Estudo de metabólitos microbianos e resultados da gravidez (MMOPS)

DESIGN DE ESTUDO

Plano Geral: Avaliar os marcadores maternos do metabolismo, incluindo o metabólito microbiano materno, TMAO, durante a gravidez, e sua associação com o desenvolvimento de distúrbios hipertensivos da gravidez.

Desenho e Métodos de Pesquisa:

Esta coorte longitudinal prospectiva inscreverá pacientes grávidas no primeiro trimestre de gravidez (10-14 semanas de gestação). Amostras de plasma, soro, RNA sanguíneo e urina serão coletadas no momento da inscrição, junto com avaliação dietética e informações demográficas autorreferidas. O volume total de sangue para fins de laboratório de pesquisa será de 22,5 cc (um tubo de EDTA de 10 ml, um tubo separador de soro de 10 ml e um tubo de RNA de sangue PAXgene de 2,5 ml). Se os laboratórios de pesquisa forem sorteados em coordenação com outros laboratórios pré-natais necessários, o volume máximo previsto na coleta de sangue seria de 42-50 cc de sangue, dependendo da combinação de laboratórios pré-natais comumente solicitados. A quantidade total de sangue coletado de gestantes (incluindo coletas clínicas e de pesquisa) não excederá 50ml em um período de duas semanas. Amostras de plasma, soro, RNA sanguíneo e urina serão coletadas novamente no segundo trimestre, entre 24 e 28 semanas. Além disso, plasma materno, soro, RNA sanguíneo e urina serão coletados no momento da admissão ao parto. Uma amostra de 10 cc de sangue do cordão umbilical será obtida após o parto e a placenta será enviada ao patologia para avaliação. Mediremos os níveis de TMAO e outros marcadores do metabolismo em todas as três amostras maternas e do sangue do cordão umbilical. O DNA da camada leucocitária da coleta de plasma e o RNA de um tubo de sangue PAXgene serão obtidos para testes moleculares de biomarcadores metabólicos. A placenta será examinada patologicamente com atenção à patologia vascular. Além disso, um histórico alimentar será obtido em cada momento usando o ASA24 guiado por entrevistador (ferramenta automatizada de avaliação dietética autoadministrada de 24 horas) - uma pesquisa baseada na web fornecida gratuitamente por meio do site do National Institutes of Health sob um conta protegida por senha somente para pesquisador (https://epi.grants.cancer.gov/asa24/).

Critérios de elegibilidade A população do estudo incluirá gestantes com idades entre 18 e 45 anos, que recebem cuidados pré-natais e planejam dar à luz na Cleveland Clinic (localidades em Ohio). Os pacientes devem ser capazes de falar e ler inglês, ter uma única gravidez intrauterina viável, sem anomalias fetais conhecidas no momento da inscrição. Pacientes com fetos com diagnóstico de gestação múltipla, anomalias cromossômicas, defeitos congênitos importantes ou infecções congênitas serão excluídos.

Identificação e recrutamento de sujeitos A equipe de pesquisa revisará os cronogramas de ultrassom para os locais de estudo escolhidos para recrutamento. Analisaremos seu prontuário médico eletrônico (EMR) para elegibilidade. Se identificados como candidatos apropriados, eles serão sinalizados para serem abordados sobre o estudo. Se concordar em ouvir mais sobre nosso estudo, o paciente se reunirá com a equipe de pesquisa para revisar a elegibilidade e o consentimento informado, que detalha os benefícios, desvantagens e danos potenciais, cronograma do estudo e expectativas do paciente. Se decidirem participar, o paciente e a equipe consentida assinarão um documento de consentimento informado. Após concordar em participar, será atribuído ao paciente um ID do estudo, que será registrado no banco de dados REDCap. Informações demográficas autorreferidas, histórico alimentar e coleta inicial de sangue/urina serão realizadas nesta visita.

Também enviaremos um folheto preliminar via MyChart aos participantes em potencial para revisão antes da consulta de ultrassom. Ao chegar, ela será questionada se gostaria de saber mais sobre a pesquisa, e o restante do protocolo de recrutamento será seguido conforme descrito anteriormente. O sucesso do recrutamento será avaliado continuamente e o protocolo será alterado se houver um padrão (como tempo insuficiente para revisar os detalhes do estudo e consentimento informado).

Definição de Resultados

1. Os distúrbios hipertensivos da gravidez incluem 1) Hipertensão gestacional definida como hipertensão sem proteinúria ou outros sinais/sintomas de disfunção de órgãos-alvo relacionados à pré-eclâmpsia que se desenvolve após 20 semanas de gestação, 2) Pré-eclâmpsia definida como novo início de hipertensão e proteinúria ou novo início de hipertensão e disfunção significativa de órgãos-alvo (com ou sem proteinúria), tipicamente desenvolvendo-se após 20 semanas de gestação em uma paciente previamente normotensa, 3) A pré-eclâmpsia sobreposta à hipertensão crônica é definida como piora ou hipertensão resistente, o novo início de proteinúria, e /ou nova disfunção significativa de órgão-alvo após 20 semanas de gestação em paciente com hipertensão crônica.
2. Diabetes gestacional: 1) ≥ 2 valores de glicose iguais ou superiores aos critérios diagnósticos de Carpenter/Coustan para diabetes gestacional em um teste oral de tolerância à glicose de 100 gramas de três horas, ou 2) ≥200 mg/dL em um teste de 50 gramas de uma hora teste oral de tolerância à glicose.
3. Nascimento prematuro espontâneo: parto espontâneo com menos de 37 semanas e 0 dias de gestação.
4. Baixo peso ao nascer: Peso ao nascer inferior a 2.500 gramas.

