Bakteeri- ja sienipatogeenien lajispektrin ja biologisten ominaisuuksien arviointi terveydenhuoltoon liittyvissä Ukrainan infektioissa ja in vitro Uusien 4-tiatsolidinonijohdannaisten antimikrobisen ja sienilääkkeen toiminnan tutkiminen. (HAIsUA)

Tiivistelmä englanniksi Yulian Konechnyi Terveydenhoitoon liittyvien infektioiden bakteeri- ja sieni-aiheuttajien lajispektri ja biologiset ominaisuudet ja niiden vastaisen mikrobien vastaisen vaikutuksen tutkimus 4-tiatsolidinonijohdannaisia ​​käyttämällä. - Käsikirjoituksen oikeuksia koskeva pätevä tieteellinen työ.

Väitöskirja tohtorin tutkintoa varten. erikoisalalla 222 Lääketiede (Tietoalue 22 Terveydenhuolto). - Danylo Halytskyy Lviv National Medical University, Ukrainan terveysministeriö, Lviv, 2021.

Opinnäytetyön tiivistelmä Opinnäytetyö esittää teoreettisen yleistyksen ja ratkaisun ajankohtaiseen terveydenhuollon tieteelliseen ja käytännön ongelmaan, kuten terveydenhuoltoon liittyvien infektioiden (HAI) rakenteen ja jakautumisen määrittelyyn Ukrainassa viime vuosina, taudinaiheuttajien lajien ominaisuuksista, ja antibioottiresistenssin leviäminen, HAI-tautien kliiniset ja mikrobiologiset ominaisuudet, mukaan lukien harvinaisten HAI-patogeenien aiheuttamat ominaisuudet, sekä uusien mikrobien ja sienilääkkeiden kemiallisten yhdisteiden etsiminen, synteesi ja seulonta uusien mikrobilääkkeiden prototyyppien käyttöönottamiseksi .

Tutkimussuunnitelman mukaisesti suoritettiin Ukrainan CDC:n tietojen analysointi HAI-tapausten rekisteröinnistä Ukrainassa vuosina 2009-2020. Tämän seurauksena ensimmäistä kertaa Ukrainassa analysoitiin terveyshaittojen rekisteröintiä viimeisten 12 vuoden ajalta. tulosten mukaan TAI-tapauksia on rekisteröity keskimäärin 4 759 ± 710 vuodessa. Analysoidut materiaalit antavat aihetta väittää, että HAI-tautien esiintyvyys maassa aliarvioitiin merkittävästi.

Neljän paikallisen sairaalan teho-osaston 250 potilaan kattavan, dynaamisen, kliinisen ja laboratorioinstrumentaalisen tutkimuksen tulosten sekä mikrobiologisten ja epidemiologisten kriteerien perusteella vastaava diagnoosi vahvistettiin 205 potilaalla. TAI-potilaista 46,8 % oli miehiä ja 53,2 % naisia. Kaikista HAI-tapauksista 24,9 % oli lapsia (mukaan lukien 8,8 % vastasyntyneitä), 64,9 % - 18-60-vuotiaita ja vanhempia aikuisia (> 60 vuotta) 10,2 %. Yleisimmät nosologiat olivat hengitystieinfektiot (36,6 %) ja virtsatietulehdukset (34,1 %). Suurin osa HAI-tapauksista (58,6 %) esiintyi 5.–14. sairaalassaolopäivänä.

Biomateriaalia otettiin kolmesataakahdeksankymmentäyhdeksän, joista eristettiin 309 mikro-organismikantaa, joista hallitsivat gramnegatiiviset bakteerit (51,5 %), joiden lajikirjossa oli edustajia 27 eri lajista. Pseudomonas-suvun edustajat olivat eniten eristettyjä - 50 isolaattia, 16,2% patogeenien kokonaismäärästä. Grampositiivista mikrobiotaa edustaa 15 erilaista taudinaiheuttajalajia, joista eniten - Staphylococcus-suvun jäseniä - 52 isolaattia, mikä on 16,8 % taudinaiheuttajien kokonaismäärästä. Sienistä eristettiin 12 erilaista taudinaiheuttajalajia, joista suurin osa Candida non-albicansia - 20 isolaattia, mikä on 6,5 % taudinaiheuttajien kokonaismäärästä.

