Étude observationnelle de l'association entre la maladie parodontale et la maladie cardiovasculaire

Une association possible entre les maladies parodontales et les maladies cardiovasculaires a été émise pour la première fois dans les années 1980. Des études épidémiologiques réalisées au cours des 20 dernières années ont montré une forte corrélation entre les maladies parodontales et les maladies cardiovasculaires. Cependant, la littérature est quelque peu divisée, car certaines études ont montré une corrélation modérée tandis que d'autres ont montré des corrélations indépendantes (insignifiantes) entre les deux. Cela laisse un vide dans les connaissances des investigateurs qui doivent être réunies par des études spécifiques. Des rapports suggèrent que 52 % des plaques d'athérosclérose étudiées contiennent les mêmes agents pathogènes qui causent la parodontite. C'est la raison pour laquelle ce sont ces bactéries qui seront étudiées au cours de cette étude.

La maladie parodontale, connue sous le nom de gingivite ou de parodontite, est causée par la présence de bactéries dans les poches gingivales de la bouche qui, avec le temps, peuvent provoquer une inflammation systémique par la production d'endotoxines. Quelques exemples de bactéries qui causent la maladie parodontale comprennent Porphyromonas gingivalis et Aggregatibacter actinomycetemcomitans. Ce sont des bactéries gram-négatives anaérobies qui sont capables de prospérer dans l'espace sous-gingival après avoir réussi à s'établir. Ces deux bactéries sont connues pour envahir les cellules épithéliales buccales, créant la possibilité qu'elles puissent envahir les cellules épithéliales ailleurs, comme dans les vaisseaux coronaires. Ces bactéries seront cultivées à partir du patient et leurs quantités relatives telles que déterminées par des techniques de culture seront utilisées pour évaluer la prévalence de la maladie parodontale chez le patient. P. gingivalis est d'une importance particulière car on sait qu'il se trouve chez les patients atteints de maladie parodontale active et qu'il n'est pas couramment trouvé chez les patients sans maladie parodontale. Il peut être identifié par le pigment noir produit lors de la culture. La Tryptic Soy-Serum-Bacitracin-Vancomycin Agar (TSBV) Agar est un milieu sélectif capable d'isoler A. actinomycetemcomitans. L'identité d'A. actinomycetemcomitans peut être confirmée sur la base de la croissance de colonies "en forme d'étoile" sur la gélose TSBV qui sont catalase positives. La quantité relative de ces bactéries telle que déterminée par la culture sera utilisée pour établir une corrélation avec le niveau de maladie coronarienne en fonction des groupes auxquels chaque sujet est affecté. C'est ainsi que la base d'une association entre les deux conditions peut être déterminée.

L'inflammation systémique survient à la suite de la libération de cytokines pro-inflammatoires en réponse à une infection. Certaines des cytokines libérées comprennent la protéine C-réactive à haute sensibilité (hs-CRP), l'interleukine-1 (IL-1) et l'interleukine-6 ​​(IL-6). La Hs-CRP est une protéine active pendant la phase aiguë de réponse à l'inflammation. Il a été démontré que son niveau dans le sang est nettement élevé dans l'inflammation chronique et qu'il est constamment élevé chez les patients atteints de syndromes coronariens aigus. L'IL-1 est une cytokine pro-inflammatoire qui est également libérée à la suite d'une inflammation systémique. Plus précisément, il s'est avéré qu'il était sécrété en réponse au lipopolysaccharide (LPS) des bactéries gram-négatives et qu'il était élevé chez les patients présentant une maladie parodontale accrue. L'IL-6, comme l'IL-1, est une cytokine pro-inflammatoire qui fait partie de la réponse de phase aiguë à l'infection. Il a été fortement corrélé avec des niveaux croissants de maladie coronarienne et a même été démontré comme un marqueur prédictif de la mortalité dans la maladie coronarienne (CAD). En plus de son rôle dans la coronaropathie, l'IL-6 s'est également avérée élevée dans la maladie parodontale, créant la possibilité de la base du lien entre ces deux maladies.

Le but de cette étude est de parvenir à une meilleure compréhension de la relation entre la maladie parodontale et la maladie coronarienne en corrélant la gravité de la maladie coronarienne avec la présence et la quantité des agents pathogènes parodontaux P. gingivalis et A. actinomycetemcomitans. Le niveau d'inflammation systémique causé par ces agents pathogènes et la maladie coronarienne sera également évalué. Cela déterminera si la maladie coronarienne peut être associée à l'un de ces agents pathogènes spécifiques plus qu'à l'autre et quels niveaux d'inflammation systémique peuvent être associés à ces deux conditions ensemble.

Des échantillons seront obtenus à partir de tissus parodontaux, cultivés, et la quantité d'agents pathogènes spécifiés présents sera corrélée avec le type et l'étendue de la maladie cardiovasculaire du patient. Des tests sanguins seront également effectués pour évaluer le niveau d'inflammation systémique résultant d'une maladie parodontale et d'une maladie cardiovasculaire.

