Микробные метаболиты и результаты исследования беременности (MMOPS)

ДИЗАЙН ИССЛЕДОВАНИЯ

Общий план: оценить материнские маркеры метаболизма, включая материнский микробный метаболит ТМАО, во время беременности и его связь с развитием гипертензивных расстройств во время беременности.

Дизайн и методы исследования:

В эту проспективную продольную группу будут включены беременные пациентки в первом триместре беременности (10–14 недель беременности). Образцы плазмы, сыворотки, РНК крови и мочи будут собраны во время регистрации, наряду с оценкой диеты и демографической информацией, сообщаемой самими участниками. Общий объем крови для исследовательских лабораторных целей составит 22,5 куб.см (одна пробирка с ЭДТА объемом 10 мл, одна пробирка с сепаратором сыворотки объемом 10 мл и одна пробирка с РНК PAXgene в крови объемом 2,5 мл). Если исследовательские лаборатории привлекаются в координации с другими необходимыми пренатальными лабораториями, ожидаемый максимальный объем при взятии крови составит 42-50 куб.см крови, в зависимости от комбинации обычно заказываемых дородовых лабораторий. Общий объем крови, взятой у беременных (включая клинические и исследовательские заборы), не должен превышать 50 мл в течение двухнедельного периода. Образцы плазмы, сыворотки, РНК крови и мочи снова будут собраны во втором триместре, на сроке 24–28 недель. Кроме того, во время родов будут собраны плазма, сыворотка, РНК крови и моча матери. После родов будет получен образец пуповинной крови объемом 10 мл, а плацента будет отправлена ​​в патологоанатомический центр для оценки. Мы измерим уровни ТМАО и других маркеров метаболизма во всех трех образцах материнской крови и пуповинной крови. ДНК из лейкоцитной пленки коллекции плазмы и РНК из пробирки крови PAXgene будут получены для молекулярного тестирования метаболических биомаркеров. Плацента будет исследована на патологию с вниманием на сосудистую патологию. Кроме того, в каждый момент времени будет собираться история питания с использованием ASA24 (автоматизированный 24-часовой инструмент для самостоятельной оценки питания) под руководством интервьюера — онлайн-опроса, бесплатно предоставляемого через веб-сайт Национальных институтов здравоохранения под лицензией. Учетная запись, защищенная паролем только для исследователей (https://epi.grants.cancer.gov/asa24/).

Критерии отбора В состав исследуемой популяции войдут беременные в возрасте от 18 до 45 лет, которые получают дородовую помощь и планируют роды в клинике Кливленда (места Огайо). Пациентки должны уметь говорить и читать по-английски, иметь единственную жизнеспособную внутриутробную беременность без известных на момент включения в исследование отклонений плода. Пациенты с плодами, у которых диагностирована многоплодная беременность, хромосомные аномалии, серьезные врожденные дефекты или врожденные инфекции, будут исключены.

Идентификация и набор субъектов. Исследовательская группа рассмотрит графики УЗИ для выбранных исследовательских центров для набора. Мы проверим их электронную медицинскую карту (EMR) на предмет соответствия критериям. Если они будут определены как подходящие кандидаты, они будут помечены для обсуждения вопроса об исследовании. Если пациент согласен услышать больше о нашем исследовании, он встретится с исследовательским персоналом для проверки права на участие и информированного согласия, в котором подробно описываются преимущества, недостатки и потенциальный вред, график исследования и ожидания пациента. Если они решат участвовать, пациент и давший согласие персонал подпишут документ об информированном согласии. После согласия на участие пациенту будет присвоен идентификатор исследования, который будет записан в базе данных REDCap. Во время этого визита будет предоставлена ​​самостоятельная демографическая информация, анамнез диеты и первоначальный анализ крови/мочи.

Мы также отправим потенциальным участникам предварительный флаер через MyChart для ознакомления перед назначением УЗИ. По прибытии ее спросят, хочет ли она узнать больше об исследовании, а остальная часть протокола набора будет выполнена, как описано ранее. Успех набора будет оцениваться на постоянной основе, и в протокол будут вноситься поправки, если есть закономерность (например, недостаточное время для рассмотрения деталей исследования и получения информированного согласия).

Определение результатов

1. Гипертензивные расстройства у беременных включают 1) гестационная гипертензия, определяемая как гипертензия без протеинурии или других признаков/симптомов органной дисфункции, связанной с преэклампсией, которая развивается после 20 недель беременности, 2) преэклампсия, определяемая как новое начало гипертензии и протеинурии или новое начало гипертензии и значительной дисфункции органов-мишеней (с протеинурией или без нее), обычно развивающихся после 20 недель беременности у пациенток с ранее нормальным давлением, 3) преэклампсия, наложившаяся на хроническую гипертензию, определяется как ухудшение или резистентная гипертензия, новое начало протеинурии и /или новая значительная дисфункция органов-мишеней после 20 недель беременности у пациентки с хронической гипертонией.
2. Гестационный диабет: 1) ≥ 2 значений уровня глюкозы, соответствующих или превышающих диагностические критерии Карпентера/Костана для гестационного диабета, при трехчасовом 100-граммовом пероральном тесте на толерантность к глюкозе или 2) ≥200 мг/дл при одночасовом 50-граммовом тесте. пероральный тест на толерантность к глюкозе.
3. Спонтанные преждевременные роды: самопроизвольные роды на сроке менее 37 недель и 0 дней беременности.
4. Низкий вес при рождении: Вес при рождении менее 2500 грамм.