Ensimmäistä kertaa Ukrainassa on tunnistettu ja kuvattu harvinaisten patogeenien Raoultella (Klebsiella) terrigena ja Vibrio metchikovii aiheuttamia kliinisiä tapauksia. Raportoituja tapauksiamme verrattiin kirjallisuudessa kuvattuihin kliinisiin tapauksiin. Osoitettiin, että R. terrigena -isolaatilla on kalvonmuodostusominaisuudet, jotka ovat selvempiä kuin standardikannassa Raoutella terrigena ATCC 33257, ja kalvon muodostumisnopeus ylittää stafylokokkien kalvonmuodostusnopeuden.

Analysoitaessa Vibrio metchikoviin aiheuttamaa kliinistä tapausta on huomioitava, että todennäköisin infektion syy on verisuoniproteesien intraoperatiivinen mikrobikontaminaatio.

Patogeenien lajien tunnistaminen suoritettiin käyttämällä biokemiallisia testijärjestelmiä (MIKRO-LA-TEST ErbaLachema, Tšekki), käyttämällä MALDI-TOF:ia (suoritettu lääketieteellisen korkeakoulun mikrobiologian osastolla Bydgoszczissa, Puolassa) ja yksittäisille kannoille - 16sRNA- ID. Viljelmien biokemiallisen tunnistamisen tunnistuspistemäärä (indeksi) oli > = 95 % tai > = 99 % 87,4 %:lla isolaateista (n = 270). 50,8 %:lla kannoista (n=157) epätyypillisyysindeksi (Tin) oli 0,25-0,49, eli nämä kannat voidaan luonnehtia epätyypillisiksi. MALDI ID-pisteet 95,5 % isolaateista (n=295) oli > = 2,0, eli osoitti hyvää lajitunnistusta, muilla isolaateilla ID-pisteet 1,7-1,9, joka osoittaa yleisen tunnistamisen. Klebsiella-suvun gramnegatiivisten sauvojen PCA-analyysi mahdollisti niiden jakamisen 4 pääklusteriin ja osoitti isolaattien merkittävää samankaltaisuutta ja yhdessä RAPD-analyysin kanssa mahdollisti patogeenien leviämisen sairaalassa. 16S rRNA-analyysin tulosten mukaan suoritettiin Klebsiella pneumoniae -isolaattien vertailuja, jotka osoittivat infektion yhteisen alkuperän. Erilaiset tunnistusmenetelmät osoittivat, että tulosten täydellinen yhteensattuma kirjattiin 76,1 %:lle kannoista (n=235). Suurin tunnistustarkkuus näytetään 16sRNA-analyysissä, mutta nopeus on MALDI-TOF-analyysissä.

Antibioottiherkkyyden tulokset osoittivat, että 62,8 % (n=194) isolaateista oli MDR:ää, 7,4 % (n=23) oli EDR:ää, 28,8 % (n=89) ei ollut MDR:ää. 1 % (n = 3) kantoja laskettiin PDR:lle: 2 - P. putida ja 1 - P. aeruginosa. 33,8 % (n=25) tutkituista enterobakteereista tuotti ESBL:ää toisesta 47 tutkitun isolaatin ryhmästä (83,9 %) tuotti OXA-48:aa, joista kaikki isolaatit olivat MDR. Suurin osa sienikannoista (82,9 %) oli resistenttejä flukonatsolille, mikä tämän lääkkeen yleisin valinta voi selittää sieni-infektion empiirisellä hoidolla.

Eristettiin Achromobacter xylosoxidans (№ LMU-147) ja Serratia marcescens (№ LMU-48) viljelmät, joilla niiden rooli HAI:n aiheuttajana todistettiin. Eristetyt kannat luokitellaan luokan IV patogeenisiksi UA-luokituksen perusteella (US CDC-luokitus - Biosafety level 1), mutta ne voivat tunkeutua sisäelimiin, mikä on selvemmin hammastettu. Candida utilis (LMU-127) on matalapatogeeninen kanta, jolla ei ole invasiivisia ominaisuuksia.

Viisikymmentäviisi uutta syntetisoitua tiatsolijohdannaista käytettiin etsimään ja tutkimaan uusia kemiallisia yhdisteitä, joilla on antibioottiaktiivisuutta. 3-[5-(1H-indol-3-yylimetyleeni)-4-okso-2-tioksotiatsolidin-3-yyli]propaanihapolla oli voimakas antifungaalinen vaikutus Candida-suvun sieniä vastaan ​​25 μg /ml ja selektiivinen antimikrobinen vaikutus Escherichia colia vastaan ​​2-[5-(1H-indol-3-yylimetyleeni)-4-okso-2-tioksotiatsolidin-3-yyli]etaanisulfonihapossa, jolla on samanlainen vaikutus (MIC=25 μg /ml). Aktiivisin Staphylococcus aureus -ryhmää vastaan ​​olivat 2-(5-ylideeni-4-okso-2-tioksotiatsolidin-3-yyli)sukkinimidit, joiden terminaalinen fragmentti oli C5-asemassa.