Les sujets seront affectés à l'un des 3 groupes en fonction de leur état cardiovasculaire :

• Le groupe 1 comprendra des patients sans antécédent connu de coronaropathie.
• Le groupe 2 comprendra des patients ayant des antécédents connus de coronaropathie sans antécédent d'infarctus du myocarde (IM).
• Le groupe 3 comprendra des patients ayant des antécédents connus de coronaropathie et d'infarctus du myocarde.

Les dossiers des patients à voir à la clinique de cardiologie seront présélectionnés par un membre de l'équipe de l'étude afin de déterminer si le patient est éligible à l'étude. Les patients seront acceptés dans un cadre privé et une histoire de maladie cardiovasculaire pertinente à l'étude sera prise pour chaque patient qui consent à participer à l'étude. Du fil dentaire propre qui a été utilisé pour prélever un échantillon de liquide gingival entre les dents inférieures du patient. Aucune mesure n'a été prise pour stériliser le fil dentaire, donc des techniques aseptiques appropriées, y compris l'utilisation de gants stériles pour éviter la contamination croisée. Trois échantillons seront prélevés : sur la ligne médiane des dents, derrière l'incisive latérale droite ou gauche et devant la première molaire droite ou gauche. La décision d'échantillonner la bouche droite ou gauche du patient sera aléatoire (jeu de pièces) à moins que le patient n'ait des dents manquantes d'un côté et que l'échantillon doive être prélevé du côté qui donnera un échantillon approprié. Au moins 2 des 3 échantillons doivent être obtenus. Ces échantillons seront placés dans 3 flacons scellés étiquetés (par le numéro d'identification de l'étude et le site de l'échantillon) de bouillon au thioglycolate et cultivés pendant 48 heures. Un échantillon sera ensuite prélevé du fond du milieu thioglycolate à l'aide d'une pipette (pour extraire les bactéries anaérobies) et cultivé sur des milieux spécifiques pour la présence de P. gingivalis, et A. actinomycetemcomitans en utilisant des précautions anaérobies au Centre Médical Universitaire (UMC) de microbiologie laboratoire. P. gingivalis sera cultivé sur une gélose Columbia spécialisée additionnée de sang de mouton, de bacitracine, de colistine et d'acide nalidixique pour sélectionner l'isolement de P. gingivalis. A. actinomycetemcomitans peut être isolé à l'aide d'une gélose trypsique spécialisée soja-sérum-bacitracine-vancomycine (TSBV), une gélose spécialisée qui inhibe les aérobies et les anaérobies gram-positifs et gram-négatifs. Chaque échantillon sera strié sur une plaque de gélose étiquetée avec l'ID de l'étude et l'emplacement de la dent. Les bactéries seront cultivées en utilisant la méthode quad-streak et cultivées pendant 24 à 48 heures et les bactéries pathogènes seront identifiées. P. gingivalis sera identifié sur la base de la croissance de colonies pigmentées noires sur la gélose sélective et A. actinomycetemcomitans sera identifié sur la base de la croissance de colonies en forme d'étoile sur la gélose TSBV. Le niveau de maladie parodontale chez le patient sera évalué par la quantité de croissance sur les plaques, avec un numéro attribué à chaque quadrant dans lequel les bactéries se développent. s'ils ne poussent que dans le premier quadrant, ils recevront une désignation numérique de 1, et la croissance dans les deuxième à quatrième quadrants sera désignée par 2 à 4 respectivement. En utilisant cette méthode, le niveau de bactéries peut être quantifié, 4 étant la désignation de la quantité relative la plus élevée de bactéries. Le niveau de chaque agent pathogène trouvé dans la bouche des patients sera corrélé à la gravité de la maladie coronarienne afin de déterminer s'il existe une corrélation significative. Il sera également déterminé si l'un des agents pathogènes peut être corrélé à la gravité.

En plus du prélèvement gingival, une petite portion (3 ml ou 0,6 c. à thé) du sang du patient sera utilisée pour tester la hs-CRP, l'IL-6 et l'IL-1 en tant que marqueurs systémiques de l'inflammation. L'échantillon utilisé sera prélevé lors de la première visite à la clinique lorsque le patient aura donné son consentement et que l'échantillon gingival sera prélevé. L'échantillon sera prélevé par une infirmière afin d'obtenir les tests nécessaires. 1 ml (0,2 c. à thé) de sérum sera prélevé pour chaque test (0,6 c. à thé au total) et envoyé au laboratoire de pathologie de l'UMC pour analyse. Ces niveaux seront comparés aux valeurs normales d'IL-1 (0-5 pg/mL) et d'IL-6 (5-15 pg/mL) tandis que la hs-CRP sera corrélée en fonction des niveaux croissants. Cela permettra de déterminer le niveau d'infection systémique causée par la parodontite (basée sur le niveau d'IL-1), la maladie coronarienne (basée sur le niveau de hs-CRP) ou les deux (basée sur le niveau d'IL-6). Les résultats individuels seront enregistrés pour analyse statistique.