Ensaios: Amostras de plasma, soro, urina e sangue do cordão umbilical serão analisadas para TMAO no laboratório Hazen usando métodos LC-MS/MS de diluição de isótopos estáveis ​​estabelecidos.

PLANO DE ANÁLISE DE DADOS

Coleta de dados e amostras A flebotomia e a autocoleta de urina intermediária serão realizadas em momentos pré-especificados (10-14 semanas, 24-28 semanas e no momento da admissão para parto). Amostras de placenta e sangue do cordão umbilical serão coletadas após o parto pelo médico responsável pelo parto. As amostras de sangue e urina serão transportadas para o laboratório do Lerner Research Institute por S. Graves, que recebeu treinamento e certificação em materiais perigosos pelo Departamento de Transportes. Amostras de placenta serão transportadas da mesma forma seguindo o protocolo adequado para o Departamento de Patologia do Campus Principal para processamento. Os dados de avaliação dietética serão coletados na conta do pesquisador da Ferramenta de Avaliação Dietética Automatizada Autoadministrada 24 horas (ASA24) baseada na web, protegida por senha. As características clínicas do paciente, os resultados da gravidez índice e os resultados neonatais serão coletados do prontuário médico do paciente.

Armazenamento de dados e amostras A segurança dos dados será garantida limitando o acesso aos membros da equipe envolvidos na coleta e análise de dados do paciente. Os dados dos registros médicos serão armazenados com segurança por meio do banco de dados CCF REDCap. Os dados de avaliação dietética serão armazenados de forma semelhante na conta do pesquisador da Ferramenta de Avaliação Dietética Automatizada Autoadministrada 24 horas (ASA24) baseada na web, protegida por senha. O monitoramento de segurança incluirá a garantia de um ambiente clínico seguro e limpo para a coleta de amostras, seguindo o protocolo de segurança apropriado para punção venosa e o descarte adequado de suprimentos em áreas clínicas designadas. Amostras de sangue desidentificadas serão armazenadas e analisadas no Laboratório Stanley Hazen no Lerner Research Institute. As placentas desidentificadas serão armazenadas e processadas no laboratório de patologia do Campus Principal.

Análise Estatística:

Tamanho da amostra Como temos informações limitadas sobre TMAO na gravidez, o cálculo do poder foi estimado para detectar diferenças médias de TMAO entre os grupos usando um teste T de duas amostras com um nível de significância de 0,05, poder de 80% e tamanho total da amostra de 200 pacientes com 10 % de taxa de abandono. Os desvios padrão de TMAO estimados na literatura variam de 0,61 a 10,15 micromol/L, assumindo que a proporção de distúrbios hipertensivos do grupo de gravidez para o grupo normal é de 1:10, as diferenças médias detectáveis ​​de TMAO foram calculadas em 0,451 a 7,497 micromol/L .

Plano de análise:

Pacientes com distúrbios hipertensivos da gravidez serão comparados àqueles sem. Medidas contínuas com distribuição aproximadamente normal serão resumidas usando médias e desvios padrão e serão comparadas usando testes t de duas amostras. Medidas contínuas que mostram desvio da normalidade e medidas ordinais serão resumidas usando medianas e quartis e serão comparadas usando testes de soma de postos de Wilcoxon. Fatores categóricos serão resumidos usando frequências e porcentagens e serão comparados usando testes qui-quadrado de Pearson ou testes exatos de Fisher. Se os grupos diferirem nas características iniciais, será realizado ajuste de regressão linear para fatores de importância clínica. Dependendo da distribuição dos dados finais, será calculada a correlação de Pearson ou Spearman entre o nível de TMAO e outras variáveis ​​contínuas. Para cada nível de fatores categóricos, o nível de TMAO será resumido usando média e desvio padrão ou mediana e quartis e será comparado usando testes ANOVA ou Kruskal-Wallis. Todas as análises serão feitas utilizando SAS (versão 9.4, The SAS Institute, Cary, NC) e p < 0,05 serão considerados estatisticamente significativos.

VIABILIDADE

A experiência da equipe multidisciplinar de investigação e a infraestrutura de pesquisa existente no Instituto de Obstetrícia e Ginecologia e no Departamento de Ciências Cardiovasculares e Metabólicas garantem a viabilidade e o sucesso desta proposta dentro do período de subvenção de um ano. A experiência para executar todos os ensaios e análises foi identificada.

IMPLICAÇÕES DA PESQUISA

HDP é fator de risco para futuras DCV. Se formos capazes de atribuir um mecanismo que contribua para o desenvolvimento da DHG e, possivelmente, de futuras DCV, poderemos ser capazes de rastrear as pessoas no início da gravidez ou mesmo no pré-conceito e intervir para melhorar os resultados. Uma maior compreensão de como a dieta materna, a composição microbiana intestinal e a produção de seus metabólitos podem influenciar a função vascular e endotelial na gravidez é nova. As descobertas deste estudo podem ser transformadoras na forma como conceituamos a saúde materna e fornecem caminhos novos e estimulantes para intervenções terapêuticas.