2-syaani-2-[5-(etoksimetyleeni)-4-okso-3-fenyylitiatsolidin-2-ylideeni]-N-(o-tolyyli)asetamidijohdannaiselle, joka ei sisällä fenyleeniamiini- tai bentsylideeniosaa rakenne tiatsolidoniytimen asemassa C5 osoitti suurinta aktiivisuutta monilääkeresistenttiä kliinistä Pseudomonas aeruginosa -kantaa vastaan.

Laboratorio-eläinmallissa tutkittiin antimikrobista vaikutusta omaavan "johtajayhdisteen" immunotoksisia/allergeenisia/akuutteja toksisia vaikutuksia. Immunotoksisia ja allergeenisia vaikutuksia ei havaittu, mutta tulehdusta ehkäisevä vaikutus on kohtalainen. Taustalla CD3 T-lymfosyyttien absoluuttisen lukumäärän lisääntyminen 21,46 %:lla havaittiin CD22 B-lymfosyyttien kvantitatiivisen tason lievä lasku (1,98 %:lla). Suppressorilinkin aktivointi aiheutti jonkin verran laskua immunosäätelyindeksissä (indikaattori on epäluotettava).

Testiaineen vaikutus koe-eläinten immunoglobuliinien ja interleukiinien tasoon osoitti IgA:n merkittävää laskua 21,4 % (p < 0,05) ja IgG:n nousua 21,2 %. Siten fagosyyttijärjestelmän aktiivisuus lisääntyi neutrofiilien fagosyyttiluvun ja absorptioominaisuuksien kasvun suhteen. Tällaisen biologisen aktiivisuuden selektiivisyys voi olla käyttökelpoinen joidenkin immunopatologisten tilojen hoidossa.

Tunnistetut vaikutukset, jotka liittyvät antifungaaliseen aktiivisuuteen, osoittavat mahdollisuuksia tutkia edelleen "lääkkeen kaltaista molekyyliä", jolla on monikohdevaikutus.

HAI:n esiintyvyyden, niiden rekisteröinnin, spesifisen diagnostiikan tilan analyysi, nykyaikaisten mikrobiisolaattien tunnistusmenetelmien vertailu kliinisestä materiaalista viittaa tarpeeseen nostaa mikrobiologisen tutkimuksen tasoa, standardoidun rekisteröintijärjestelmän käyttöönottoa ja sairaalatutkimuksen tasoa. infektiot, joilla on mahdollisesti haitallisia terveysvaikutuksia.

Opinnäytetyön tulosten ja isolaattien biologisten ominaisuuksien tutkimuksen mukaan vastaavat kannat talletettiin Ukrainan kansallisen tiedeakatemian mikrobiologian ja virologian instituutin varastoon.

Tutkimuksen perusteella myönnettiin 2 hyödyllisyysmallipatenttia. Lisäksi molekyylitelakointitutkimukset ovat osoittaneet, että "johtoyhdiste" 7-(3,4-dimetoksifenyyli)-5-metyyli-3H-tiatsolo[4,5-b]pyridin-2-oni on osoittanut hyvää sitoutumista valittuun proteiiniin. vertailukohteita verrattuna N21-esittäjään ja siprofloksasiiniin.

Avainsanat Terveydenhuoltoon liittyvät infektiot (HAI), sairaalainfektiot, mikrobilääkeresistenssi, antibioottiresistenssi, laitteisiin liittyvät patogeenit, antimikrobinen vaikutus, antifungaalinen vaikutus, 4-tiatsolidinonit, tiatsolit, soluimmuniteetti, immunotrooppinen vaikutus, marsut, harvinaiset patogeenit, MALDI.

Julkaisut. Opinnäytetyömateriaalien mukaan julkaistiin 10 artikkelia, joista 8 artikkelia indeksoitu Web of Science- ja/tai Scopus-lehdissä, artikkeli ukrainalaisessa ammattilehdessä (luokka "B"), 1 artikkeli ei-ammatillisessa lehdessä.

Työn tulokset esiteltiin 17 konferenssissa, mukaan lukien suullisen raportin muodossa 3 kansainvälisessä konferenssissa Ukrainan ulkopuolella ja 1 konferenssissa Ukrainassa.

Työtulosten perusteella julkaistiin 2 hyödyllisyysmallipatenttia ja 3 todistusta mikro-organismikannan alkulaskeutumisesta.