歯周病と心血管疾患の関連に関する観察研究

歯周病と心血管疾患との関連の可能性は、1980 年代に初めて仮説が立てられました。 過去 20 年間に実施された疫学的研究は、歯周病と心血管疾患との強い相関関係を示しています。 ただし、いくつかの研究では中程度の相関関係が示されている一方で、他の研究では 2 つの間の独立した (重要でない) 相関関係が示されているため、文献は多少分かれています。 これにより、特定の研究を通じてまとめなければならない研究者の知識にギャップが残ります。 研究されたアテローム硬化性プラークの52％が、歯周炎を引き起こすのと同じ病原体を含んでいることが判明したことを示唆する報告がなされています. これが、これらがこの研究の過程で注目されるバクテリアである理由です.

歯肉炎または歯周炎として知られる歯周病は、口内の歯肉ポケットに細菌が存在することによって引き起こされ、時間の経過とともにエンドトキシン産生を通じて全身性炎症を引き起こす可能性があります. 歯周病の原因となる細菌には、ポルフィロモナス・ジンジバリスやアグリガティバクター・アクチノマイセテムコミタンスなどがあります。 これらはグラム陰性の嫌気性細菌であり、定着に成功した後、歯肉縁下の空間で繁殖することができます。 これら 2 つの細菌は、口腔上皮細胞に侵入することが知られており、冠状血管などの他の場所の上皮細胞に侵入する可能性があります。 これらの細菌は患者から培養され、培養技術によって決定されるそれらの相対量は、患者の歯周病の有病率を評価するために使用されます。 P. gingivalis は、活動性歯周病患者に見られ、歯周病のない患者にはあまり見られないことが知られているため、特に重要です。 培養時に生成される黒い色素で識別できます。 トリプシン大豆血清バシトラシン バンコマイシン (TSBV) 寒天は、A. アクチノマイセテムコミタンスを分離できる選択培地です。 A. actinomycetemcomitans のアイデンティティは、カタラーゼ陽性である TSBV 寒天培地上の「星のような」コロニーの成長に基づいて確認できます。 培養によって決定されるこれらの細菌の相対量は、各被験者が割り当てられたグループに基づいて冠動脈疾患のレベルと相関するために使用されます。 これが、2 つの条件間の関連付けの根拠を決定する方法です。

全身性炎症は、感染に反応して炎症誘発性サイトカインが放出される結果として発生します。 放出されるサイトカインには、高感度 C 反応性タンパク質 (hs-CRP)、インターロイキン-1 (IL-1)、インターロイキン-6 (IL-6) などがあります。 Hs-CRP は、炎症に対する急性期反応中に活性化されるタンパク質です。 血液中のそのレベルは、慢性炎症で著しく上昇することが示されており、急性冠症候群の患者で一貫して上昇していることがわかっています. IL-1 は、全身性炎症の結果としても放出される炎症促進性サイトカインです。 具体的には、グラム陰性菌からのリポ多糖（LPS）に応答して分泌されることがわかっており、歯周病が進行している患者で上昇することがわかっています。 IL-6 は、IL-1 と同様に、感染に対する急性期反応の一部である炎症誘発性サイトカインです。 冠動脈疾患のレベルの上昇と強く相関しており、冠動脈疾患 (CAD) の死亡率の予測マーカーとしても実証されています。 CAD におけるその役割に加えて、IL-6 は歯周病でも上昇することがわかっており、これら 2 つの疾患間の関連の基礎の可能性を生み出しています。

この研究の目的は、冠動脈疾患の重症度を歯周病病原体である P. gingivalis および A. actinomycetemcomitans の存在および量と相関させることにより、歯周病と冠動脈疾患との関係をよりよく理解することです。 これらの病原体および冠動脈疾患によって引き起こされる全身性炎症のレベルも評価されます。 これにより、冠動脈疾患がこれらの特定の病原体の1つと他の病原体よりも関連する可能性があるかどうか、および全身性炎症のどのレベルがこれらの状態の両方に関連する可能性があるかが決まります.

