Bakteriális és gombás kórokozók fajspektrumának és biológiai tulajdonságainak értékelése egészségügyi ellátással összefüggő ukrajnai fertőzésekben és in vitro Új 4-tiazolidinon származékok antimikrobiális és gombaellenes hatásának vizsgálata. (HAIsUA)

Angol nyelvű kivonat Yulian Konechnyi Az egészségügyi ellátással összefüggő fertőzések bakteriális és gombás kórokozóinak fajspektruma és biológiai tulajdonságai, valamint ezek elleni antimikrobiális hatás vizsgálata 4-tiazolidinon származékok felhasználásával. - Minősítő tudományos munka a kézirat jogairól.

Szakdolgozat a Ph.D fokozat megszerzéséhez. szakon 222 Orvostudomány (Tudásterület 22 Egészségügy). - Danylo Halytskyy Lviv Nemzeti Orvostudományi Egyetem, Ukrajna Egészségügyi Minisztériuma, Lviv, 2021.

A tézis összefoglalója Az értekezés az egészségügy jelenlegi tudományos és gyakorlati problémájának elméleti általánosítását és megoldását mutatja be, mint az elmúlt évek ukrajnai egészségügyi ellátással összefüggő fertőzései (HAI) szerkezetének és eloszlásának meghatározása, a kórokozók fajspektrumának jellemzői, valamint az antibiotikum-rezisztencia terjesztése, a HAI-k klinikai és mikrobiológiai jellemzői, ideértve a HAI-k ritka kórokozói által okozottakat is, valamint új antimikrobiális és gombaellenes hatású kémiai vegyületek felkutatása, szintézise, ​​szűrése az antimikrobiális szerek új prototípusainak bemutatása érdekében .

A tanulmány felépítése és az ukrán CDC adatainak elemzése az ukrajnai HAI-esetek 2009-2020 közötti nyilvántartására vonatkozóan készült. Ennek eredményeként Ukrajnában először elemezték a HAI-k nyilvántartását az elmúlt 12 évben; az eredmények szerint évente átlagosan 4759 ± 710 HAI-esetet regisztráltak. Az elemzett anyagok alapot adnak arra, hogy jelentős mértékben alábecsüljük a HAI-k előfordulását az országban.

A 4 helyi kórház intenzív osztályának 250 betegének átfogó, dinamikus, klinikai és laboratóriumi-műszeres vizsgálata alapján, mikrobiológiai és epidemiológiai kritériumok alapján 205 betegnél igazolták a megfelelő diagnózist. A HAI-ban szenvedők 46,8%-a férfi, 53,2%-a nő volt. Az összes HAI-eset közül 24,9% volt gyermek (ebből 8,8% újszülött), 64,9% - 18-60 év közöttiek, idősebb felnőttek (60 év felettiek) 10,2%. A leggyakoribb nozológiák a légúti fertőzések (36,6%) és a húgyúti fertőzések (34,1%) voltak. A legtöbb HAI (58,6%) a kórházi tartózkodás 5. és 14. napja között fordult elő.

Háromszáznyolcvankilenc bioanyagot vettek, amelyekből 309 mikroorganizmus törzset izoláltak, amelyek között a Gram-negatív baktériumok domináltak (51,5%), amelyek fajspektrumában 27 különböző faj képviselői szerepeltek. A Pseudomonas nemzetség képviselői voltak a leginkább izoláltak - 50 izolátum, a kórokozók teljes számának 16,2% -a. A Gram-pozitív mikrobiotát 15 különböző kórokozófaj képviseli, a legtöbb - a Staphylococcus nemzetség tagjai - 52 izolátum, ami az összes kórokozó 16,8%-a. A gombák közül 12 különböző kórokozófajt izoláltak, ezek közül a legtöbb Candida non-albicans - 20 izolátum, ami az összes kórokozó szám 6,5%-a.

Ukrajnában először azonosítottak és írtak le a Raoultella (Klebsiella) terrigena és a Vibrio metchikovii ritka kórokozók által okozott klinikai eseteket. Jelentett eseteinket összehasonlítottuk a szakirodalomban leírt klinikai esetekkel. Kimutatták, hogy az R. terrigena izolátum filmképző tulajdonságokkal rendelkezik, amelyek erősebbek, mint a standard Raoutella terrigena ATCC 33257 törzs, és a filmképződés sebessége meghaladja a staphylococcusok filmképződésének sebességét.

