidaan ja käsitellään pääkampuksen patologian laboratoriossa.

Tilastollinen analyysi:

Näytteen koko Koska meillä on rajoitetusti tietoa TMAO:sta raskauden aikana, teholaskennan arvioitiin havaitsevan keskimääräiset TMAO-erot ryhmien välillä käyttämällä kahden näytteen T-testiä merkitsevyystasolla 0,05, 80 %:n teholla ja 200 potilaan kokonaisnäytteen koolla 10 potilaan kanssa. % keskeyttämisprosentti. Kirjallisuudesta arvioidut TMAO:n standardipoikkeamat vaihtelevat välillä 0,61 - 10,15 mikromoolia/l, olettaen raskausryhmän verenpainetautien suhde normaaliin ryhmään 1:10, havaittavissa olevat keskimääräiset TMAO-erot ovat 0,451 - 7,497 mikromoolia/l. .

Analyysisuunnitelma:

Potilaita, joilla on raskauden verenpainetauti, verrataan potilaisiin, joilla ei ole raskauden aikana. Suunnilleen normaalisti jakautuneet jatkuvat mittaukset tehdään yhteenveto keskiarvojen ja keskihajonnan avulla ja niitä verrataan kahden otoksen t-testeillä. Jatkuvat suuret, jotka osoittavat poikkeamista normaalista ja järjestysmittauksista, kootaan yhteen mediaanilla ja kvartiileilla ja niitä verrataan Wilcoxonin rank-summatesteillä. Kategoriset tekijät lasketaan yhteen frekvenssien ja prosenttiosuuksien avulla ja niitä verrataan Pearsonin khin neliötesteillä tai Fisherin täsmällisillä testeillä. Jos ryhmät eroavat lähtötilanteen ominaisuuksista, suoritetaan lineaarinen regressiosäätö kliinisesti merkittävien tekijöiden mukaan. Lopullisten tietojen jakautumisesta riippuen Pearson- tai Spearman-korrelaatio lasketaan TMAO-tason ja muiden jatkuvien muuttujien välillä. Jokaisen kategoriallisten tekijöiden tason TMAO-tasosta tehdään yhteenveto käyttämällä keskiarvoa ja keskihajontaa tai mediaania ja kvartiileja, ja sitä verrataan käyttämällä ANOVA- tai Kruskal-Wallis-testejä. Kaikki analyysit tehdään SAS:lla (versio 9.4, SAS Institute, Cary, NC) ja p < 0,05 katsotaan tilastollisesti merkitseviksi.

TOTEUTETTAVUUS

Monitieteisen tutkijaryhmän kokemus ja synnytys- ja gynekologisen instituutin sekä sydän- ja aineenvaihduntatieteiden laitoksen olemassa oleva tutkimusinfrastruktuuri takaavat tämän ehdotuksen toteutettavuuden ja onnistumisen yhden vuoden apurahajakson aikana. Kaikkien määritysten ja analyysien suorittamiseen tarvittava asiantuntemus on tunnistettu.

TUTKIMUKSEN VAIKUTUKSET

HDP on tulevaisuuden sydän- ja verisuonitautien riskitekijä. Jos pystymme määrittämään mekanismin, joka edistää HDP:n ja mahdollisesti tulevan sydän- ja verisuonitautien kehittymistä, voimme ehkä seuloa ihmisiä varhaisessa raskaudessa tai jopa ennakkokäsityksiä ja puuttua tuloksiin. Lisätietoa siitä, kuinka äidin ruokavalio, suoliston mikrobikoostumus ja sen metaboliittien tuotanto voivat vaikuttaa verisuonten ja endoteelin toimintaan raskauden aikana, on uutta. Tämän tutkimuksen havainnot voivat olla mullistavia siinä, kuinka käsittelemme äitien terveyttä ja tarjota uusia ja jännittäviä keinoja terapeuttisiin interventioihin.