Metaboliti microbici ed esiti dello studio sulla gravidanza (MMOPS)

PROGETTAZIONE DI STUDIO

Piano generale: valutare i marcatori materni del metabolismo, incluso il metabolita microbico materno, TMAO, durante la gravidanza e la sua associazione con lo sviluppo di disturbi ipertensivi della gravidanza.

Progettazione e metodi di ricerca:

Questa potenziale coorte longitudinale arruolerà pazienti in gravidanza nel primo trimestre di gravidanza (10-14 settimane di gestazione). Campioni di plasma, siero, RNA del sangue e urina verranno raccolti al momento dell'arruolamento, insieme alla valutazione della dieta e alle informazioni demografiche auto-riportate. Il volume totale di sangue per scopi di laboratorio di ricerca sarà di 22,5 cc (una provetta con EDTA da 10 ml, una provetta con separatore di siero da 10 ml e una provetta con RNA del sangue PAXgene da 2,5 ml). Se i laboratori di ricerca vengono prelevati in coordinamento con altri laboratori prenatali necessari, il volume massimo previsto per il prelievo di sangue sarebbe di 42-50 cc di sangue, a seconda della combinazione dei laboratori prenatali comunemente ordinati. La quantità totale di sangue prelevato da soggetti in gravidanza (compresi i prelievi clinici e di ricerca) non supererà i 50 ml in un periodo di due settimane. I campioni di plasma, siero, RNA del sangue e urina verranno nuovamente raccolti nel secondo trimestre, a 24-28 settimane. Inoltre, al momento del ricovero per il parto verranno raccolti il ​​plasma materno, il siero, l'RNA del sangue e le urine. Dopo il parto verrà prelevato un campione di 10 cc di sangue cordonale e la placenta verrà inviata all'anatomia patologica per la valutazione. Misureremo i livelli di TMAO e altri marcatori del metabolismo su tutti e tre i campioni materni e su quello del sangue cordonale. Verranno ottenuti il ​​DNA dal buffy coat del prelievo di plasma e l'RNA da una provetta di sangue PAXgene per l'analisi molecolare dei biomarcatori metabolici. La placenta verrà esaminata patologicamente con attenzione alla patologia vascolare. Inoltre, in ogni momento verrà ottenuta un'anamnesi alimentare utilizzando lo strumento ASA24 (strumento automatizzato di valutazione dietetica 24 ore su 24, automatizzato e autosomministrato), guidato dall'intervistatore, un sondaggio basato sul web fornito gratuitamente attraverso il sito web del National Institutes of Health con un programma account protetto da password riservato ai ricercatori (https://epi.grants.cancer.gov/asa24/).

Criteri di ammissibilità La popolazione dello studio includerà persone incinte di età compresa tra 18 e 45 anni, che ricevono cure prenatali e pianificano il parto presso la Cleveland Clinic (sedi dell'Ohio). I pazienti devono essere in grado di parlare e leggere inglese, avere un'unica gravidanza intrauterina vitale senza anomalie fetali note al momento dell'arruolamento. Saranno esclusi i pazienti con feti con diagnosi di gestazione multipla, anomalie cromosomiche, difetti congeniti maggiori o infezioni congenite.

Identificazione e reclutamento dei soggetti Il gruppo di ricerca esaminerà i programmi di ecografia per i siti di studio scelti per il reclutamento. Esamineremo la loro cartella clinica elettronica (EMR) per verificarne l'idoneità. Se identificati come candidati idonei, verranno contrassegnati per essere contattati in merito allo studio. Se è d'accordo a saperne di più sul nostro studio, il paziente incontrerà il personale di ricerca per esaminare l'idoneità e il consenso informato, che descrive in dettaglio i benefici, gli svantaggi e i potenziali danni, il programma dello studio e le aspettative del paziente. Se scelgono di partecipare, il paziente e il personale consenziente firmeranno un documento di consenso informato. Dopo aver accettato di partecipare, al paziente verrà assegnato un ID studio, che verrà registrato nel database REDCap. Durante questa visita verranno eseguite le informazioni demografiche auto-riportate, l'anamnesi alimentare e il prelievo iniziale di sangue/raccolta delle urine.

Invieremo anche un volantino preliminare tramite MyChart ai potenziali partecipanti da rivedere prima dell'appuntamento per l'ecografia. All'arrivo le verrà chiesto se desidera saperne di più sulla ricerca e il resto del protocollo di reclutamento verrà seguito come descritto in precedenza. Il successo del reclutamento sarà valutato su base continuativa e il protocollo sarà modificato se esiste uno schema (ad esempio tempo insufficiente per rivedere i dettagli dello studio e il consenso informato).

Definizione dei risultati

1. I disturbi ipertensivi della gravidanza includono 1) ipertensione gestazionale definita come ipertensione senza proteinuria o altri segni/sintomi di disfunzione d'organo correlata alla preeclampsia che si sviluppa dopo la 20a settimana di gestazione, 2) preeclampsia definita come nuova insorgenza di ipertensione e proteinuria o nuova insorgenza di ipertensione e disfunzione significativa degli organi terminali (con o senza proteinuria), che si sviluppa tipicamente dopo la 20a settimana di gestazione in una paziente precedentemente normotesa, 3) La preeclampsia sovrapposta all'ipertensione cronica è definita come un peggioramento o un'ipertensione resistente, la nuova insorgenza di proteinuria, e /o nuova significativa disfunzione d'organo dopo 20 settimane di gestazione in una paziente con ipertensione cronica.
2. Diabete gestazionale: 1) ≥ 2 valori di glucosio pari o superiori ai criteri diagnostici Carpenter/Coustan per il diabete gestazionale su un test di tolleranza al glucosio orale di 100 grammi per tre ore, o 2) ≥ 200 mg/dL su un test di tolleranza al glucosio per via orale di 100 grammi, o 2) ≥ 200 mg/dL su un test di tolleranza al glucosio per via orale di 100 grammi test di tolleranza al glucosio orale.
3. Parto pretermine spontaneo: parto spontaneo a meno di 37 settimane e 0 giorni di gestazione.
4. Basso peso alla nascita: peso alla nascita inferiore a 2500 grammi.