A Vibrio metchikovii által okozott klinikai esetet elemezve meg kell jegyezni, hogy a fertőzés legvalószínűbb oka az érprotézisek intraoperatív mikrobiális szennyeződése.

A kórokozók fajok azonosítását biokémiai tesztrendszerekkel (MIKRO-LA-TEST ErbaLachema, Csehország), MALDI-TOF-fel (a Bydgoszcz-i Orvostudományi Főiskola Mikrobiológiai Tanszékén, Lengyelországban) és az egyes törzsekre - 16sRNS-t alkalmazták. ID. A tenyészetek biokémiai azonosításának azonosítási pontszáma (index) > = 95%, vagy > = 99% az izolátumok 87,4%-ánál (n=270). A törzsek 50,8%-ának (n=157) az atipikussági indexe (Tin) 0,25-0,49 volt, azaz ezek a törzsek atipikusként jellemezhetők. A MALDI ID-score az izolátumok 95,5%-a (n=295) > = 2,0, azaz jó faj azonosítást mutatott, a többi izolátum ID pontszáma 1,7-1,9 volt, ami az általános azonosítást jelzi. A Klebsiella nemzetségbe tartozó Gram-negatív pálcikák PCA-analízise lehetővé tette, hogy 4 fő klaszterre bontsák azokat, és az izolátumok jelentős hasonlóságát mutatták ki, és a RAPD-analízissel együtt lehetővé tették a kórokozók kórházi átvitelének megerősítését. A 16S rRNS analízis eredményei alapján a Klebsiella pneumoniae izolátumok összehasonlítását végeztük, amelyek a fertőzés közös eredetére utaltak. Különböző azonosítási módszerek megállapították, hogy a törzsek 76,1%-ánál (n=235) az eredmények teljes egybeesését rögzítették. A legnagyobb azonosítási pontosságot a 16sRNS analízis mutatja, de a sebesség a MALDI-TOF esetében.

Az antibiotikum érzékenység eredményei azt mutatták, hogy az izolátumok 62,8%-a (n=194) volt MDR, 7,4% (n=23) EDR, 28,8% (n=89) nem MDR. 1% (n=3) törzset tulajdonítottunk a PDR-nek: 2 - P. putida és 1 - P. aeruginosa. A vizsgált enterobaktériumok 33,8%-a (n=25) termelt ESBL-t egy másik, 47 vizsgált izolátumból álló csoportból (83,9%), amely OXA-48-at termelt, amelyek között minden izolátum MDR volt. A gombatörzsek túlnyomó többsége (82,9%) rezisztens volt a flukonazolra, ami ennek a gyógyszernek a leggyakoribb választása a gombás fertőzés empirikus kezelésével magyarázható.

Az Achromobacter xylosoxidans (№ LMU-147) és a Serratia marcescens (№ LMU-48) tenyészeteket izoláltuk, amelyekkel igazolták a HAI-k kiváltó szerepét. Az izolált törzsek az UA osztályozás (US CDC besorolás - Biosafety level 1) alapján IV. osztályú patogenitásúak, de behatolhatnak a belső szervekbe, kifejezettebb fogazás szempontjából. A Candida utilis (LMU-127) egy alacsony patogenitású törzs, amely nem rendelkezik invazív tulajdonságokkal.

Ötvenöt új szintetizált tiazol-származékot használtak új, antibiotikus hatású kémiai vegyületek felkutatására és tanulmányozására. A 3-[5-(1H-indol-3-ilmetilén)-4-oxo-2-tioxotiazolidin-3-il]-propánsav kifejezett gombaellenes hatást fejtett ki, minimális gátló koncentrációval a Candida nemzetségbe tartozó gombák ellen 25 μg /mL és szelektív antimikrobiális hatás Escherichia coli ellen 2-[5-(1H-indol-3-ilmetilén)-4-oxo-2-tioxotiazolidin-3-il]-etánszulfonsavban, hasonló hatással (MIC=25 μg) /ml). A Staphylococcus aureus csoporttal szemben a legaktívabbak a 2-(5-ilidén-4-oxo-2-tioxo-tiazolidin-3-il)-szukcinimidek voltak, amelyek terminális fragmense a C5 pozícióban volt.