Анализы. Образцы плазмы, сыворотки, мочи и пуповинной крови будут анализироваться на ТМАО в лаборатории Хазена с использованием общепринятых методов ЖХ-МС/МС с разбавлением стабильных изотопов.

ПЛАН АНАЛИЗА ДАННЫХ

Сбор данных и проб. Кровопускание и самостоятельный сбор средней порции мочи будут выполняться в заранее определенные моменты времени (10–14 недель, 24–28 недель и во время поступления для родов). Образцы плаценты и пуповинной крови будут взяты после родов врачом, осуществляющим роды. Образцы крови и мочи будут доставлены в лабораторию Научно-исследовательского института Лернера С. Грейвсом, который прошел обучение и сертификацию по работе с химическими веществами в Министерстве транспорта. Образцы плаценты также будут доставлены в соответствии с надлежащим протоколом в отделение патологии главного кампуса для обработки. Данные оценки диеты будут собираться в защищенной паролем учетной записи исследователя с помощью автоматизированного 24-часового самоуправляемого 24-часового инструмента оценки питания NIH (ASA24). Клинические характеристики пациента, исходы беременности и неонатальные исходы будут собраны из медицинской карты пациента.

Хранение данных и проб Безопасность данных будет обеспечиваться за счет ограничения доступа к тем членам команды, которые участвуют в сборе и анализе данных пациентов. Данные медицинской документации будут надежно храниться в базе данных CCF REDCap. Данные оценки диеты будут аналогичным образом храниться в защищенной паролем учетной записи исследователя в рамках автоматизированного 24-часового самостоятельного администрирования NIH (ASA24) с помощью инструмента оценки диеты. Мониторинг безопасности будет включать обеспечение безопасной и чистой клинической среды для сбора образцов, соблюдение соответствующего протокола безопасности при венепункции и правильную утилизацию расходных материалов в отведенных клинических зонах. Обезличенные образцы крови будут храниться и анализироваться в лаборатории Стэнли Хейзена Исследовательского института Лернера. Обезличенные плаценты будут храниться и обрабатываться в патологоанатомической лаборатории главного кампуса.

Статистический анализ:

Размер выборки Поскольку у нас есть ограниченная информация о ТМАО во время беременности, расчет мощности был рассчитан на выявление средних различий ТМАО между группами с использованием двухвыборочного Т-теста с уровнем значимости 0,05, мощностью 80% и общим размером выборки 200 пациентов с 10 % уровень отчисления. Стандартные отклонения ТМАО, оцененные по литературным данным, составляют от 0,61 до 10,15 микромоль/л, если предположить, что соотношение гипертензивных расстройств в группе беременных и в группе нормальных составляет 1:10, выявляемые средние различия ТМАО были рассчитаны в пределах от 0,451 до 7,497 микромоль/л. .

План анализа:

Пациенток с гипертоническими расстройствами во время беременности будут сравнивать с пациентками без них. Непрерывные показатели с приблизительно нормально распределенным распределением будут суммироваться с использованием средних значений и стандартных отклонений и сравниваться с использованием двухвыборочных t-тестов. Непрерывные показатели, показывающие отклонение от нормальности, и порядковые меры будут суммироваться с использованием медиан и квартилей и сравниваться с использованием критериев суммы рангов Уилкоксона. Категориальные факторы будут суммированы с использованием частот и процентов и будут сравниваться с использованием критериев хи-квадрат Пирсона или точных критериев Фишера. Если группы различаются по исходным характеристикам, будет выполнена поправка на линейную регрессию с учетом факторов клинической значимости. В зависимости от распределения окончательных данных будет рассчитана корреляция Пирсона или Спирмена между уровнем ТМАО и другими непрерывными переменными. Для каждого уровня категориальных факторов уровень ТМАО будет суммирован с использованием среднего и стандартного отклонения или медианы и квартилей и будет сравниваться с использованием ANOVA или тестов Крускала-Уоллиса. Все анализы будут выполняться с использованием SAS (версия 9.4, Институт SAS, Кэри, Северная Каролина) и p <0,05 будут считаться статистически значимыми.

ВОЗМОЖНОСТЬ

Опыт междисциплинарной следственной группы и существующая исследовательская инфраструктура в Институте акушерства и гинекологии и отделении сердечно-сосудистых и метаболических наук гарантируют осуществимость и успех этого предложения в течение одного года грантового периода. Были определены специалисты для проведения всех анализов и анализов.

ПОСЛЕДСТВИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

HDP является фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний в будущем. Если мы сможем объяснить механизм, способствующий развитию ГБП и, возможно, будущих ССЗ, мы сможем проводить скрининг людей на ранних стадиях беременности или даже на ранних стадиях зачатия и вмешиваться для улучшения результатов. Дальнейшее понимание того, как диета матери, микробный состав кишечника и выработка его метаболитов могут влиять на функцию сосудов и эндотелия во время беременности, является новым. Результаты этого исследования могут изменить наше представление о материнском здоровье и открыть новые и интересные возможности для терапевтических вмешательств.