Saggi: i campioni di plasma, siero, urina e sangue cordonale verranno analizzati per il TMAO nel laboratorio Hazen utilizzando metodi LC-MS/MS di diluizione isotopica stabile consolidati.

PIANO DI ANALISI DEI DATI

Raccolta di dati e campioni Il prelievo di sangue e l'autoraccolta delle urine del tratto intermedio verranno eseguiti in momenti temporali prestabiliti (10-14 settimane, 24-28 settimane e al momento del ricovero per il parto). I campioni di placenta e sangue cordonale verranno raccolti dopo la consegna dal medico di consegna. I campioni di sangue e urina verranno trasportati al laboratorio del Lerner Research Institute da S. Graves che ha ricevuto formazione e certificazione Hazmat tramite il Dipartimento dei trasporti. Allo stesso modo, i campioni di placenta verranno trasportati seguendo il protocollo appropriato al Dipartimento di Patologia del Campus Principale per l'elaborazione. I dati sulla valutazione dietetica verranno raccolti all'interno dell'account protetto da password del ricercatore dello strumento di valutazione dietetica automatizzato autoamministrato 24 ore su 24 (ASA24) basato sul web. Le caratteristiche cliniche della paziente, gli esiti, la gravidanza indice e gli esiti neonatali verranno raccolti dalla cartella clinica della paziente.

Conservazione dei dati e dei campioni La sicurezza dei dati sarà garantita limitando l'accesso ai membri del team coinvolti nella raccolta e nell'analisi dei dati dei pazienti. I dati della cartella clinica verranno archiviati in modo sicuro tramite il database CCF REDCap. I dati sulla valutazione dietetica verranno archiviati in modo simile nell'account protetto da password del ricercatore dello strumento di valutazione dietetica automatizzato auto-amministrato 24 ore su 24 (ASA24) basato sul web. Il monitoraggio della sicurezza includerà la garanzia di un ambiente clinico sicuro e pulito per la raccolta dei campioni, il rispetto di un appropriato protocollo di sicurezza per la venipuntura e il corretto smaltimento delle forniture nelle aree cliniche designate. I campioni di sangue anonimi verranno conservati e analizzati nel laboratorio Stanley Hazen presso il Lerner Research Institute. Le placente deidentificate verranno conservate ed elaborate nel laboratorio di patologia del campus principale.

Analisi statistica:

Dimensione del campione Poiché disponiamo di informazioni limitate relative al TMAO in gravidanza, il calcolo della potenza è stato stimato per rilevare le differenze medie di TMAO tra i gruppi utilizzando un test T a due campioni con un livello di significatività di 0,05, potenza dell'80% e una dimensione totale del campione di 200 pazienti con 10 % percentuale di abbandono. Le devia .

Piano di analisi:

I pazienti con disturbi ipertensivi della gravidanza saranno confrontati con quelli senza. Le misure continue approssimativamente distribuite normalmente saranno riassunte utilizzando medie e deviazioni standard e saranno confrontate utilizzando test t a due campioni. Le misure continue che mostrano deviazioni dalla normalità e le misure ordinali saranno riassunte utilizzando mediane e quartili e saranno confrontate utilizzando i test di somma dei ranghi di Wilcoxon. I fattori categorici verranno riepilogati utilizzando frequenze e percentuali e verranno confrontati utilizzando il test chi quadrato di Pearson o il test esatto di Fisher. Se i gruppi differiscono in termini di caratteristiche basali, verrà eseguito un aggiustamento della regressione lineare per fattori di importanza clinica. A seconda della distribuzione dei dati finali, verrà calcolata la correlazione di Pearson o Spearman tra il livello di TMAO e altre variabili continue. Per ciascun livello di fattori categorici, il livello di TMAO sarà riassunto utilizzando la media e la deviazione standard o la mediana e i quartili e sarà confrontato utilizzando i test ANOVA o Kruskal-Wallis. Tutte le analisi verranno eseguite utilizzando SAS (versione 9.4, The SAS Institute, Cary, NC) e una p < 0,05 saranno considerati statisticamente significativi.

FATTIBILITÀ

L'esperienza del team investigativo multidisciplinare e l'infrastruttura di ricerca esistente presso l'Istituto di Ostetricia e Ginecologia e il Dipartimento di Scienze Cardiovascolari e Metaboliche assicurano la fattibilità e il successo di questa proposta entro il periodo di sovvenzione di un anno. Sono state identificate le competenze per eseguire tutti i test e le analisi.

IMPLICAZIONI DELLA RICERCA

L’HDP è un fattore di rischio per future CVD. Se siamo in grado di attribuire un meccanismo che contribuisce allo sviluppo dell’HDP e, eventualmente, della futura CVD, potremmo essere in grado di sottoporre a screening le persone all’inizio della gravidanza o addirittura al preconcetto e intervenire per migliorare i risultati. Un’ulteriore comprensione di come la dieta materna, la composizione microbica intestinale e la produzione dei suoi metaboliti potrebbero influenzare la funzione vascolare ed endoteliale in gravidanza è nuova. I risultati di questo studio possono essere trasformativi nel modo in cui concettualizziamo la salute materna e forniamo nuove ed entusiasmanti strade per gli interventi terapeutici.