Olyan 2-ciano-2-[5-(etoxi-metilén)-4-oxo-3-fenil-tiazolidin-2-ilidén]-N-(o-tolil)-acetamid-származékhoz, amely nem tartalmaz fenilén-amin- vagy benzilidén-csoportot. a tiazolidon mag C5 pozíciójában lévő szerkezet mutatta a legnagyobb aktivitást a Pseudomonas aeruginosa multirezisztens klinikai törzsével szemben.

Egy laboratóriumi állatmodell az antimikrobiális hatású „vezető vegyület” immunotoxikus/allergén/akut toxikus hatását vizsgálta. Immunotoxikus és allergén hatást nem találtak, de mérsékelt gyulladáscsökkentő hatást tapasztaltak. A CD3 T-limfociták abszolút számának 21,46%-os növekedésének hátterében a CD22 B-limfociták mennyiségi szintjének enyhe csökkenése (1,98%-kal). A szupresszor link aktiválása némileg csökkentette az immunregulációs indexet (a mutató megbízhatatlan).

A vizsgált anyagnak a laboratóriumi állatok immunglobulin- és interleukinszintjére gyakorolt ​​hatása az IgA szignifikáns, 21,4%-os csökkenését (p <0,05) és az IgG 21,2%-os növekedését mutatta. Így a fagocita rendszer aktivitása nőtt a neutrofilek fagocitaszámának növekedése és abszorpciós tulajdonságai tekintetében. Az ilyen biológiai aktivitás szelektivitása hasznos lehet bizonyos immunpatológiai állapotok kezelésében.

A gombaellenes hatást kísérő azonosított hatások a politargetatív hatású "gyógyszerszerű molekula" további tanulmányozásának kilátásait jelzik.

A HAI prevalenciájának, regisztrációjuknak, a specifikus diagnosztika helyzetének elemzése, a mikrobioizolátumok klinikai anyagból történő azonosításának korszerű módszereinek összehasonlítása a mikrobiológiai kutatások színvonalának emelésére, a standardizált regisztrációs rendszer bevezetésére, a nozokomiális kutatásokra utal. potenciálisan káros egészségügyi hatásokkal járó fertőzések.

Az értekezés eredményei és az izolátumok biológiai tulajdonságainak kutatása szerint a megfelelő törzseket az Ukrán Nemzeti Tudományos Akadémia Mikrobiológiai és Virológiai Intézetének letéteményesében helyezték el.

A kutatás alapján 2 használati minta szabadalom került kiadásra. Ezenkívül a molekuláris dokkolási vizsgálatok kimutatták, hogy a "vezető vegyület", a 7-(3,4-dimetoxi-fenil)-5-metil-3H-tiazolo[4,5-b]piridin-2-on jól kötődik kiválasztott fehérjéhez. célpontokat a referencia N21 inhibitorhoz és a ciprofloxacinhoz képest.

Kulcsszavak Healthcare-Associated Infections (HAI), nozokomiális fertőzések, antimikrobiális rezisztencia, antibiotikum rezisztencia, eszközhöz kapcsolódó kórokozók, antimikrobiális aktivitás, gombaellenes aktivitás, 4-tiazolidinonok, tiazolok, celluláris immunitás, immunotróp hatás, tengerimalacok, ritka kórokozók, MALDI.

Publikációk. A szakdolgozat anyagai szerint 10 cikk jelent meg, ebből 8 cikk a Web of Science és/vagy Scopus folyóiratokban indexelt, cikk az ukrán szakmai folyóiratban ("B" kategória), 1 cikk nem szakmai folyóiratban.

A munka eredményeit 17 konferencián ismertették, köztük szóbeli beszámoló formájában 3 Ukrajnán kívüli nemzetközi konferencián és 1 Ukrajnában tartott konferencián.

A munkaeredmények alapján 2 használati minta szabadalom és 3 bizonyítvány jelent meg a mikroorganizmus törzs kezdeti lerakódásáról.