歯周組織からサンプルを採取して培養し、存在する特定の病原体の量を患者の心血管疾患の種類と程度と相関させます。 歯周病や心血管疾患の結果として生じる全身性炎症のレベルを評価するために、血液検査も行われます。

被験者は、心血管の状態に基づいて 3 つのグループのいずれかに割り当てられます。

• グループ 1 には、CAD の既往歴のない患者が含まれます。
• グループ2には、以前の心筋梗塞（MI）のないCADの既知の病歴を持つ患者が含まれます。
• グループ 3 には、CAD の既知の病歴と以前の MI を持つ患者が含まれます。

心臓病クリニックで見られる患者のカルテは、患者が研究に適格かどうかを判断するために、研究チームのメンバーによって事前にスクリーニングされます。 患者は私的な設定で同意され、研究に参加することに同意した各患者について、研究に関連する心血管疾患の病歴が取得されます。 きれいなフロスを使用して、患者の下の歯の間から歯肉液のサンプルを採取します。 フロスを滅菌するための対策は講じられていないため、交差汚染を防ぐために滅菌手袋の使用を含む適切な無菌技術を使用してください。 3 つのサンプルが収集されます: 歯の正中線、右または左の側切歯の後ろ、および右または左の第一大臼歯の前。 患者の口の右側または左側からサンプルを採取する決定は、患者の片側の歯が欠けていて、適切なサンプルが得られる側からサンプルを採取する必要がある場合を除き、無作為化 (コイントス) されます。 3 つのサンプルのうち少なくとも 2 つを取得する必要があります。 これらのサンプルを、(研究識別番号およびサンプルの部位によって) ラベルを付けた 3 つのシールされたチオグリコレート ブロスのバイアルに入れ、48 時間培養します。 次に、ピペットを使用してチオグリコレート培地の底からサンプルを取り出し (嫌気性細菌を抽出するため)、大学医療センター (UMC) の微生物学で嫌気性予防措置を使用して、P. ジンジバリスおよび A. アクチノマイセテムコミタンスの存在のために特定の培地で培養します。ラボ。 P.ジンジバリスは、羊の血液、バシトラシン、コリスチン、およびナリジクス酸を添加した特殊なコロンビア寒天培地で培養され、P.ジンジバリスの分離を選択します。 A. actinomycetemcomitans は、特殊なトリプシン大豆血清バシトラシン バンコマイシン (TSBV) 寒天、グラム陽性およびグラム陰性の好気性菌および嫌気性菌を阻害する特殊な寒天を使用して分離できます。 各サンプルは、研究 ID と歯の位置でラベル付けされた寒天プレートにストリークされます。 細菌は、4 ストリーク法を使用して培養され、24 ～ 48 時間培養され、病原菌が特定されます。 P. ジンジバリスは、選択寒天培地での黒色のコロニーの成長に基づいて識別され、A. アクチノマイセテムコミタンスは、TSBV 寒天培地での星状コロニーの成長に基づいて識別されます。 患者の歯周病のレベルは、細菌が増殖する各象限に番号が割り当てられたプレート上の増殖の量によって評価されます。 それらが第 1 象限でのみ成長する場合は番号指定 1 が与えられ、第 2 から第 4 象限での成長はそれぞれ 2 から 4 で指定されます。 この方法を使用して、細菌のレベルを定量化できます。4 は、細菌の相対量が最も高いことを示します。 有意な相関関係があるかどうかを判断するために、患者の口内で見つかった各病原体のレベルを冠動脈疾患の重症度と相関させます。 また、病原体の 1 つが重症度と相関できるかどうかも判断されます。

歯肉サンプリングに加えて、患者の血液の少量 (3 mL または小さじ 0.6) を使用して、炎症の全身マーカーとしての hs-CRP、IL-6、および IL-1 をテストします。 使用されるサンプルは、患者が同意し、歯肉サンプルが採取される最初の診療所訪問中に採取されます。 必要な検査を受けるために、サンプルは看護師によって採取されます。 1 mL (0.2 tsp) の血清を各テスト (合計 0.6 tsp) で採取し、分析のために UMC 病理検査室に送ります。 これらのレベルは、IL-1 (0 ～ 5 pg/mL) および IL-6 (5 ～ 15 pg/mL) の正常値と比較されますが、hs-CRP はレベルの増加に基づいて相関します。 これにより、歯周炎 (IL-1 レベルに基づく)、冠動脈疾患 (hs-CRP レベルに基づく)、またはその両方 (IL-6 レベルに基づく) によって引き起こされる全身感染のレベルを決定できます。 個々の結果は、統計分析のために記録されます。